一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种马铃薯及其制品中α‑茄碱和α‑卡茄碱的测定方法，其步骤主要包括：制备α‑茄碱和α‑卡茄碱待测液、绘制标准曲线、获取样品检测结果，本发明专利技术通过采用在基层检验机构中易推广普及的液相色谱仪，来测定马铃薯及其制品中α‑茄碱和α‑卡茄碱的含量，检测方法与液相色谱‑串联质谱仪法的检测结果相比，相对偏差小于10％，检测方法操作简便，准确度高，可以大范围在基层检验机构中普及，极大的方便了基层检验检测机构。

A method for the determination of \u03b1 - solanine and \u03b1 - kasolanine in potato and its products

【技术实现步骤摘要】
一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法
本专利技术涉及α-茄碱和α-卡茄碱检测领域，具体涉及一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法。
技术介绍
马铃薯又名土豆、洋芋，是继水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物，马铃薯和其它茄科植物一样，植株和块茎中普遍含有一类甾族生物碱的配糖衍生物，通称为龙葵素的物质，它的主要成份为α-茄碱和α-卡茄碱，龙葵素是一类有毒性的生物碱，通常情况下，含量较低，不会影响其食用品质，但当马铃薯因储藏不当，发芽变绿时，会导致龙葵素含量大幅度升高，如若人畜服食0.2g即可出现中毒症状，严重者会出现死亡的危险。马铃薯消费量巨大，但其检测方法与技术存在许多问题，一定程度上阻碍了马铃薯的安全预警和质量监管。α-茄碱和α-卡茄碱是龙葵素类化合物中含量较高的一种化合物，检测α-茄碱和α-卡茄碱的含量基本能反映马铃薯中龙葵素化合物的含量，马铃薯的主要食用部分是肉，少有食用皮和芽。国内外有大量科研学者对龙葵素的提取和检测进行了研究，目前常见的提取方法有浸提法、索氏提取法、回流提取法、超声波提取法、微波提取法、有机试剂萃取共6种方法，常见的检测方法有液相法、液-质法，但是在实际应用过程中存在提取困难、峰型差、检测误差大等问题；在2018年7月国家市场监督管理局发布的，土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定补充检验方法，α-茄碱和α-卡茄碱的提取、净化过程使用酸化乙腈、无水硫酸镁和无水乙酸钠，三种试剂相结合后对样品的吸水能力无法达到最佳状态，即样品中的含水量还没有达到最低，致使α-茄碱和α-卡茄碱提取效果不理想，同时检测方法使用液相色谱-串联质谱仪，其价格较为昂贵，后期的运行和维护费用是液相色谱仪的3～5倍，在基层检验机构中对于此补充方法的推广普及较为困难，因此，迫切需要建立一种提取完全、处理简单、且易于普遍推广的方法来检测马铃薯肉中α-茄碱和α-卡茄碱的含量。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种提取完全、检测准确、普遍推广，适合基层检验机构的马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法，包括以下步骤：(1)制备α-茄碱和α-卡茄碱待测液精确称取一定量的马铃薯的芽、绿皮或肉及其制品试样置于具塞定量离心管中，向其中加入适量蒸馏水，涡旋混匀2min，用酸化甲醇定容，再进行涡旋混匀1min；然后再加入无水硫酸钠、无水乙酸镁，手动剧烈摇动1min后再涡旋混匀1min，将所述具塞定量离心管放入到离心机中离心，吸取上清液；当所述试样为马铃薯芽、绿皮时，取所述上清液置于容量瓶中，然后加入甲醇水溶液定容至刻度，过尼龙微孔滤膜后，即可得所述马铃薯芽、绿皮试样的α-茄碱和α-卡茄碱待测液；当所述试样为马铃薯肉及其制品时，取所述上清液置于试管中，放到氮吹浓缩仪上浓缩近干，然后加入甲醇水溶液复溶，过尼龙微孔滤膜后，即可得所述马铃薯肉及其制品试样的α-茄碱和α-卡茄碱待测液；(2)绘制标准曲线精确吸取α-茄碱和α-卡茄碱标准品溶液，配制形成一系列具有相同体积、不同浓度的α-茄碱和α-卡茄碱标准液，并将该系列α-茄碱和α-卡茄碱标准液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以所述系列α-茄碱和α-卡茄碱标准液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，获得α-茄碱和α-卡茄碱的标准曲线；(3)获取样品检测结果将步骤(1)中制备的所述α-茄碱和α-卡茄碱待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中α-茄碱和α-卡茄碱的质量浓度，进而换算得到待测试样中α-茄碱和α-卡茄碱的含量。进一步，所述液相色谱仪的检测条件为：C18液相色谱柱，规格为250mm×4.6mm，粒径5μm；流动相A为0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈，且流动相A+流动相B＝7+3；流速为0.2ml/min；柱温为30℃；检测波长为195nm；进样量为10μL。进一步，所述试样的制备方法为：将马铃薯芽、绿皮或肉及其制品放入均质器中充分打碎混匀，放入封装容器中，密封并标记，将其置于-20℃下冷冻存放。进一步，所述试样与所述蒸馏水的添加比例为1.0g：3.0ml。进一步，所述马铃薯芽、绿皮试样与所述无水硫酸钠、无水乙酸镁的质量比为1:1:1，所述马铃薯肉及其制品试样与所述无水硫酸钠、无水乙酸镁的质量比为1:2:1。进一步，所述酸化甲醇包括1％甲酸和99％甲醇，所述甲醇水溶液体积浓度为40％。进一步，所述α-茄碱和α-卡茄碱标准品溶液的配制方法为：精确称取α-茄碱和α-卡茄碱各0.0100g标准品置于10mL烧杯中，加入适量甲醇搅拌使之溶解后，转移至10mL容量瓶中用甲醇定容。进一步，所述α-茄碱标准品为纯度≥99.9％的C45H73NO15，所述α-卡茄碱标准品为纯度≥99.9％的C45H73NO14。进一步，所述尼龙微孔滤膜的孔径为0.22μm。进一步，离心条件为在12000r/min下持续4min。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：(1)本专利技术在制备α-茄碱和α-卡茄碱待测液过程中，使用酸化甲醇、无水硫酸钠和无水乙酸镁，与国家市场监督管理局发布的土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量测定补充方法(BJS201806)中的酸化乙腈、无水硫酸镁和无水乙酸钠相比，α-茄碱和α-卡茄碱易溶于本专利技术中的酸化甲醇，且结构不易被破坏，同时无水硫酸钠与无水乙酸镁相结合后的吸水能力比无水硫酸镁与无水乙酸钠相结合的吸水能力要好，酸化甲醇、无水硫酸钠和无水乙酸镁三种试剂的配合使用，使检测样品中的含水量较低，α-茄碱和α-卡茄碱易被提取，且提取含量高。(2)本专利技术通过采用在基层检验机构中易推广普及的液相色谱仪，来测定马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的含量，检测方法与液相色谱-串联质谱仪法的检测结果相比，相对偏差小于10％，同时液相色谱仪价格低，维护成本少，检测方法操作简便，准确度高，可以大范围在基层检验机构中普及，极大的方便了基层检验检测机构。(3)本专利技术方法可以做为马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量测定的补充方法，为基本检验机构检测马铃薯质量安全提供了先进技术支撑，可有效防止马铃薯储存过程中因α-茄碱和α-卡茄碱含量的增高而引起中毒事件，为广大人民群众安全食用马铃薯起到及时保障作用。附图说明图1是试样为马铃薯芽、绿皮时α-茄碱的标准曲线图；图2是试样为马铃薯芽、绿皮时α-卡茄碱的标准曲线图；图3是待测试样为马铃薯芽时的α-茄碱和α-卡茄碱的色谱图；图4是待测试样为马铃薯绿皮时的α-茄碱和α-卡茄碱的色谱图；图5是试样为马铃薯肉、及其制品时α-茄碱的标准曲线图；图6是试样为马铃薯肉、及其制品时α-卡茄碱的标准曲线图；图7是待测试样为马铃薯肉时的α-茄碱和α-卡茄碱的色谱图；图8是待测试样为马铃薯制品时的α-茄碱和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)制备α-茄碱和α-卡茄碱待测液/n精确称取一定量的马铃薯的芽、绿皮或肉及其制品试样置于具塞定量离心管中，向其中加入适量蒸馏水，涡旋混匀2min，用酸化甲醇定容，再进行涡旋混匀1min；然后再加入无水硫酸钠、无水乙酸镁，手动剧烈摇动1min后再涡旋混匀1min，将所述具塞定量离心管放入到离心机中离心，吸取上清液；/n当所述试样为马铃薯芽、绿皮时，取所述上清液置于容量瓶中，然后加入甲醇水溶液定容至刻度，过尼龙微孔滤膜后，即可得所述马铃薯芽、绿皮试样的α-茄碱和α-卡茄碱待测液；/n当所述试样为马铃薯肉及其制品时，取所述上清液置于试管中，放到氮吹浓缩仪上浓缩近干，然后加入甲醇水溶液复溶，过尼龙微孔滤膜后，即可得所述马铃薯肉及其制品试样的α-茄碱和α-卡茄碱待测液；/n(2)绘制标准曲线/n精确吸取α-茄碱和α-卡茄碱标准品溶液，配制形成一系列具有相同体积、不同浓度的α-茄碱和α-卡茄碱标准液，并将该系列α-茄碱和α-卡茄碱标准液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以所述系列α-茄碱和α-卡茄碱标准液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，获得α-茄碱和α-卡茄碱的标准曲线；/n(3)获取样品检测结果/n将步骤(1)中制备的所述α-茄碱和α-卡茄碱待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中α-茄碱和α-卡茄碱的质量浓度，进而换算得到待测试样中α-茄碱和α-卡茄碱的含量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)制备α-茄碱和α-卡茄碱待测液
精确称取一定量的马铃薯的芽、绿皮或肉及其制品试样置于具塞定量离心管中，向其中加入适量蒸馏水，涡旋混匀2min，用酸化甲醇定容，再进行涡旋混匀1min；然后再加入无水硫酸钠、无水乙酸镁，手动剧烈摇动1min后再涡旋混匀1min，将所述具塞定量离心管放入到离心机中离心，吸取上清液；
当所述试样为马铃薯芽、绿皮时，取所述上清液置于容量瓶中，然后加入甲醇水溶液定容至刻度，过尼龙微孔滤膜后，即可得所述马铃薯芽、绿皮试样的α-茄碱和α-卡茄碱待测液；
当所述试样为马铃薯肉及其制品时，取所述上清液置于试管中，放到氮吹浓缩仪上浓缩近干，然后加入甲醇水溶液复溶，过尼龙微孔滤膜后，即可得所述马铃薯肉及其制品试样的α-茄碱和α-卡茄碱待测液；
(2)绘制标准曲线
精确吸取α-茄碱和α-卡茄碱标准品溶液，配制形成一系列具有相同体积、不同浓度的α-茄碱和α-卡茄碱标准液，并将该系列α-茄碱和α-卡茄碱标准液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以所述系列α-茄碱和α-卡茄碱标准液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，获得α-茄碱和α-卡茄碱的标准曲线；
(3)获取样品检测结果
将步骤(1)中制备的所述α-茄碱和α-卡茄碱待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中α-茄碱和α-卡茄碱的质量浓度，进而换算得到待测试样中α-茄碱和α-卡茄碱的含量。


2.根据权利要求1所述的一种马铃薯及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定方法，其特征在于：所述液相色谱仪的检测条件为：C18液相色谱柱，规格为250mm×4.6mm，粒径5μm；流动相A为0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈，且流动相A+流动相B＝7+3；流速为0.2ml/min；柱温为30℃；检测波长为195nm；进样量为10μL。...

【专利技术属性】
技术研发人员：任兴权，刘盼，苏菊，王蓉，曾文锦，周丽，史蓉，李婷婷，段婷，
申请(专利权)人：酒泉市食品检验检测中心，
类型：发明
国别省市：甘肃;62