一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法。本发明专利技术对测定指纹图谱的仪器、色谱柱、流动相、检测波长等条件进行了优选，建立了液相指纹图谱测定条件并进行了方法学考察，根据多批次中试样品建立了小儿金青颗粒的标准指纹图谱，并确定了14个共有峰，并对相关共有峰进行了药材归属和成分指认。本发明专利技术方法能有效地表征小儿金青颗粒的质量，有利于指导本品中试试制及商业化生产，全面监控药品质量，确保临床用药的安全性和有效性。本发明专利技术方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。

A HPLC fingerprint method for the determination of xiaoerjinqing granules

【技术实现步骤摘要】
一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法
本专利技术属于中药检测分析领域，具体涉及一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱分析方法的建立及其指纹图谱。
技术介绍
小儿金青颗粒为健民药业集团股份有限公司正在研发的中药六类新药，其处方来源于名老中医的临床经验方，由青黛、金果榄、青果、蒲公英、绿茶、胖大海六味药材组成，经现代工艺研制而成，具有清热解毒、利咽止痛的功效，用于外感火毒热邪蕴结壅遏上焦引起的小儿咽喉红肿疼痛、溃烂，兼口舌生疮等，小儿咽炎、喉炎、扁桃体炎、上呼吸道感染及疱疹性咽峡炎见上述证候者。指纹图谱作为从整体上对中药进行质量控制的一种技术，自2010版开始已载入中国药典，其优势比起单一组分甚至多组分定性定量更加明显，特别是针对药物来源广、成分复杂、物质基础不明确的中药复方制剂，指纹图谱可实现对中药内在质量的综合评价和对其整体物质的有效控制，是目前中药及其制剂质量控制的有效手段之一。为了更好的监控和评价本品质量，指导后续的工艺研究、中试试制及规范化生产，本专利技术提供一种小儿金青颗粒的液相指纹图谱分析方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于建立一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测分析方法，从而达到从整体上全面表征和评价本品质量，指导本品研制开发和工业化生产。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法，所述小儿金青颗粒由以下重量份数的原料制成：青黛20-40份、金果榄60-120份、青果60-120份、蒲公英60-120份、绿茶叶40-80份、胖大海20-40份，该检测方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：将待测小儿金青颗粒研细，取0.5-5重量份，加入有机溶剂5-50体积份进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，取续滤液；(2)对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、靛玉红、古伦宾、咖啡酸对照品，用甲醇配制成每1体积份分别含没食子酸、靛玉红、古伦宾、咖啡酸0.00005-0.0015重量份的各单一对照品溶液；(3)分别精密吸取供试品溶液和各对照品溶液5-20μl，用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为220-270nm，所述高效液相色谱仪的固定相为C18色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，流速为0.5-2ml/min，柱温为25～35℃，理论板数不低于3000；(4)分别记录供试品溶液和对照品溶液0～95min的色谱图，利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的色谱图分别经过数据导入、多点矫正和数据匹配，得到小儿金青颗粒的标准指纹图谱，并进行相似度评价；所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。优选地，所述有机溶剂为甲醇。优选地，所述提取的方法为超声。优选地，所述微孔滤膜的孔径为0.45um。优选地，所述紫外检测器的设定检测波长为220nm。优选地，所述梯度洗脱中，各时间段及流动相B的体积比变化分别为：0～20min，流动相B90～75％；20～30min，流动相B75～65％；30～60min，流动相B65～40％；60～80min，流动相B40～10％；80～93min，流动相B10％；93～95min，流动相B10～90％。具体洗脱程序见表1。表1HPLC梯度洗脱程序时间min流动相A(％)流动相B(％)0～2010-2590-7520～3025-3575-6530～6035-6065-4060～8060-9040-1080～93901093～9590-1010-90优选地，所述柱温为25℃。所述的标准指纹图谱有14个共有峰，其中1号峰归属于青果﹑绿茶，2号峰归属于绿茶，3号峰归属于青果，4、5、6、7、8号峰归属于绿茶，9号峰归属于金橄榄，10号峰归属于蒲公英，11、13、14号归属于青黛，12号峰归属于青黛、胖大海、蒲公英，并经指认其中1号峰为没食子酸、5号峰为咖啡酸、9号峰为古伦宾、11号峰为靛玉红。优选地，与标准指纹图谱对比分析，以相似度大于0.880的判定为合格品。本专利技术的有益效果是：本专利技术研究建立了新药小儿金青颗粒的一种液相指纹图谱的检测分析方法及其标准液相指纹图谱，确立了14个共有特征峰，并进行了药材归属，且指认了其中4个成分，并以相似度大于0.880为合格品的判定依据，实现了从整体上对小儿金青颗粒质量的监控和评价，为本品后续的开发研制及工业化生产提供技术手段和评价方法。另外，本专利技术方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、费用低等优点。附图说明图1是最佳条件制备的液相色谱图。图2是30％甲醇提取后的液相色谱图。图3是乙醇提取后的液相色谱图。图4是50％乙醇提取后的液相色谱图。图5是乙酸乙酯提取后的液相色谱图。图6是波长为240nm时所得的液相指纹图谱。图7是波长为270nm时所得的液相指纹图谱。图8是波长为300nm时所得的液相指纹图谱。图9是流动相梯度洗脱条件1时所得的液相指纹图谱。图10是流动相梯度洗脱条件2时所得的液相指纹图谱。图11是柱温为30℃时所得的液相指纹图谱。图12是柱温为35℃时所得的液相指纹图谱。图13是15批样品的指纹图谱叠加图。图14是标准对照指纹图谱。图15是样品指纹图谱与各药材色谱图对比归属图。图16是样品指纹图谱与各对照品色谱图对比指认图。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术做进一步地详细说明。仪器与试药：岛津LC-2040CCN型液相色谱仪，包括包括二极管阵列检测器、Labsolutions版工作站；PGJ-10/20-AS型超纯水仪(武汉品冠仪器设备有限公司)；UA800-DH数字式超声波清洗仪(功率800w，频率40kHz，上海欧河机械设备有限公司)；MettlerME203E、MettlerME104E、MettlerTOLEDOXPE105电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。没食子酸对照品(纯度90.8％，批号110831-201605)﹑靛玉红对照品(纯度99.6％，批号110717-201805)﹑古伦宾对照品(纯度99.8％，批号11837-20703)﹑咖啡酸对照品(纯度99.7％，批号110885-201703)均购自中国食品药品检定研究院；甲醇﹑乙醇﹑乙酸乙酯﹑磷酸均为分析纯。小儿金青颗粒为健民药业集团研发中试试制样品，共15批(批号：180301﹑180302、180303﹑180601﹑180本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法，所述小儿金青颗粒由以下重量份数的原料制成：青黛20-40份、金果榄60-120份、青果60-120份、蒲公英60-120份、绿茶叶40-80份、胖大海20-40份，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：/n(1)供试品溶液的制备：将待测小儿金青颗粒研细，取0.5-5重量份，加入有机溶剂5-50体积份进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，取续滤液；/n(2)对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、靛玉红、古伦宾、咖啡酸对照品，用甲醇配制成每1体积份分别含没食子酸、靛玉红、古伦宾、咖啡酸0.00005-0.0015重量份的各单一对照品溶液；/n(3)分别精密吸取供试品溶液和各对照品溶液5-20μl，用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为220-270nm，所述高效液相色谱仪的固定相为C18色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，流速为0.5-2ml/min，柱温为25～35℃，理论板数不低于3000；/n(4)分别记录供试品溶液和对照品溶液0～95min的色谱图，利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的色谱图分别经过数据导入、多点矫正和数据匹配，得到小儿金青颗粒的标准指纹图谱，并进行相似度评价；/n所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。/n...

【技术特征摘要】
1.一种小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法，所述小儿金青颗粒由以下重量份数的原料制成：青黛20-40份、金果榄60-120份、青果60-120份、蒲公英60-120份、绿茶叶40-80份、胖大海20-40份，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：将待测小儿金青颗粒研细，取0.5-5重量份，加入有机溶剂5-50体积份进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，取续滤液；
(2)对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸、靛玉红、古伦宾、咖啡酸对照品，用甲醇配制成每1体积份分别含没食子酸、靛玉红、古伦宾、咖啡酸0.00005-0.0015重量份的各单一对照品溶液；
(3)分别精密吸取供试品溶液和各对照品溶液5-20μl，用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为220-270nm，所述高效液相色谱仪的固定相为C18色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，流速为0.5-2ml/min，柱温为25～35℃，理论板数不低于3000；
(4)分别记录供试品溶液和对照品溶液0～95min的色谱图，利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的色谱图分别经过数据导入、多点矫正和数据匹配，得到小儿金青颗粒的标准指纹图谱，并进行相似度评价；
所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。


2.如权利要求1所述小儿金青颗粒的HPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇。


3.如权利要求1所述小儿金青颗粒的HPL...

【专利技术属性】
技术研发人员：明凯利，万佳丽，王丫头，向阳，卢敏，熊桓，曾添，宋畅，朱雯，王灵均，徐茜，丁沁柯，朱哲锋，蔡威，
申请(专利权)人：健民药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42