一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法，采用水提醇沉法提取肉桂多糖，得到肉桂粗多糖物质，粗多糖水解后，水解液经有机滤膜过滤，采用高效液相色谱‑电喷雾检测器法(HPLC‑CAD)测定肉桂多糖中的单糖组成。本发明专利技术采用高效液相色谱‑电喷雾检测器检测肉桂多糖的单糖组成，水解后的多糖样品直接进样，无需衍生化，缩短了前处理所需的时间，本方法可快速、准确检测出肉桂多糖中的单糖组成，且重复性和回收率好，适用于大批量样品的分析。

A method for the determination of monosaccharide in cinnamon polysaccharide

【技术实现步骤摘要】
一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法
本专利技术属于理化检验
，具体涉及分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法。
技术介绍
多糖具有广泛的生理活性，如：免疫调节作用、抗肿瘤、降血脂、抗衰老等作用。活性多糖组成往往比较复杂，对其进行单糖组成分析，对于进一步确定其结构，具有重要意义。多糖的单糖组成测定有多种方法，如薄层色谱法、气相色谱法、高效毛细管电泳法、柱前衍生-高效液相色谱法等。但目前通过高效液相色谱-电喷雾检测器法(HPLC-CAD)分析肉桂多糖的单糖组成未见公开报道，为方便、高效检测肉桂多糖的单糖组成，建立高效液相色谱-电喷雾检测器法(HPLC-CAD)分析肉桂多糖的单糖组成测定方法意义重大。
技术实现思路
本专利技术弥补了现有分析技术的不足，提供一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法。本专利技术的技术方案是提供一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法，其具体方法为：①提取粗多糖：采用水提醇沉法提取肉桂多糖，得到多糖物质；②配制单糖混合标准溶液：配制鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖7种单糖混合标准溶液，浓度为1000ug/ml；③样品前处理及分析：准确称取一定量多糖样品，加入浓度2mol/L的稀硝酸溶液2mL，于120℃条件下反应水解15小时。水解完成待样品冷却至室温后，将其转移至比色管中，再用氢氧化钠溶液(1mol/L)中和至pH＝7.0，用超纯水定容到刻度线，离心后上清液过有机滤膜，供分析用。④标准曲线的绘制：将1000ug/ml7种单糖混合标准储备液，逐级稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml系列标准溶液，用水定容，摇匀，得6级工作标准溶液；对上述系列标准溶液进行液相色谱分析，以各单糖的峰面积和对应的质量浓度进行线性回归分析，求得7种单糖的标准曲线；⑤数据处理与检测：按外标法，根据回归方程，由组分峰面积计算组分浓度；进一步地，在步骤③中，称取的粗多糖量为6mg；进一步地，在步骤③中，比色管体积为15ml；进一步地，在步骤③中，有机滤膜为0.45μm尼龙滤膜过滤；进一步地，在步骤③和④中，液相色谱配备的检测器为电喷雾检测器(CAD)；进一步地，在步骤③和④中，高效液相色谱条件为：色谱柱：Grace_AlltechPrevailCarb-ES5um,4.6x250mm糖色谱柱；进样量15μl；柱温为25℃；流速为0.8ml/min，，梯度洗脱程序为：进一步地，在步骤③和④中，检测器为电喷雾检测器(CAD)，主要参数为：雾化器温度：35℃。本专利技术的有益效果是：本专利技术使用的仪器和设备均为实验室常规分析设备，专利技术方法易于推广，检测成本低；本专利技术采用电喷雾检测器(CAD)，方法的前处理不需要进行衍生化反应，提高了检测效率。本专利技术首次提出了采用高效液相色谱-电喷雾检测器法(HPLC-CAD)测定肉桂多糖的单糖组成分析方法，方法分析速度快，重复性和回收率好，适用于大批量样品的分析。附图说明图1是七种单糖的标准色谱图；其中，1-鼠李糖，2-阿拉伯糖，3-果糖，4-甘露糖，5-葡萄糖，6-蔗糖，7-麦芽糖图2是肉桂多糖样品色谱图；其中，1-鼠李糖，2-阿拉伯糖，3-果糖，5-葡萄糖，6-蔗糖，7-麦芽糖具体实施方式为便于更好的理解本专利技术，本专利技术结合具体的实施例进一步说明：实施例1仪器与试剂、材料：七种单糖的标准品：鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖(德国Dr.Ehrensorfer公司)；硝酸、乙醇和氢氧化钠均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司))；试验用水为二级水。液相色谱仪：型号为U3000RSLC(配置电喷雾检测器(CAD)，美国Thermo-Fisher公司)；冷冻干燥器(北京博医康实验仪器有限公司，FD-IA-50)；离心机：(型号为Sigma3-30K德国SIGMA公司)；涡旋振荡器：(型号为945066美国HENRYTROEMNERLLC公司)；其他：0.45μm尼龙滤膜过滤头(上海兴亚净化材料厂)，布氏漏斗(巩义市予华仪器有限责任公司)，电热恒温水浴锅(德国MEMMERT公司)、旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)。提取粗多糖：采用水提醇沉法提取肉桂多糖，得到多糖物质；配制单糖混合标准溶液：配制鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖7种单糖混合标准溶液，浓度为1000ug/ml；样品前处理及分析：准确称取肉桂多糖样品6mg，加入浓度2mol/L的稀硝酸溶液2mL，于120℃条件下反应水解15小时。水解完成待样品冷却至室温后，将其转移至比色管中，再用氢氧化钠溶液(1mol/L)中和至pH＝7.0，用超纯水定容到刻度线，离心后上清液过有机滤膜，供分析用。高效液相色谱条件：色谱柱：Grace_AlltechPrevailCarb-ES5um,4.6x250mm糖色谱柱；进样量15μL；柱温为25℃；流速为0.8mL/min，梯度洗脱程序如表1所示：表1高效液相色谱梯度洗脱条件标准曲线的绘制：将1000ug/ml7种单糖混合标准储备液，逐级稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml系列标准溶液，用水定容，摇匀，得6级工作标准溶液；对上述系列标准溶液进行液相色谱分析，以各单糖的峰面积和对应的质量浓度进行线性回归分析，求得7种单糖的标准曲线；7种单糖的线性回归方程、相关系数、检出限和定量限如表2所示。七种单糖的标准色谱图见图1。表27种单糖的线性回归方程、相关系数、检出限和定量限精密度：为了考察方法的精密度，以水解后的肉桂多糖样品进行5次日内重复实验，测定结果表明7种单糖日内测定结果的相对标准偏差在2.24％～6.51％之间，表明方法的日内精密度良好。同时，对样品进行了5天日间重复实验，测定结果表明7种单糖日间测定结果的相对标准偏差在3.12％～8.44％之间，结果表明该方法的日间重复性良好。回收率：采用样品加标法，对水解后的肉桂多糖样品在高、中、低三个含量水平上进行了回收率的测定，结果表明，7种单糖的平均回收率的结果在94.16％-100.48％之间，回收率较高，满足分析要求。实际样品的测定：采用本专利技术建立的方法测定1个肉桂多糖的单糖组成,肉桂多糖样品色谱图见图2；样品中含有鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖，摩尔比为：18.2:50.0:91.6:22.2:8.8:5.8。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：/n①提取粗多糖：采用水提醇沉法提取肉桂多糖，得到多糖物质；/n②配制单糖混合标准溶液：配制鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖7种单糖混合标准溶液，浓度为1000ug/ml；③样品前处理及分析：准确称取一定量多糖样品，加入浓度2mol/L的稀硝酸溶液2mL，于120℃条件下反应水解15小时。水解完成待样品冷却至室温后，将其转移至比色管中，再用1mol/L的氢氧化钠溶液()中和至pH＝7.0，用超纯水定容到刻度线，离心后上清液过有机滤膜，供分析用；④标准曲线的绘制：将1000ug/ml7种单糖混合标准储备液，逐级稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml系列标准溶液，用水定容，摇匀，得6级工作标准溶液；对上述系列标准溶液进行液相色谱分析，以各单糖的峰面积和对应的质量浓度进行线性回归分析，求得7种单糖的标准曲线；⑤数据处理与检测：按外标法，根据回归方程，由组分峰面积计算组分浓度。/n

【技术特征摘要】
1.一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
①提取粗多糖：采用水提醇沉法提取肉桂多糖，得到多糖物质；
②配制单糖混合标准溶液：配制鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖7种单糖混合标准溶液，浓度为1000ug/ml；③样品前处理及分析：准确称取一定量多糖样品，加入浓度2mol/L的稀硝酸溶液2mL，于120℃条件下反应水解15小时。水解完成待样品冷却至室温后，将其转移至比色管中，再用1mol/L的氢氧化钠溶液()中和至pH＝7.0，用超纯水定容到刻度线，离心后上清液过有机滤膜，供分析用；④标准曲线的绘制：将1000ug/ml7种单糖混合标准储备液，逐级稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml系列标准溶液，用水定容，摇匀，得6级工作标准溶液；对上述系列标准溶液进行液相色谱分析，以各单糖的峰面积和对应的质量浓度进行线性回归分析，求得7种单糖的标准曲线；⑤数据处理与检测：按外标法，根据回归方程，由组分峰面积计算组分浓度。


2.根据权利要求1所述的分析肉桂...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆冰琳，许蔼飞，孟冬玲，范忠，朱静，唐桂芳，陈志燕，周芸，蒋光辉，
申请(专利权)人：广西中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广西;45