【技术实现步骤摘要】
检测Ⅰ型脊灰减毒活疫苗核酸突变的质谱检测引物组及其方法
本专利技术属于单核苷酸多态性检测
，具体涉及一种检测Ⅰ型脊灰减毒活疫苗核酸突变的质谱检测引物组及其方法。
技术介绍
Ⅰ型脊髓灰质炎减毒活疫苗株—SabinⅠ株是将脊髓灰质炎病毒Mahoney株通过不断传代和筛选纯化，选育出的免疫原性好，神经毒力低的病毒株。因为SabinⅠ株是活病毒，所以口服后会引起隐性感染，刺激人体在粘膜免疫和体液免疫的过程中产生保护性抗体。这些保护性抗体会在人体遇到野生病毒攻击时，对人体提供保护。此外，脊灰减毒疫苗株在人体内经过繁殖后会以活病毒形式通过肠道排出体外。不致病的减毒活疫苗病毒在环境中存活，可以刺激周围人群产生保护性抗体，从而形成保护屏障，阻断脊灰病毒在自然界的传播。减毒疫苗株是活病毒，在繁殖的过程中有可能产生突变，其中有很少部分会有恢复野毒毒性的倾向，其非编码区480位点和525位点核酸发生回复突变，可能导致毒力升高，并使接种疫苗的儿童发生疫苗相关麻痹性脊灰(VAPP)。因此，在脊髓灰质炎减毒活疫苗生产和使用的过程中，通过监...
【技术保护点】
1.一种Ⅰ型脊灰减毒活疫苗非编码区480位点和525位点核酸质谱检测引物组，其特征在于，所述引物组包括四条引物或与其同源性为90％的核苷酸序列；所述四条引物具体为：/n特异性上游引物S5：5’-GCCTACCTATGGCTAACGCC-3’；/n特异性下游引物A5：5’-CACACTCAATGGAGCGAATCC-3’；/n通用性上游引物S2-2：5’-AATCCTCCGGCCCCTGAATG-3’；/n通用性下游引物A2Y：/n5’-GTCACCATAAGCAGCCACAATAAAATAAAAG-3’；/n延伸引物PY1-P4：5’-GTTTGTGACCACCTGC-3’...
【技术特征摘要】
1.一种Ⅰ型脊灰减毒活疫苗非编码区480位点和525位点核酸质谱检测引物组，其特征在于，所述引物组包括四条引物或与其同源性为90％的核苷酸序列；所述四条引物具体为：
特异性上游引物S5：5’-GCCTACCTATGGCTAACGCC-3’；
特异性下游引物A5：5’-CACACTCAATGGAGCGAATCC-3’；
通用性上游引物S2-2：5’-AATCCTCCGGCCCCTGAATG-3’；
通用性下游引物A2Y：
5’-GTCACCATAAGCAGCCACAATAAAATAAAAG-3’；
延伸引物PY1-P4：5’-GTTTGTGACCACCTGC-3’；
延伸引物PY1-P1：5’-TCGTAACGCGCAAG-3’。
2.一种Ⅰ型脊灰减毒活疫苗非编码区480位点和525位点核酸质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：从检测样品中获得脊髓灰质炎病毒，并提取RNA；
步骤2：采用权利要求1所述的特异性上游引物S5、特异性下游引物A5、通用性上游引物S2-2及通用性下游引物A2Y，利用模板RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进行RT-PCR扩增，得到含有Ⅰ型脊灰减毒非编码区480位点和525位点的片段；其中，RT-PCR扩增采取一步法或两步法完成；
步骤3：对步骤2所得的片段进行去磷酸化处理，得到脱磷酸片段；
步骤4：利用权利要求1所述的延伸引物PY1-P4和延伸引物PY1-P1对步骤3所得脱磷酸片段进行单碱基延伸反应；
步骤5：对步骤4延伸后的样品进行脱盐纯化处理；
步骤6：脱盐处理后用核酸质谱仪检测分析目标基因特定位点的基因序列。
3.如权利要求2所述的Ⅰ型脊灰减毒活疫苗非编码区480位点和525位点核酸质谱检测方法，其特征在于，一步法RT-PCR采用25μL扩增反应体系，其包括以下组分：2×Buffer12.5μL、酶1.0μL、上游引物(S5或S2-2)3.0μL，下游引物(A5或A2Y)3.0μL，模板RNA1.0μL，DEPC水4.5μL；
一步法扩增反应条件：50℃30min；95℃5min；95℃30s，56-70℃10s，72℃10-20s，25-40个循环；72℃1min；4℃恒温。
4.如权利要求2所述的Ⅰ型脊灰减毒活疫苗非编码区480位点和525位点核酸质谱检测方法，其特征在于，两步法RT-PCR中逆转录采用50μL反应体系，其包括以下组分：dNTP1.0μL、DEPC水28.0μL、下游引物(A2-2或A5)1.0μL、5×Buffer10.0μL、DT...
【专利技术属性】
技术研发人员：范行良，国泰，杜加亮，于晴川，韩菲，贾春翠，李景云，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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