定量检测样品中乙型肝炎病毒RNA的方法及其系统技术方案

本发明专利技术提供一种定量检测样品中乙型肝炎病毒RNA的方法及其系统，所述方法通过直接定量样品中乙型肝炎病毒DNA的量来定量所述样品中乙型肝炎病毒RNA的量。本发明专利技术方法及其系统对其他病原体或人基因组无非特异扩增，特异性好；在没有HBV RNA标准物质的情况下，通过直接定量HBV DNA的量来定量HBV RNA的量，简单、方便。

Method and system for quantitative detection of hepatitis B virus RNA in samples

【技术实现步骤摘要】
定量检测样品中乙型肝炎病毒RNA的方法及其系统
本专利技术涉及分子生物学
，特别涉及一种定量检测样品中乙型肝炎病毒RNA的方法及其系统。
技术介绍
乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)属嗜肝DNA病毒科，基因组长约3.2kb，为部分双链环状DNA(relaxedcircularDNA，rcDNA)。HBVDNA长链为负链，位置和长度相对固定。短链为正链，其长度可变，约为负链的50％～80％。乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的公共卫生问题，世界卫生组织报告全球约有20亿人感染过HBV，其中3-4亿人为慢性HBV感染。在我国肝硬化和肝癌患者中，由HBV感染引起的比例分别高达60％和80％以上。现有的治疗药物主要为核苷酸类似物，虽然能够有效抑制病毒，但是存在长期用药、病毒耐药、病毒载量反弹等问题。根据HBV的复制感染机制，慢乙肝难以治愈和引起停药后病毒学反弹的主要原因是存在于感染肝细胞核内的病毒复制模板-HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)难以清除。目前的停药指标主要有三种。一是血清HBVDNA低于检测下限作为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测样品中乙型肝炎病毒RNA的方法，其特征在于，所述方法通过直接定量样品中乙型肝炎病毒DNA的量来定量所述样品中乙型肝炎病毒RNA的量。/n

【技术特征摘要】
1.一种定量检测样品中乙型肝炎病毒RNA的方法，其特征在于，所述方法通过直接定量样品中乙型肝炎病毒DNA的量来定量所述样品中乙型肝炎病毒RNA的量。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过PCR方法和乙型肝炎病毒DNA定量标准品的定量标准曲线来定量所述乙型肝炎病毒DNA的量。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1：提取所述样品中乙型肝炎病毒的核酸DNA和RNA；
步骤2：针对乙型肝炎病毒DNA和RNA序列的共同保守区域设计特异性上、下游引物和探针；
步骤3：用所述引物和探针分别配制含逆转录酶的荧光PCR试剂和不含逆转录酶的荧光PCR试剂，用PCR方法检测所述样品中乙型肝炎病毒的核酸DNA和RNA，其中用不含逆转录酶的荧光PCR试剂检测乙型肝炎病毒DNA时设置标准曲线对样品中乙型肝炎病毒DNA进行标定；和
步骤4：根据以下公式计算样品中的乙型肝炎病毒RNA量：



其中CtRNA+DNA为含逆转录酶的荧光PCR试剂扩增Ct值，CtDNA为不含逆转录酶的荧光PCR试剂扩增Ct值，QDNA为样品中标定的乙型肝炎病毒DNA浓度，QRNA为样品中的乙型肝炎病毒RNA的浓度。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤3中的PCR方法是RT-PCR方法，即在PCR扩增之前，包含一步逆转录酶扩增过程。


5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1中乙型肝炎病...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘利成，冯华华，胡小许，王玲娟，李春明，王鹏志，
申请(专利权)人：江苏宏微特斯医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32