【技术实现步骤摘要】
一种同时检测4种玉米病毒的多重RT-PCR方法
本专利技术涉及一种同时检测4种玉米病毒的多重RT-PCR方法，属于植物病毒检测
技术介绍
玉米是一种重要的经济作物，并在全世界范围内被广泛种植，主要的种植地有北美、亚洲、非洲和拉丁美洲。中国是世界上第二大玉米消费国和生产国，预计2020年产量将增加至2500万吨。但是，据报道，在玉米生长过程中，有50多种病毒可侵染玉米并造成重大产量损失。这些病毒在玉米中经常形成复合侵染，包括两种或两种以上的病毒的复合侵染。例如，玉米致死性坏死病(MLND)是由玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)和马铃薯Y病毒科病毒中的一种病毒形成复合感染所引起的，其中MCMV与甘蔗花叶病毒(SCMV)形成复合侵染是最常见。玉米致死性坏死病是一种严重的世界性玉米病害，可造成高达100％的产量损失。最近，在与MCMV和SCMV复合侵染所引起的玉米致死性坏死病玉米植株中发现了其他一些玉米病毒的侵染。1978年，首次报道了MCMV和SCMV在玉米中的同时侵染，并引起了玉米致死性坏死病。2016年，Chena...
【技术保护点】
1.一种同时检测4种玉米病毒的多重RT-PCR方法，4种玉米病毒为：玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)、甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米黄花叶病毒(Maize yellow mosaic virus,MaYMV)、玉米相关的整体病毒(Maize-associated totivirus,MATV)，其特征在于，具体包括以下步骤：/n(1)将玉米叶片于研钵中，加入液氮后研磨成粉状，使用TaKaRaMiniBEST UniversalRNAExtraction Kit试剂盒进行提取，...
【技术特征摘要】
1.一种同时检测4种玉米病毒的多重RT-PCR方法，4种玉米病毒为：玉米褪绿斑驳病毒(Maizechloroticmottlevirus,MCMV)、甘蔗花叶病毒(Sugarcanemosaicvirus,SCMV)、玉米黄花叶病毒(Maizeyellowmosaicvirus,MaYMV)、玉米相关的整体病毒(Maize-associatedtotivirus,MATV)，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将玉米叶片于研钵中，加入液氮后研磨成粉状，使用TaKaRaMiniBESTUniversalRNAExtractionKit试剂盒进行提取，将提取的RNA用M-MLVReverseTranscriptas反转录酶进行反转录成cDNA，得到的cDNA可直接进行PCR反应或-80℃度保存备用；
(2)以MCMV，SCMV，MaYMV和MATV的外壳蛋白(CP)基因的保守序列为设计引物，以玉米EF1α基因作为内参基因，将MATV、MaYMV、SCMC、MCMV和EF1α的引物组合在一管中进行扩增，得到扩增产物：
第1对设计引物：EF1αF/EF1αR
EF1αF：5'-GCTTCACGTCCCAGGTCATC-3'
EF1αR：5'-TAGGCTTGGTGGGTATCATC-3'
第2对设计引物：MAF1/MAR1
MAF1：5'-GGACACCTTCGTCAGGCACT-3'
MAR1：5'-CAACTCCTGATTGTTCATTCCTC-3'
第3对引物：MYF1/MYR1
MYF1：5'-GACGCGCTCGCAATAATAAC-3'
MYR1：5'-GACGCGCTCGCAATAATAAC-3'
第4对引物：SC132F/SC627R
SC132F：5'-CAACAAGGGTCCGGTGGGGG-3'
S...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建光，李小琴，李妤，李英娟，胡文丽，陈穗云，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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