本发明专利技术涉及一种分泌抗玉米褪绿矮缩病毒(maize chlorotic dwarf virus MCDV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称为：杂交瘤细胞MCDV，保藏号为CCTCC NO：C201486。本发明专利技术的有益效果是：1)提供的杂交瘤细胞株MCDV分泌抗玉米褪绿矮缩病毒特异性单克隆抗体,以该单克隆抗体为核心建立的TAS-ELISA和dot-ELISA等免疫学方法及用这些方法建立的试剂盒能高度特异、准确、灵敏的检测玉米褪绿矮缩病毒；2)利用本发明专利技术所制备的单克隆抗体检测玉米褪绿矮缩病毒，不需要昂贵的仪器及试剂；3)利用本发明专利技术所制备的单克隆抗体，可以有效地用于进口玉米等玉米褪绿矮缩病毒寄主中玉米褪绿矮缩病毒的检测。
【技术实现步骤摘要】
分泌抗玉米褪绿矮缩病毒单抗的杂交瘤细胞株、分泌的抗 体、应用和由该单抗制备的试剂盒
本专利技术涉及一种单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其应用。具体涉及一种可中 和MCDV病毒外壳蛋白亚基的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的细胞株及该单克隆抗体的 用途。
技术介绍
在美国玉米上危害比较重的病毒病主要有两种，分别是玉米矮花叶病毒（Maize dwarfmosaicvirusMDMV)与玉米裡绿矮缩病毒（maizechloroticdwarfvirusMCDV)。 MCDV是1969年Rosenkranz发现的，后来，Bradfute等分离出该病毒，并命名为MCDV。研 究发现，该病毒可以广泛侵染来自16个国家及地区不同品种的玉米，是继玉米矮花叶病毒 (maizedwarfmosaicvirusMDMV)之后第二重要的玉米病害。MCDV具有多面体结构的颗 粒，直径大约30nm。1981年被国际病毒分类委员会指定为玉米褪绿矮缩病毒组的典型代 表。 玉米褪绿矮缩病毒是我国进境植物及植物产品禁止携带的检疫性有害生物，目 前仅在美国有报道。感染玉米褪绿矮缩病毒的植物发病早期，在幼小叶片的叶轮处表现褪 绿，被害叶不卷曲，在叶上的二级脉和三级脉之间褪绿条纹明显，叶片扭曲新叶片黄化或变 红。其自然寄主为石茅高粱和玉蜀黍，越冬寄主为约翰逊草、糜子、西非高粱、高粱、苏丹草、 小麦、蟋蟀草、谷子。我国的一些寄主种植区气候与美国相似，其自然寄主和越冬寄主在我 国都有，说明该病毒在中国已具备定殖的条件。目前我国已放开了部分美国玉米的进口限 制，在我国玉米褪绿矮缩病毒自然寄主也有大量种植，传毒介体（草坪小叶蝶lesserlawn leafhopper、灰色草坪叶蝶graylawnleafhopper和黑面叶蝶，blackfacedleafhopper) 在我国也有发生，各地间玉米材料的调运又很多，所以扩散可能性较大。 进行玉米褪绿矮缩病毒的单克隆抗体研制及相应检测技术研为防止该病毒进入 我国境内及大规模扩散提供技术储备与物质支撑。 目前，国内对该病毒检测的相关研究报道教少，用于检测玉米褪绿矮缩病毒目前 检测方法国外主要是琼脂凝胶双扩散、免疫荧光法、免疫电子显微镜法、RT-PCR等。而这些 方法各有优缺点，存在问题也不尽相同，主要问题有操作复杂、成本高、假阳性假阴性比率 高，有些又存在成本高，对操作人员的专业技能要求较高的问题。本专利技术杂交瘤细胞MCDV 所产生的单克隆抗体特异性强，反应灵敏，可批量处理样品，成本低廉，对操作人员技能要 求较低，适合在各种口岸检疫及植保部门普及使用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供MCDV病毒单克隆抗 体、杂交瘤细胞株及应用，能很好地检测出植物材料中的玉米褪绿矮缩病毒，为保障我国农 林业健康发展，防止该病毒病传入与大规模扩散提供了有力的检测工具和手段。 本专利技术的解决方案是： 提供一种分泌玉米裡绿矮缩病毒（maizechloroticdwarfvirusMCDV)MCDV单 克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称为： 杂交瘤细胞MCDV，保藏号为CCTCCN0:C201486。保藏日期为2014年4月26日，经检测为 存活。（中国典型培养物保减中心地址：中国湖北省武汉市武昌洛伽山，邮编：430072)。 抗玉米褪绿矮缩病毒的单克隆抗体腹水间接ELISA效价达1(T7,抗体类型及亚类 为IgGpkappa链，该单克隆抗体能与目前报道的玉米褪绿矮缩病毒的外壳蛋白亚基有特异 性免疫结合反应。 本专利技术的试剂盒、试剂或药剂中，MCDV病毒CP选自已报道MCDV外壳蛋白基因序 列（GenBank登录号：AFM31231. 1)，该序列所表达的CP蛋白所制备的抗原最终免疫小鼠获 得的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体能与玉米褪绿矮缩病毒CP蛋白结合，具有良好的灵 敏性。 本专利技术的有益效果是：1)提供的杂交瘤细胞株MCDV分泌抗玉米褪绿矮缩病毒特 异性单克隆抗体，以该单克隆抗体为核心建立的TAS-ELISA和dot-ELISA等免疫学方法及 用这些方法建立的试剂盒能高度特异、准确、灵敏的检测玉米褪绿矮缩病毒；2)利用本发 明所制备的单克隆抗体检测玉米褪绿矮缩病毒，不需要昂贵的仪器及试剂；3)利用本专利技术 所制备的单克隆抗体，可以有效地用于进口玉米等玉米褪绿矮缩病毒寄主及传播介体中玉 米褪绿矮缩病毒的检测。 【具体实施方式】 分泌抗玉米褪绿矮缩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株MCDV于2014年4月26日 保藏于中国典型培养物保藏中心（ChinaCenterforTypeCultureCollection，简称 CCTCC)(湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学，保藏中心），保藏号为CCTCCNo:C201486,它 能分泌抗玉米褪绿矮缩病毒的单克隆抗体。 抗玉米褪绿矮缩病毒的单克隆抗体腹水间接ELISA效价均达1(T7,抗体类型及亚 类均为IgGpkappa链，该单克隆抗体能与玉米褪绿矮缩病毒的外壳蛋白亚基有特异性免疫 结合反应。 抗玉米褪绿矮缩病毒的单克隆抗体仅与玉米褪绿矮缩病毒有特异性免疫反应，而 与水稻东格鲁球状病毒（Ricetungrosphericalvirus,RTSV)、玉米矮花叶病毒（Maize dwarfmosaicVirus，MDMV)、玉米粗缩病毒（MaizeroughdwarfVirus，MRDV)、玉米裡绿 斑驳病毒（Maizechloroticmottlevirus，MCMV)、玉米条纹矮缩病毒（Maizechlorotic mottlevirus，MSDV)、玉米鼠耳病毒（Maizewallabyearvirus，MWEV)均不发生免疫反 应。 抗玉米褪绿矮缩病毒单克隆抗体在该病毒检测上的应用是以单克隆抗体为核心 建立的各种免疫学检测方法和免疫学试剂盒。 本专利技术提供的杂交瘤细胞株MCDV能大量分泌玉米褪绿矮缩病毒单抗，且其分泌 的单抗特异性强、效价高、稳定性好。以该单抗为核心建立了检测玉米褪绿矮缩病毒的高通 量的血清学方法及其试剂盒，可成功应用于进境玉米等植物材料及田间的检测，从而为预 防玉米褪绿矮缩病毒随传入我国及我国玉米褪绿矮缩病毒早期监测和预警，科学指导防控 提供物质和技术支持。 一、杂交瘤细胞获得及其单克隆抗体的制备 1.免疫原及检测抗原的制备 根据已报道的玉米褪绿矮缩病毒编码外壳蛋白基因序列（登录号：AFM31231. 1) 设计一对特异引物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分泌抗玉米褪绿矮缩病毒(maize chlorotic dwarf virus MCDV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称为：杂交瘤细胞株MCDV，保藏号为CCTCC NO：C201486。
【技术特征摘要】
1. 一种分泌抗玉米裡绿矮缩病毒（maize chlorotic dwarf virus MCDV)单克隆抗体 的杂交瘤细胞株，其特征在于：该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称 为：杂交瘤细胞株MCDV，保藏号为CCTCC NO :C201486。2. -种由权利要求1所述的杂交瘤细胞株MCDV分泌的抗玉米褪绿矮缩病毒的单克隆 抗体，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：白桦，尼秀媚，魏晓棠，齐振华，朱妍妍，
申请(专利权)人：中华人民共和国青岛出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：山东;37
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