猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT-PCR检测方法及应用技术

本发明专利技术属于病毒检测领域，特别是指猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT‑PCR检测方法及应用。设计合成PEDV M基因、PDCoV N基因和PSV 2C基因的保守序列的3对特异性引物，然后对RT‑PCR反应条件进行优化，建立了能同时检测猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT‑PCR诊断方法，并对所建立的方法进行特异性、敏感性和重复性分析；结果表明，本申请方法具有很好的特异性和较高的灵敏性，PDCoV的最低检测限量是1.40×10

Multiplex RT-PCR detection method and application of porcine \u03b4 coronavirus, swine epidemic diarrhea virus and swine saperovirus

【技术实现步骤摘要】
猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT-PCR检测方法及应用
本专利技术属于病毒检测领域，特别是指猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT-PCR检测方法及应用。
技术介绍
近些年来，猪病毒性疾病对于全球养猪行业造成了严重的危害，疾病的发生和流行日益严重，发病率逐年升高，多种病原混合感染和继发感染的情况也越来越普遍。猪δ冠状病毒（PDCoV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪萨佩罗病毒（PSV）三种病毒均可以引起仔猪发生严重脱水、腹泻等相似的临床症状，且临床上混合感染现象比较普遍，给疾病的诊断以及防控带来了诸多困难。传统的动物病毒病诊断方法如在细胞上进行病毒分离、免疫学和血清学等检测方法虽然可以对三者进行诊断，但是存在其检测周期长、灵敏度低、耗时费力、检测成本高昂等的缺陷，不适宜用于大规模临床诊断，更重要的是，这些常规诊断方法一次只能诊断一种疾病，且需要特异性诊断试剂（如特异性的抗体），不能解决临床上的这几种疾病混合感染的鉴别诊断。随着分子生物学技术的快速发展，多重RT-PCR对多种疾病可以进行鉴别诊断，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT-PCR检测方法，其特征在于，步骤如下：/n（1）分别设计猪δ冠状病毒毒株的N基因、猪流行性腹泻病毒的M基因和猪萨佩罗病毒的2C基因的引物对；/n（2）从猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的细胞培养物中提取病毒核酸，反转录制备cDNA作为模板，以步骤（1）得到的三组引物对为引物，进行多重RT-PCR反应；/n（3）回收步骤（2）的多重RT-PCR反应的产物进行凝胶电泳检测。/n

【技术特征摘要】
1.猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的多重RT-PCR检测方法，其特征在于，步骤如下：
（1）分别设计猪δ冠状病毒毒株的N基因、猪流行性腹泻病毒的M基因和猪萨佩罗病毒的2C基因的引物对；
（2）从猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒的细胞培养物中提取病毒核酸，反转录制备cDNA作为模板，以步骤（1）得到的三组引物对为引物，进行多重RT-PCR反应；
（3）回收步骤（2）的多重RT-PCR反应的产物进行凝胶电泳检测。


2.根据权利要求1所述的猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病毒和猪萨佩罗病毒多重RT-PCR检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中猪δ冠状病毒的N基因的引物对序列如SEQIDNo.1/SEQIDNo.2所示；猪流行性腹泻病毒的M基因的引物对序列如SEQIDNo.3/SEQIDNo.4所示；猪萨佩罗病毒的2C基因的引物对序列如SEQIDNo.5/SEQIDNo.6所示。


3.根据权利要求1所述的猪δ冠状病毒、猪流行性腹泻病...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡慧，魏战勇，丁庆文，张红垒，郑兰兰，夏璐，张云飞，李倩，李林姣，单法，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南;41