经修饰的Cas9蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术的目的在于：提供一种在维持与向导RNA的结合能力的同时靶序列的限制得到缓解的经修饰的Cas9蛋白及其用途。一种蛋白等，该蛋白包含在SEQ ID NO:1中1335位的精氨酸突变成丙氨酸(R1335A)、异亮氨酸(R1335I)、蛋氨酸(R1335M)、苏氨酸(R1335T)或缬氨酸(R1335V)、1111位的亮氨酸突变成精氨酸(L1111R)、1135位的天冬氨酸突变成缬氨酸(D1135V)、1218位的甘氨酸突变成精氨酸(G1218R)、1219位的谷氨酸突变成苯丙氨酸(E1219F)、1322位的丙氨酸突变成精氨酸(A1322R)、1337位的苏氨酸突变成精氨酸(T1337R)而得到的氨基酸序列。

Modified cas9 protein and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的Cas9蛋白及其用途
本专利技术涉及可靶的区域进一步扩张的、经修饰的Cas9蛋白及其用途。
技术介绍
已知成簇的规律间隔短回文重复序列(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats：CRISPR)和Cas(CRISPR-相关)基因一起在细菌和古细菌中构成提供对侵入外来核酸的获得耐性的适应免疫系统。CRISPR往往是由噬菌体或质粒DNA引起的，由其间插入有大小类似的被称作间隔序列的独特可变DNA序列的24～48bp的短保守重复序列构成。另外，在重复和间隔序列的附近存在编码Cas蛋白家族的基因组。在CRISPR-Cas系统中，外源性DNA被Cas蛋白家族切割成30bp左右的片段，并插入CRISPR中。作为Cas蛋白家族之一的Cas1和Cas2蛋白识别外源性DNA的被称作前间隔序列邻近基序(proto-spaceradjacentmotif，PAM)的核苷酸序列(塩基配列)，切取其上游，插入到宿主的CRISPR序列中，这成为细菌的免疫记忆。包含免疫记忆的CRISPR序列转录生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 蛋白，该蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代而得到的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170531 JP 2017-1085561.蛋白，该蛋白由包含在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代而得到的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。


2.权利要求1所述的蛋白，其中，在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中，进一步在1219位具有突变。


3.权利要求1或2所述的蛋白，其中，在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中，进一步在1322位具有突变。


4.蛋白，该蛋白由包含在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代、并进一步在1219位具有突变的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。


5.蛋白，该蛋白由包含在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代、并进一步在1322位具有突变的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。


6.权利要求1～5中任一项所述的蛋白，其中，1335位的精氨酸的取代是取代成丙氨酸。


7.权利要求1～5中任一项所述的蛋白，其中，1335位的精氨酸的取代是取代成异亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸或缬氨酸。


8.权利要求2或4所述的蛋白，其中，1219位的突变是谷氨酸被取代成苯丙氨酸。


9.权利要求3或5所述的蛋白，其中，1322位的突变是丙氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸。


10.权利要求9所述的蛋白，其中，1322位的突变是丙氨酸被取代成精氨酸。


11.权利要求1～10中任一项所述的蛋白，其中，在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中，进一步在选自1111位、1135位、1218位和1337位的至少一个位置具有突变。


12.权利要求11所述的蛋白，其中，在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中，进一步在选自1111位、1135位、1218位和1337位的至少2个位置具有突变。


13.权利要求11所述的蛋白，其中，在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中，进一步在选自1111位、1135位、1218位和1337位的至少3个位置具有突变。


14.权利要求11所述的蛋白，其中，在SEQIDNO:1所表示的氨基酸序列中，进一步在1111位、1135位、1218位和1337位具有突变。


15.权利要求11～14中任一项所述的蛋白，其中，
1111位的突变是亮氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸；
1135位的突变是天冬氨酸被取代成缬氨酸；
1218位的突变是甘氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸；
1337位的突变是苏氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸。


16.权利要求1～15中任一项所述的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：濡木理，西增弘志，平野央人，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP