一种普卡那肽的固相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种适合工业化制备普卡那肽的方法，通过引入特殊保护的氨基酸和/或保护的二肽来固相合成普卡那肽，例如：假脯氨酸二肽、Dmb二肽、Dmb/Hmb/Fmoc‑Hmb/Hnb/Hmsb/Mmsb/Mmtb保护的氨基酸等，解决了常规固相方法合成普卡那肽时，后续氨基酸偶联愈加困难的问题，从而提高了粗肽的纯度与收率；尤其在Ala

Solid phase synthesis of procanapeptide

【技术实现步骤摘要】
一种普卡那肽的固相合成方法
本专利技术涉及多肽制药领域，尤其涉及一种多肽化合物普卡那肽的固相合成方法。
技术介绍
慢性特发性便秘(CIC)和肠易激综合征伴便秘(IBS-C)是影响胃肠道的两种最常见的疾病，这些疾病的特点是大便次数减少、紧张、腹痛或不适。我国成人慢性便秘，包括CIC、功能性排便障碍及IBS-C等，患病率4％-6％，就诊0.1亿-0.15亿。慢性便秘可继发精神心理障碍，对患者生活质量损害程度与糖尿病、心衰等慢性疾病相当。普卡那肽(plecanatide)由美国Synergy制药公司研发，为含有16个氨基酸的环状多肽，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，适用于治疗成人慢性特发性便秘。美国食品药品管理局(FDA)于2017年1月19日批准上市，商品名为Trulance。其结构式如下：目前，普卡那肽主链的合成方法主要分为片段法和固相合成法。CN201280021221.6采用片段法，通过片段之间液相缩合形成主链，该方法需要提前制备2个以上的片段，且片段之间液相缩合后处理繁琐，工业化生产步骤多，成本高。对于含有16个氨基酸的短肽，利用固相合成法制备普卡那肽相对于片段法具有操作简单，易于自动化等优点，因此往往采用常规的保护氨基酸进行固相顺序偶联进行合成。但是，经分析普卡那肽的肽链后，本专利技术人发现，该肽链的空间位阻较大，使用固相常规方法偶联，后续氨基酸偶联愈加困难，从而产品收率低，原料大量浪费，并不适合工业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于采用特殊保护的氨基酸和/或保护的二肽来固相合成普卡那肽，例如：假脯氨酸二肽、Dmb二肽、Dmb/Hmb/Fmoc-Hmb/Hnb/Hmsb/Mmsb/Mmtb保护的氨基酸等，来解决使用常规固相方法合成普卡那肽时，后续氨基酸偶联愈加困难的问题，从而提高了粗肽的纯度与收率。本专利技术提供了一种制备普卡那肽的方法。普卡那肽序列是16个氨基酸单元长度，普卡那肽序列N-末端到C-末端的顺序为H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Leu16-OH；二硫键(4-12)和(7-15)。本专利技术提供了一种制备普卡那肽的方法，包括如下步骤：(1)将树脂固相载体和Fmoc-Leu-OH偶联，得到Fmoc-Leu-树脂后，脱除Fmoc保护基；得到H-Leu-树脂；(2)通过固相合成法，在偶联剂系统的存在下，按普卡那肽序列由碳端向氮端依次将保护氨基酸和/或保护的二肽偶联到H-Leu-树脂上，制备得到线性普卡那肽的肽树脂；所述，普卡那肽序列从N-末端到C-末端的顺序为H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Leu16-OH；二硫键(4-12)和(7-15)；其中，所述在普卡那肽序列的Leu6、Val8、Val10、Ala11、Gly14或Leu16中的一个或多个位置的保护氨基酸选自Dmb保护的氨基酸、Hmb保护的氨基酸、Fmoc-Hmb保护的氨基酸、Hnb保护的氨基酸、Hmsb保护的氨基酸、Mmsb保护的氨基酸、Mmtb保护的氨基酸中的一种或多种；和/或，所述普卡那肽序列的Glu3-Cys4、Glu5-Leu6、Leu6-Cys7、Cys7-Val8、Asn9-Val10、Val10-Ala11、Ala11-Cys12、Cys12-Thr13、Thr13-Gly14或Gly14-Cys15中的一个或多个保护的二肽选自假脯氨酸二肽或Dmb二肽；(3)线性普卡那肽的肽树脂经裂解，制得线性普卡那肽，再经液相环化，即得普卡那肽。在一些实施方案中，步骤(1)中所述脱除Fmoc保护基的试剂由体积比为1:1～10的哌啶和DMF组成；优选地，所述脱除Fmoc保护基的试剂由体积比为1:4的哌啶和DMF组成。在一些实施方案中，步骤(2)中所述Cys的侧链保护基团包括Trt、Mmt、tBu、StBu、Acm、Npys或Cys的侧链形成假脯氨酸结构，其中4和12位的保护基团不同于7和15位；优选地，所述Cys的侧链保护基团选自Trt和Acm保护基。在一些实施方案中，步骤(2)中Leu6和/或Leu16位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Leu-OH、Fmoc-(Hmb)Leu-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Leu-OH、Fmoc-(Hnb)Leu-OH、Fmoc-(Hmsb)Leu-OH、Fmoc-(Mmsb)Leu-OH或Fmoc-(Mmtb)Leu-OH；和/或，Val8和/或Val10位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Val-OH、Fmoc-(Hmb)Val-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Val-OH、Fmoc-(Hnb)Val-OH、Fmoc-(Hmsb)Val-OH、Fmoc-(Mmsb)Val-OH或Fmoc-(Mmtb)Val-OH；和/或，Ala11位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Ala-OH、Fmoc-(Hmb)Ala-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Ala-OH、Fmoc-(Hnb)Ala-OH、Fmoc-(Hmsb)Ala-OH、Fmoc-(Mmsb)Ala-OH或Fmoc-(Mmtb)Ala-OH；和/或，Gly14位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-(Hmb)Gly-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Gly-OH、Fmoc-(Hnb)Gly-OH、Fmoc-(Hmsb)Gly-OH、Fmoc-(Mmsb)Gly-OH或Fmoc-(Mmtb)Gly-OH；和/或，Glu3-Cys4保护的二肽为Fmoc-Glu(OtBu)-Cys(ΨMe,Mepro)-OH；和/或，Glu5-Leu6保护的二肽为Fmoc-Glu(OtBu)-(Dmb)Leu-OH；和/或，Leu6-Cys7保护的二肽为Fmoc-Leu-Cys(ΨMe,Mepro)-OH；和/或，Cys7-Val8保护的二肽选自Fmoc-Cys(Trt)-(Dmb)Val-OH或Fmoc-Cys(Acm)-(Dmb)Val-OH；和/或，Asn9-Val10保护的二肽为Fmoc-Asn(Trt)-(Dmb)Val-OH；和/或，Val10-Ala11保护的二肽为Fmoc-Val-(Dmb)Ala-OH；和/或，Ala11-Cys12保护的二肽为Fmoc-Ala-Cys(ΨMe,Mepro)-OH；和/或，Cys12-Thr13保护的二肽选自Fmoc-Cys(Acm)-Thr(ΨMe,Mepro)-OH或Fmoc-Cys(Trt)-Thr(ΨMe,Mepro)-OH；和/或，Thr13-Gly14保护的二肽为Fmoc-Thr(tBu)-(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备普卡那肽的方法，其特征在于：所述的制备方法包括如下步骤：/n(1)将树脂固相载体和Fmoc-Leu-OH偶联，得到Fmoc-Leu-树脂后，脱除Fmoc保护基；得到H-Leu-树脂；/n(2)通过固相合成法，在偶联剂系统的存在下，按普卡那肽序列由碳端向氮端依次将保护氨基酸和/或保护的二肽偶联到H-Leu-树脂上，制备得到线性普卡那肽的肽树脂；所述，普卡那肽序列从N-末端到C-末端的顺序为H-Asn

【技术特征摘要】
1.一种制备普卡那肽的方法，其特征在于：所述的制备方法包括如下步骤：
(1)将树脂固相载体和Fmoc-Leu-OH偶联，得到Fmoc-Leu-树脂后，脱除Fmoc保护基；得到H-Leu-树脂；
(2)通过固相合成法，在偶联剂系统的存在下，按普卡那肽序列由碳端向氮端依次将保护氨基酸和/或保护的二肽偶联到H-Leu-树脂上，制备得到线性普卡那肽的肽树脂；所述，普卡那肽序列从N-末端到C-末端的顺序为H-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Leu16-OH；二硫键(4-12)和(7-15)；
其中，所述在普卡那肽序列的Leu6、Val8、Val10、Ala11、Gly14或Leu16中的一个或多个位置的保护氨基酸选自Dmb保护的氨基酸、Hmb保护的氨基酸、Fmoc-Hmb保护的氨基酸、Hnb保护的氨基酸、Hmsb保护的氨基酸、Mmsb保护的氨基酸、Mmtb保护的氨基酸中的一种或多种；
和/或，所述普卡那肽序列的Glu3-Cys4、Glu5-Leu6、Leu6-Cys7、Cys7-Val8、Asn9-Val10、Val10-Ala11、Ala11-Cys12、Cys12-Thr13、Thr13-Gly14或Gly14-Cys15中的一个或多个保护的二肽选自假脯氨酸二肽或Dmb二肽；
(3)线性普卡那肽的肽树脂经裂解，制得线性普卡那肽，再经液相环化，即得普卡那肽。


2.根据权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其特征在于：步骤(1)中所述脱除Fmoc保护基的试剂由体积比为1:1～10的哌啶和DMF组成；优选地，所述脱除Fmoc保护基的试剂由体积比为1:4的哌啶和DMF组成。


3.根据权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其特征在于：步骤(2)中所述Cys的侧链保护基团包括Trt、Mmt、tBu、StBu、Acm或Npys，其中4和12位的保护基团不同于7和15位；优选地，所述Cys的侧链保护基团选自Trt和Acm保护基。


4.根据权利要求1～3所述的制备普卡那肽的方法，其特征在于：步骤(2)中Leu6和/或Leu16位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Leu-OH、Fmoc-(Hmb)Leu-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Leu-OH、Fmoc-(Hnb)Leu-OH、Fmoc-(Hmsb)Leu-OH、Fmoc-(Mmsb)Leu-OH或Fmoc-(Mmtb)Leu-OH；
和/或，Val8和/或Val10位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Val-OH、Fmoc-(Hmb)Val-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Val-OH、Fmoc-(Hnb)Val-OH、Fmoc-(Hmsb)Val-OH、Fmoc-(Mmsb)Val-OH或Fmoc-(Mmtb)Val-OH；
和/或，Ala11位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Ala-OH、Fmoc-(Hmb)Ala-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Ala-OH、Fmoc-(Hnb)Ala-OH、Fmoc-(Hmsb)Ala-OH、Fmoc-(Mmsb)Ala-OH或Fmoc-(Mmtb)Ala-OH；
和/或，Gly14位置的保护氨基酸选自Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-(Hmb)Gly-OH、Fmoc-(Fmoc-Hmb)Gly-OH、Fmoc-(Hnb)Gly-OH、Fmoc-(Hmsb)Gly-OH、Fmoc-(Mmsb)Gly-OH或Fmoc-(Mmtb)Gly-OH；
和/或，Glu3-Cys4保护的二肽为Fmoc-Glu(OtBu)-Cys(ΨMe,Mepro)-OH；
和/或，Glu5-Leu6保护的二肽为Fmoc-Glu(OtBu)-(Dmb)Leu-OH；
和/或，Leu6-Cys7保护的二肽为Fmoc-Leu-Cys(ΨMe,Mepro)-OH；
和/或，Cys7-Val8保护的二肽选自Fmoc-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：康艳萍，刘磊，张才荣，杨代胜，王浩，戚建英，王晶翼，
申请(专利权)人：四川科伦药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51