【技术实现步骤摘要】
一种氯霉素完全抗原及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种氯霉素完全抗原及其制备方法与应用，属于免疫检测领域。
技术介绍
在骆驼和羊驼体内可以产生一种独特的轻链缺失的重链抗体，克隆这种重链抗体可变区可得到单域抗体，也称为纳米抗体。它具有许多常规抗体不具有的优良特性，如免疫原性低、亲和力高、水溶性好、高稳定性强等。并且，纳米抗体还修正了单链可变区抗体scFv容易粘连，易产生突变与筛选困难的缺点。进行纳米抗体制备，首先要准备氯霉素完全抗原，进而免疫羊驼，才能够得到含有重链抗体的血液样本用于分离外周血淋巴细胞进行纳米抗体的基因克隆及后续噬菌体库构建与筛选。氯霉素是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素，广泛用于动物各种传染性疾病的治疗。但是，由于氯霉素有严重的副作用，可以抑制人体骨髓造血功能，进而引起再生障碍性贫血症和粒状白细胞缺乏症等，因此动物食品中的氯霉素残留会对人体健康造成潜在的危害。我国农业部发布了《2013年动物及动物产品兽药残留监控计划》，规定氯霉素不得检出。氯霉素残留的检测方法有气相色谱法、液相色谱法、质谱联用技术等，但...
【技术保护点】
1.一种氯霉素完全抗原，其特征在于：该氯霉素完全抗原为半抗原与载体蛋白的偶联物；/n其中，所述半抗原的结构式如下式Ⅰ所示：/n
【技术特征摘要】
1.一种氯霉素完全抗原，其特征在于：该氯霉素完全抗原为半抗原与载体蛋白的偶联物；
其中，所述半抗原的结构式如下式Ⅰ所示：
2.根据权利要求1所述的氯霉素完全抗原，其特征在于：所述氯霉素完全抗原为所述半抗原中羧基与所述载体蛋白中氨基偶联形成酰胺键连接的偶联物；
所述氯霉素完全抗原的结构式如下式Ⅱ所示：
和/或，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白和卵清白蛋白中的至少一种。
3.权利要求1或2所述的氯霉素完全抗原的制备方法，包括如下步骤：先合成所述半抗原；然后将所述半抗原活化，与所述载体蛋白进行偶联，即得到所述氯霉素完全抗原。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的制备方法，包括如下步骤：1)在有机溶剂中，将氯霉素碱与4-(氯甲酰基)苯甲酸甲酯混合反应，得到所述半抗原；
2)将所述半抗原与二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合，进行活化反应，得到活化的半抗原；
3)将所述活化的半抗原与载体蛋白进行偶联反应，即得到所述氯霉素完全抗原。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，合成所述半抗原的反应在碱存在的条件下进行；所述碱具体为三乙胺；
所述有机溶剂为二氯甲烷、丙酮或氯仿；
所述氯霉素碱、所述4-(氯甲酰基)苯甲酸甲酯和所述碱的反应摩尔比为1：1：2～5；
合成所述半抗原的反应的条件如下：温度为0～30℃，时间为0.5～2小时；
和/或，步骤2)中，所述活化反应在溶剂为二甲基甲酰胺中进行；
所述活化反应的条件如下：...
【专利技术属性】
技术研发人员：王保民，王冕，谭桂玉，陈晓娇，何青青，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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