对T细胞低敏感性的靶细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种对T细胞低敏感性的靶细胞及其制备方法和一种利用所述靶细胞体外评价CAR‑T细胞有效性的方法。所述方法在于通过敲减表面靶细胞HLA表达，使靶细胞对CAT‑T细胞敏感度降低，在进行体外筛选评价CAR‑T细胞产品时可有效减少假阳性的发生，有利于CAR‑T产品的前期研究。

Target cells with low sensitivity to T cells and their preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
对T细胞低敏感性的靶细胞及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种对T细胞低敏感性的靶细胞及其制备方法和一种利用所述靶细胞体外评价CAR-T细胞有效性的方法。
技术介绍
目前基因编辑的免疫细胞已经在肿瘤治疗中取得优异的成绩，基因编辑的免疫细胞治疗产品的早期筛选和临床前疗效评估缺少不了体外杀伤结果的辅助，但是我们在进行免疫细胞治疗产品尤其是CAR-T细胞治疗产品筛选时发现，实验室培养的肿瘤细胞大多对免疫细胞如T淋巴细胞敏感，这就导致未编辑的免疫细胞与编辑/改造后的免疫细胞在杀伤效果上差异不显著，甚至对于非目标靶点肿瘤细胞造成非特异性杀伤的“假阳性”。这样便会使得对体外CAR-T的杀伤效果造成不客观的评价，容易误判或错判。因此为了减少这种非特异性杀伤带来的不利影响，我们尝试利用CRISPR/Cas9基因编辑手段敲除靶细胞表面HLA(humanleukocyteantigen，人类白细胞抗原)表达，以期望降低CAR-T细胞对靶细胞(不表达对应抗原)的非特异性杀伤，提高CAR-T细胞治疗的特异性，实现更精准的治疗。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对T细胞低敏感的靶细胞的制备方法，其特征在于，所述方法为通过破坏靶细胞表面的HLA表达，降低靶细胞对T细胞的敏感性。/n

【技术特征摘要】
1.一种对T细胞低敏感的靶细胞的制备方法，其特征在于，所述方法为通过破坏靶细胞表面的HLA表达，降低靶细胞对T细胞的敏感性。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用基因编辑技术敲除针对如SEQIDNO：1所示的靶向序列，设计gRNA。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述gRNA的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法为以下步骤：
1)设计合成上下游引物，其核苷酸序列如SEQIDNO:3-4所示，退火成双链的gRNA；
2)酶切载体质粒，构建带gRNA的表达载体；
3)将步骤2中获得的表达载体转导靶细胞，获得对所述对T细胞低敏感的靶细胞。

【专利技术属性】
技术研发人员：陈运凡，朱秀秀，徐艳敏，赵永春，齐亚男，赵文旭，陈军，黄霞，张茜真，张巍，
申请(专利权)人：重庆精准生物产业技术研究院有限公司，重庆精准生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50