PirB基因敲除小鼠动物模型及其构建方法技术

本发明专利技术公开了PirB基因敲除小鼠动物模型及其构建方法，通过以下方法获得：基于CRISPR/Cas9技术，将C57BL/6J小鼠PirB基因待敲除的特异性靶位点gRNA1和gRNA2分别与trancrRNA在25℃孵育10min形成发夹结构；将有活性的gRNA1、gRNA2、Cas9酶和制备好的含有cKO区、同源臂和loxP位点打靶载体显微注射入代孕小鼠受精卵中获得F0代小鼠，再依次获得F1代杂合子小鼠、F2代纯合子小鼠，即得到本发明专利技术PirB基因敲除小鼠的模型。本发明专利技术对于PirB基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础，特别是敲除PirB后对AD表型和病理学症状的研究具有很高的研究价值。

PIRB knockout mouse model and its construction method

【技术实现步骤摘要】
PirB基因敲除小鼠动物模型及其构建方法
本专利技术属于遗传学和生物
，具体涉及PirB基因敲除小鼠动物模型，还涉及该小鼠动物模型的构建方法。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。随着世界人口老龄化不断加剧，AD发病率也在逐年上升，给患者及家属带来极大的生理痛苦和经济负担。AD典型的病理学症状之一是β-淀粉样蛋白(Amyloid-β，Aβ)沉积引起的细胞外老年斑，研究发现Aβ沉积，特别是Aβ42寡聚体会导致神经元退行性病变，包括神经元轴突回缩和突触丢失等。成对免疫球蛋白样受体B(pairedimmunoglobulin-likereceptorB，PirB)，是Aβ42寡聚体的高亲和力受体，亲和力达到纳摩尔水平。PirB广泛表达于神经元和星形胶质细胞。免疫组织化学染色结果发现，PirB在富含肌动蛋白(actin)的轴突生长锥前缘和突触蛋白(synapsin)免疫阳性的囊泡中表达，呈点状分布。文献表明，PirB表达随年龄增加而增加，且Pi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.PirB基因敲除小鼠动物模型，其特征在于，所述小鼠动物模型是通过以下方法获得：/n步骤1、基于CRISPR/Cas9技术，根据PirB基因信息确定C57BL/6J小鼠PirB基因待敲除的特异性靶位点gRNA1和gRNA2，所述gRNA1的基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述gRNA2的基因序列如SEQ ID NO.2所示；/n步骤2、通过PCR扩增C57BL/6J小鼠PirB基因的同源臂和cKO区域，采用in-fusion方法构建含有loxP位点的打靶载体；/n步骤3、将有活性的gRNA1、gRNA2、Cas9蛋白和含有loxP位点线性打靶质粒载体显微注射入代孕小鼠受精卵中，繁育获得...

【技术特征摘要】
1.PirB基因敲除小鼠动物模型，其特征在于，所述小鼠动物模型是通过以下方法获得：
步骤1、基于CRISPR/Cas9技术，根据PirB基因信息确定C57BL/6J小鼠PirB基因待敲除的特异性靶位点gRNA1和gRNA2，所述gRNA1的基因序列如SEQIDNO.1所示，所述gRNA2的基因序列如SEQIDNO.2所示；
步骤2、通过PCR扩增C57BL/6J小鼠PirB基因的同源臂和cKO区域，采用in-fusion方法构建含有loxP位点的打靶载体；
步骤3、将有活性的gRNA1、gRNA2、Cas9蛋白和含有loxP位点线性打靶质粒载体显微注射入代孕小鼠受精卵中，繁育获得F0代小鼠；
步骤4、将步骤3中性成熟的阳性F0代小鼠分别与野生型异性小鼠交配繁殖一代，获得F1代杂合子小鼠；
步骤5、将步骤4获得的F1代杂合子小鼠近交获得F2代纯合子小鼠，即为本发明构建的PirB基因敲除的小鼠动物模型。


2.根据权利要求1所述的PirB基因敲除小鼠动物模型，其特征在于，所述gRNA1、gRNA2的敲除位点依次为小鼠PirB基因编码区的第10个外显子上和15个外显子上。


3.根据权利要求1所述的PirB基因敲除小鼠动物模型，其特征在于，所述步骤1中得到gRNA1和gRNA2后，将gRNA1和gRNA2分别与trancrRNA在25℃孵育10min形成发夹结构。


4.根据权利要求1所述的PirB基因敲除小鼠动物模型，其特征在于，所述步骤3中注射进入受精卵的gRNA1、gRNA2的浓度均为2～5pmol/ul，Cas9蛋白的浓度为30～100ng/μL。


5.一种权利要求1所述的PirB基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：苟兴春，张晓华，王晓龙，姜朋涛，程江红，邱忠营，
申请(专利权)人：西安医学院，
类型：发明
国别省市：陕西;61