高特异性无脱靶单碱基基因编辑工具制造技术

本发明专利技术涉及高特异性无脱靶单碱基基因编辑工具。揭示了一种降低单碱基编辑器的脱靶效应的方法。也揭示了一种分析单碱基基因编辑工具的靶向效应的方法(GOTI)。

High specific single base gene editing tool without miss

【技术实现步骤摘要】
高特异性无脱靶单碱基基因编辑工具
本专利技术属于基因编辑
，更具体地，本专利技术涉及一种高特异性无脱靶单碱基基因编辑工具。
技术介绍
基因组编辑技术自问世以来受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称，Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的，是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。在CRISPR/Cas9系统中，酶Cas9在DNA靶位点上进行切割。Cas9与sgRNA一起被称作Cas9-sgRNA系统。CRISPR/Cas9技术已被应用于疾病模型建立、药物靶点筛选、并正在成为新一代基因治疗手段。但是，CRISPR/Cas9的应用时，缺陷在于同源介导修复的低编辑效率。本领域人员利用16个碱基长的XTEN接头(XTENlinker)将胞苷脱氨酶APOBEC1与dCas9连接在一起，从而构建出第一代碱基编辑器(BE1)。为了增加体内编辑效率，第二代碱基编辑器(BE2)系统除了将胞苷脱氨酶与dCas9连接在一起之外，还将碱基切除修复抑制剂UGI与dCas9融本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降低单碱基编辑器的脱靶效应的方法，包括：在单碱基编辑器系统中，对其中的胞嘧啶脱氨酶进行改造，弱化其与DNA的结合。/n

【技术特征摘要】
20190228 CN 20191015354631.一种降低单碱基编辑器的脱靶效应的方法，包括：在单碱基编辑器系统中，对其中的胞嘧啶脱氨酶进行改造，弱化其与DNA的结合。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的改造是针对胞嘧啶脱氨酶的DNA结合区域的改造；较佳地，所述的DNA结合区域为其与DNA结合的结构域。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的改造包括但不限于：基因突变，靶向性封闭或阻滞，干扰。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的单碱基编辑器系统为BE3基因编辑器系统；或
所述的DNA为单链DNA或双链DNA。


5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胞嘧啶脱氨酶包括但不限于选自下组的酶：AID，APOBEC3G，APOBEC1，APOBECA3A，CDA1。


6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的胞嘧啶脱氨酶为APOBEC1；较佳地，所述的改造为对该酶的第126位的氨基酸进行改造；更佳地，所述的改造为将其第126位的R突变为E。


7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，APOBEC1的改造还包括：对APOBEC1酶的第90位的氨基酸进行改造；更佳地，所述的改造为将其第90位突变为Y。


8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的胞嘧啶脱氨酶为APOBECA3A，所述的改造为对该酶的第130位的氨基酸进行改造；较佳地，所述的改造为将其第130位的Y突变为F。


9.一种胞嘧啶脱氨酶的突变体，其DNA结合区域发生改造，该改造使得其与DNA的结合被弱化，所述的DNA如单链DNA；较佳地，所述的胞嘧啶脱氨酶包括但不限于选自下组的酶：AID，APOBEC3G，APOBEC1，APOBECA3A，CDA1。


10.如权利要求9所述的突变体，其特征在于，所述的酶为APOBEC1；较佳地，所述改造发生在该结构域的第126位氨基酸上或其邻近的位置上；更佳地，所述的改造为将其第126位的R突变为E。


11.如权利要求9所述的突变体，其特征在于，所述的改造还发生在APOBEC1酶的第90位氨基酸上，更佳地，所述的改造为将其第90位突变为Y。


12.如权利要求9所述的突变体，其特征在于，所述的酶为APOBECA3A，所述改造发生在该酶的第130位的氨基酸上或其邻近的位置上；较佳地，所述的改造为将其第130位的Y突变为F。


13.分离的多核苷酸，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨辉，左二伟，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31