一种源于鹿茸的抗氧化多肽及应用和添加剂制造技术

本发明专利技术涉及具有铁还原能力的一种多肽化合物Gly‑Leu‑Hyp‑Gly‑Pro‑Hyp‑Gly‑Hyp‑Gln‑Gly‑Glu‑Ser‑Arg，它的氨基酸序列为Gly‑Leu‑Hyp‑Gly‑Pro‑Hyp‑Gly‑Hyp‑Gln‑Gly‑Glu‑Ser‑Arg。多肽Gly‑Leu‑Hyp‑Gly‑Pro‑Hyp‑Gly‑Hyp‑Gln‑Gly‑Glu‑Ser‑Arg具有抗氧化活性，其不仅本身具有活性功能，而且可以作为食品、化妆品、保健品和动物食品等的添加剂，应用范围广泛。

An antioxidant polypeptide from pilose antler and its application and additives

【技术实现步骤摘要】
一种源于鹿茸的抗氧化多肽及应用和添加剂
本专利技术涉及多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg以及作为抗氧化组分在食品、保健品、化妆品和动物食品等的添加剂中的应用。
技术介绍
抗氧化剂广泛应用在食品领域和日化用品等领域。抗氧化剂一方面可以防止以上产品因为氧化变色或变质；另一方面某些氧化剂甚至在相关的产品中扮演活性功能作用，如在体内发挥抗氧化、清除自由基等功效。目前在食品工业中广泛采用丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)等化学合成的抗氧化剂，但这些合成的抗氧化剂由于对人体健康的潜在危险，其应用日益受到限制。近年来，人们积极寻找天然的、安全的抗氧化剂，在许多天然动植物材料中发现各种不同的抗氧化化合物的存在，如维生素E、茶多酚、食源性抗氧化肽等。特别是抗氧化肽，由于具有安全性高、抗氧化性强和易被吸收等特点正在逐渐受到人们的关注。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg在抗氧化组分中的应用和快速筛选方法；多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg具有抗氧化活性，可作为食品、保健品、化妆品和动物食品等的添加剂，具有良好的应用前景。为实现上述目的，本专利技术以所述多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg为抗氧化的有效成份。其具有序列表SEQIDNO：1中氨基酸序列；多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg为抗氧化成份，可作为食品、保健品、化妆品和动物食品等的添加剂。具有抗氧化活性的多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg来源于梅花鹿。由于鹿的蛋白库不够完善，总蛋白数量较少，而牛和鹿的基因同源性超过90％(SuiZG,YuanHM,LiangZ,etal.Talanta,2013,107,189-194.)，因此本实验选择牛科(bovine)作为蛋白数据库。多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg来源于牛科(bovine)蛋白库的CollagentypeXIIalpha1chain蛋白，含13个氨基酸残基，氨基酸序列为Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg，为单链线性结构，白色粉末状，易溶于水，分子量为1296Da；具有较好的铁还原能力活性，每100μM相当于9.20±0.54μM抗坏血酸的铁还原能力(n＝3，Mean±SD)。多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg具备抗氧化肽所要求的特征：含有苯环、吡咯烷环、咪唑环的氨基酸残基，可作为自由基所需的氢供体；含有疏水性氨基酸残基，尤其是N末端应为疏水性氨基酸；C末端第二位氨基酸残基容易形成氢键。多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg的C端第二位氨基酸残基为丝氨酸，其羟基容易与水分子形成氢键；含有4个吡咯环，可作为自由基所需的氢供体，因此Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg符合抗氧化构效关系，具有抗氧化功能。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术首次从鹿茸中获得并确定了活性化合物的结构，化合物具有较好的抗氧化活性，因此作为具有良好的潜力和应用前景。具体实施方式实施例1多肽Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg的制备采用LC-MS/MS与Shotgun蛋白质组学技术相结合的方法。以梅花鹿茸为原料，经酶解蛋白，离心，纯化及LC-MS/MS分析，结合构效关系特征，筛选具有抗氧化作用的肽段。其具体方法如下：将新鲜梅花鹿茸冷冻干燥后粉碎，加入去离子水使鹿茸浓度为33.3g/L，搅拌均匀后加入鹿茸质量0.5％(W/W)的胰蛋白酶，在40℃下酶解3小时；酶解结束将酶解液过80目筛，残渣同法提取一次。将两次酶解液升温至90℃保温15分钟，分别经8层纱布和200目筛过滤，所得滤液以10000g的速度离心10分钟，收集上清液；上清液经NanodropOnec在205nm下测定肽浓度，加水稀释至肽浓度20mg/mL待用；将溶胀后的SephadexG-25medium填料填装成直径2cm、柱高30cm的凝胶柱。将酶解液加载于凝胶柱上，以去离子水为洗脱液、流速3.5mL/min进行洗脱，以床体积的1/20为一个流份，洗脱2个床体积，收集全部40个流份并经NanodropOnec在205nm下测定肽浓度。根据肽浓度合并第16至第25个流份，冷冻干燥，得到鹿茸提取物。将鹿茸提取物用LTQOrbitrapVelos进行质谱分析：将鹿茸提取物用0.1％(V/V)甲酸水溶液复溶成0.4mg/mL的溶液，进行LC-MS/MS分析。将毛细管的一端拉成内径约为5μm的尖端，通过气压将C18AQ填料压入柱内，填充柱长度约15cm。将毛细管的尖端与质谱相连。所用的流动相A为0.1％(V/V)甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液，线性梯度洗脱过程为：0％B(0min)—2％B(2min)—25％B(87min)—35％B(97min)—90％B(99min)—90％B(109min)—2％B(110min)—2％B(120min)。流速60μL/min。设置离子传输毛细管的温度200℃，电喷雾电压1.8KV，归一化碰撞能量35.0％。均使用数据依赖模式(data-dependentmode)对MS和MS/MS进行图谱采集。质谱扫描条件设定为：从每次m/z＝400～2000的全扫描中选择10个最高丰度离子峰进行MS/MS扫描，其中动态排除(dynamicexclusion)设置为：重复次数(repeatcount)为2，重复容忍时间(repeatduration)30s，动态排除时间(exclusionduration)90s。利用Xcalibur软件(Version2.2，Thermo)进行系统控制和数据收集。将采集的*.raw文件数据用ThermoProteomeDiscovererDaemon(v1.4)转换成*.mgf格式，再用Mascot(version2.3.0，MatrixScience，London，UK)于牛科数据库(bovine，蛋白数目17890，下载自http://www.uniprot.org/),进行检索，检索参数如下：不设置酶切位点、最大漏切数和固定修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种源于鹿茸的抗氧化多肽，其特征在于：所述多肽为Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg，具有序列表SEQ ID NO：1中的氨基酸序列；该多肽的氨基酸序列具体为Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg。/n

【技术特征摘要】
1.一种源于鹿茸的抗氧化多肽，其特征在于：所述多肽为Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg，具有序列表SEQIDNO：1中的氨基酸序列；该多肽的氨基酸序列具体为Gly-Leu-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Hyp-Gln-Gly-Glu-Ser-Arg。


2.一种权利要求1所述源于鹿茸的抗氧化多肽在制备食品、化妆品、保健品或动物食品等的具有抗氧化功能添加剂中的应用。


3.按照权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳艳，叶明亮，晏嘉泽，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21