带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型及其应用制造技术

带有荧光标记的PD‑L1膜表面表达细胞模型及其应用，细胞模型是可表达PD‑L1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞，所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成，所述真核荧光表达载体在293T细胞中瞬时表达PD‑L1蛋白，并将PD‑L1蛋白展示在293T细胞表面，细胞模型在筛选能与PD‑L1结合的多肽和抗体中的应用。本发明专利技术是将牛Fc γ受体信号肽序列代替原来PD‑L1基因上的信号肽，能将PD‑L1更高效的锚定在细胞膜上，以便将犬的PD‑L1成熟蛋白大量展示在真核细胞膜表面。

The cell model of PD-L1 membrane surface expression with fluorescent label and its application

【技术实现步骤摘要】
带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型及其应用
本专利技术涉及基因工程
，具体属于带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型及其应用。
技术介绍
程序性死亡受体1（Programmeddeath1，PD-L1，CD279）属于CD28家族成员，在B淋巴细胞、T淋巴细胞、NK细胞、树突状细胞和单核细胞均有表达，其配体PD-L1（Programmeddeathligand1，CD274）属于B7家族成员，作为PD-L1的主要配体，PD-L1主要表达于肿瘤细胞、淋巴细胞、上皮细胞中。癌症是致犬死亡的常见病之一，目前治疗犬癌症的方法有手术、化疗和放疗。除此之外，免疫治疗也备受关注，一些针对免疫检查点分子的药物的研制取得了成功。在许多临床试验中，抗PD-L1抗体显示出了良好的抗肿瘤活性，特别是针对黑色素瘤、非小细胞肺癌和其他癌症的临床治疗中显示了极其显著的疗效。同样在人体中，抗PD-1和抗PD-L1抗体已被用于晚期黑色素瘤的治疗，并且显示出良好的疗效果。目前日益增多的相关研究结果表明，犬类部分肿瘤的发生机制与人类有着很高的相似性，PD-1及PD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述细胞模型是可表达PD-L1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞，所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成，所述真核荧光表达载体在293T细胞中瞬时表达PD-L1蛋白，并将PD-L1蛋白展示在293T细胞表面。/n

【技术特征摘要】
1.带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述细胞模型是可表达PD-L1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞，所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成，所述真核荧光表达载体在293T细胞中瞬时表达PD-L1蛋白，并将PD-L1蛋白展示在293T细胞表面。


2.如权利要求1所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述真核荧光表达载体为pECFP-Fc-PD-L1重组载体，先由添加Kozak序列和酶切位点的牛Fcγ受体信号肽序列，插入到真核表达载体pECFP-N1的多克隆位点中形成pECFP-Fc重组载体，之后构建T-PD-L1重组载体，将pECFP-Fc重组载体和T-PD-L1重组载体进行酶切酶连形成pECFP-Fc-PD-L1重组载体。


3.如权利要求2所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述PD-L1成熟蛋白全长序列位于牛Fcγ受体信号肽序列的下游，并与真核表达载体pECFP-N1中的EYFP蛋白融合表达。


4.如权利要求3所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型，其特征在于：所述PD-L1成熟蛋白全长序列是犬PD-L1成熟蛋白全长序列，其编码的DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：王选年，孙国鹏，何海汛，岳锋，李鹏，张艳芳，朱艳平，郭东光，陈威，李丹，蒋力维，
申请(专利权)人：新乡学院，
类型：发明
国别省市：河南;41