靶向GPC3和CD19双靶点的嵌合抗原受体方法和用途技术

本发明专利技术涉及靶向GPC3和CD19双靶点的嵌合抗原受体及其用途。具体而言，本发明专利技术提供一种多核苷酸序列，选自：(1)含有依次连接的抗GPC3单链抗体的编码序列、抗CD19单链抗体的编码序列、人IgG4铰链区的编码序列、人CD28跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。本发明专利技术还提供相关的融合蛋白、含所述编码序列的载体，以及所述融合蛋白、编码序列、载体的用途。本发明专利技术制备的CART细胞带有tEGFR组件其具有体内示踪和安全开关的作用。

Methods and applications of chimeric antigen receptor targeting GPC3 and CD19 double targets

【技术实现步骤摘要】
靶向GPC3和CD19双靶点的嵌合抗原受体方法和用途
本专利技术属于细胞治疗领域，具体涉及靶向GPC3和CD19双靶点的嵌合抗原受体及其用途。
技术介绍
肝癌在世界上最流行的肿瘤中位居第五并且在癌症相关死亡的最常见原因中位居第三(Bosch等，Gastroenterologyl27:S5-Sl6，2004；El–Serag等，Gastroenterologyl32:255776，2007)。根据美国癌症学会，肝细胞癌(HCC)占肝癌病例的约75％，往往直到晚期肝癌才会有症状。外科手术是肝癌的标准治疗，因为这种类型的癌症对大多数的化疗药物反应不好。因此，迫切需要开发具有不同作用机制的新药物。磷脂酰肌醇蛋白多糖3(Glypican3，GPC3)是一种细胞表面蛋白，属于硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族。GPC3基因编码产生70kDa左右的前体核心蛋白，该前体蛋白能够被弗林蛋白酶(furin)剪切产生40kDa左右的可溶性的能够进入血液的氨基端(N末端)肽和30kDa左右含有2个硫酸乙酰肝素(HS)糖链的膜结合的竣基端(C末端)肽(Capurro等，D本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：/n(1)含有依次连接的抗GPC3单链抗体的编码序列、抗CD19单链抗体的编码序列、人IgG4铰链区的编码序列、人CD28跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和/n(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：
(1)含有依次连接的抗GPC3单链抗体的编码序列、抗CD19单链抗体的编码序列、人IgG4铰链区的编码序列、人CD28跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和
(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。


2.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，
所述多核苷酸序列在所述抗GPC3单链抗体的编码序列前还含有信号肽的编码序列，优选地，所述信号肽的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第1-63位多核苷酸所示；和/或
所述抗GPC3单链抗体的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第64-792位多核苷酸所示；和/或
所述抗CD19单链抗体的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第853-1587位多核苷酸所示；和/或
所述人IgG4铰链区的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第1588-1623位多核苷酸所示；和/或
所述人CD28跨膜区的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第1627-1707位多核苷酸所示；和/或
所述人41BB胞内区的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第1708-1833位多核苷酸所示；和/或
所述人CD3ζ胞内区的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第1834-2169位多核苷酸所示；和/或
所述EGFR的片段含有EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区，或由EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区组成；优选地，所述片段含有人EGFR的第310-646位多核苷酸序列，或由人EGFR的第310-646位多核苷酸序列组成；更优选地，所述片段的多核苷酸序列如SEQIDNO:1第2314-3318位多核苷酸所示。


3.一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：
(1)含有依次连接的抗GPC3单链抗体、抗CD19单链抗体、人IgG4铰链区、人CD28跨膜区、人41BB胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和
(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；
优选地，所述抗GPC3单克隆抗体为GC33。


4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一个或多个特征：
所述融合蛋白在所述抗GPC3单链抗体的N端还含有信号肽，优选地，所述信号肽的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅容，金涛，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31