一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法技术

本发明专利技术公开了一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法，色谱柱：Waters Sunfire C18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；流动相：A相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0～5min，0％B；5～20min，0％～80％B；20～25min，80％～0％B；流速：1.0mL/min；柱温：35℃。本发明专利技术通过在流动相中添加手性添加剂D‑脯氨酰胺，无需借助手性色谱柱即可实现洋艾内酯A和洋艾内酯B的分离。因此本发明专利技术HPLC方法可用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。

A HPLC method for the separation of a and B

【技术实现步骤摘要】
一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法。
技术介绍
洋艾内酯A和洋艾内酯B是一对同分异构体，其区别仅在一个连接-OH和-CH3的碳原子的手性不同，洋艾内酯A、B的化学结构式如下：由于洋艾内酯A和洋艾内酯B的化学结构极其相似，普通的HPLC方法较难将二者分开，因而无法用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。为了高效分离洋艾内酯A和洋艾内酯B，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术中存在的不足，提供一种分离洋艾内酯A、B的HPLC方法。本专利技术技术方案如下：一种分离洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC方法，包括如下色谱参数：色谱柱：WatersSunfireC18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；流动相：A相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0～5min，0％B；5～20min，0％～80％B；20～25min，80％～0％B；流速：1.0mL/min；柱温：35℃。进一步地，所述手性添加剂为D-脯氨酰胺。进一步地，检测波长为234nm。进一步地，进样量为10μL。有益技术效果：本专利技术通过在流动相中添加手性添加剂D-脯氨酰胺，可以有效分离洋艾内酯A和洋艾内酯B，基于该流动相的HPLC方法无需借助手性色谱柱即可实现手性化合物洋艾内酯A和洋艾内酯B的高效分离。因此本专利技术提供的HPLC方法可以用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。附图说明图1为洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC分离色谱图(手性流动相)，其中：A为洋艾内酯A对照品溶液，B为洋艾内酯B对照品溶液，C为混合对照品溶液；图2为洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC分离色谱图(普通流动相)，其中：A为洋艾内酯A对照品溶液，B为洋艾内酯B对照品溶液，C为混合对照品溶液。具体实施方式下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。一、试验材料洋艾内酯A和洋艾内酯B纯度≥98％，手性试剂D-脯氨酰胺纯度≥99％。甲醇为色谱纯，水为制水机生产的色谱用水。WatersSunfireC18液相色谱柱购自Waters，规格为4.6mm×250mm、5μm。高效液相色谱仪为日本岛津公司HPLC色谱仪。二、试验方法1、溶液配制：混合对照品溶液：分别精密称取洋艾内酯A、洋艾内酯B，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯A、洋艾内酯B浓度分别为0.5mg/mL的溶液，临用现配。洋艾内酯A对照品溶液：精密称取洋艾内酯A，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯A浓度为0.1mg/mL的溶液，临用现配。洋艾内酯B对照品溶液：精密称取洋艾内酯B，用甲醇溶解，配制成洋艾内酯B浓度为0.1mg/mL的溶液，临用现配。流动相A相：精密称取D-脯氨酰胺，用体积比1:9的甲醇-水溶解，配制成含有10mMD-脯氨酰胺的溶液，超声脱气，临用现配。流动相B相：精密称取D-脯氨酰胺，用体积比9:1的甲醇-水溶解，配制成含有10mMD-脯氨酰胺的溶液，超声脱气，临用现配。2、色谱参数色谱柱：WatersSunfireC18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；流动相：A相为体积百分浓度10％的甲醇水溶液，其中含有10mMD-脯氨酰胺；B相为体积百分浓度90％的甲醇水溶液，其中含有10mMD-脯氨酰胺；洗脱程序：0～5min，0％B；5～20min，0％～80％B；20～25min，80％～0％B；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测波长：234nm。3、注入分析分析前，流动相A相和流动相B相分别使用装有0.45μm混合膜的抽滤漏斗抽滤，混合对照品溶液、洋艾内酯A对照品溶液、洋艾内酯B对照品溶液分别使用装有0.45μm滤头的过滤器过滤。分别精密量取10μL混合对照品溶液、洋艾内酯A对照品溶液、洋艾内酯B对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。三、试验结果图1为上述方法分析、记录的色谱图，从该色谱图可以看出，洋艾内酯A和洋艾内酯B实现了有效分离，基线分离程度高，并且洋艾内酯B出峰时间早于洋艾内酯A。为了突出手性添加剂的作用，研究过程中还用对比方法对洋艾内酯A和洋艾内酯B进行分离，在该对比方法中，除了流动相不添加D-脯氨酰胺，其余色谱仪器、参数和操作方法完全一致，分离效果如图2所示，洋艾内酯A和洋艾内酯B共洗脱，无法有效分离。以上实施例说明，本专利技术通过在流动相中添加手性添加剂D-脯氨酰胺，可以有效分离洋艾内酯A和洋艾内酯B，基于该流动相的HPLC方法无需借助手性色谱柱即可实现手性化合物洋艾内酯A和洋艾内酯B的高效分离。因此本专利技术提供的HPLC方法可以用于检测洋艾内酯A中是否混有洋艾内酯B或洋艾内酯B中是否混有洋艾内酯A。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC方法，其特征在于，包括如下色谱参数：/n色谱柱：Waters Sunfire C18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；/n流动相：A相为体积百分浓度10%的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90%的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0~5min，0% B；5~20min，0%~80% B；20~25min，80%~0% B；/n流速：1.0mL/min；/n柱温：35℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种分离洋艾内酯A和洋艾内酯B的HPLC方法，其特征在于，包括如下色谱参数：
色谱柱：WatersSunfireC18液相色谱柱，规格为4.6mm×250mm、5μm；
流动相：A相为体积百分浓度10%的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；B相为体积百分浓度90%的甲醇水溶液，其中含有10mM手性添加剂；洗脱程序：0~5min，0%B；5~20min，0%~80%...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱阳晨，赵玲，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32