一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法。采用HPLC法建立不同产地黑骨藤指纹图谱，并测定其中4种咖啡酰基奎宁酸类化学成分含量，为黑骨藤药材品质评价提供依据；色谱柱为Xtimate C

Study on HPLC fingerprint and determination of multicomponent content of black bone vine

【技术实现步骤摘要】
一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法
本专利技术涉及一种指纹图谱研究及多成分含量测定方法，特别是一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法。
技术介绍
黑骨藤为萝藦科(Asclepiadaceae)杠柳属(PeriplocaLinn.)黑龙骨(PeriplocaforrestiiSchltr.)的干燥根或全株。药性：味辛、苦、性热；小毒。入冷经。祛风除湿，活血消痈。主治跌打损伤，风湿痹痛，闭经，乳痈，骨折等。是民间广泛应用于治疗闭合性软组织损伤、风湿与类风湿等疾病的民族药。化学成分包括：强心苷类、黄酮类、咖啡酰基奎宁酸类、苯丙素类、三萜类、甾体类等。但是不同产地黑骨藤的各成分含量存在较大的差异，为了对黑骨藤药材品质评价提供依据，所以研究出一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法。本专利技术具有通过黑骨藤HPLC指纹图谱与含量测定，能同时测定4种咖啡酰基奎宁酸类化学成分含量，不同产地之间该4种成分有较大的差异，各成分含量与产地有一定的关联为后期苗药黑骨藤质量标准研究奠定基础的特点。本专利技术的技术方案：一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法，包括有以下步骤：a、供试品溶液的制备：将黑骨藤粉碎过筛，粉末置干燥器中保存，精密称取黑骨藤粉末1.000g，置50mL具塞锥形瓶中，加入50％甲醇20mL，称定重量，超声提取30min，待冷却至室温后，用50％甲醇补足超声过程中损失的重量，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得；b、对照品溶液的制备：分别精密称取新绿原酸5.00mg、绿原酸5.04mg、隐绿原酸5.00mg、异绿原酸C5.03mg，分别置于5mL的容量瓶中，以0.1％的磷酸水和乙腈溶液使之充分溶解，定容，配制成浓度分别为新绿原酸1.00mg/mL、绿原酸1.008mg/mL、隐绿原酸1.00mg/mL、异绿原酸C1.006mg/mL的对照品溶液，备用；混合对照品溶液的配制：分别精密量取2mL的新绿原酸对照品溶液、5mL的绿原酸对照品溶液、2mL的隐绿原酸对照品溶液、2mL的异绿原酸C对照品溶液置于25mL容量瓶中，用75％的甲醇定容至刻度线，则混合对照品中4种成分的浓度分别为：新绿原酸0.08mg/mL、绿原酸0.2016mg/mL、隐绿原酸0.08mg/mL、异绿原酸C0.0805mg/mL；c、将供试品溶液和混合对照品溶液分别进行液相色谱进样测定，将色谱对比后，并分别计算出试品溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸的含量；d、将供试品溶液按进行梯度洗脱，记录HPLC色谱图，并导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，计算相似度。前述的苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法中，所述步骤a中，将黑骨藤粉碎过24目筛。前述的苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法中，所述步骤a中，是采用功率200W，频率40KHz进行超声提取30min。前述的苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法中，所述步骤b中，0.1％的磷酸水和乙腈溶液中0.1％的磷酸水与乙腈溶液的体积比为92:8。前述的苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法中，所述步骤c和d中的色谱条件为：色谱柱:XtimateC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为0.1％磷酸水(A)-乙腈(B)，按流动相进行梯度洗脱；检测波长为330nm；柱温为30℃；流速为1mL/min；进样量为10μL；流动相：与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用HPLC法建立不同产地黑骨藤指纹图谱，并测定其中4种咖啡酰基奎宁酸类化学成分含量，为黑骨藤药材品质评价提供依据。方法色谱柱为XtimateC18(4.6mmx250mm,5μm)；以0.1％磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相，梯度洗脱；流速1mL/min；柱温30℃；进样量10μL，检测波长为330nm。使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对样品进行相似度分析，此外，对27批黑骨藤药材测定结果中共有峰的峰面积进行处理，并应用数理统计软件SPSS进行聚类分析。结果初步建立了以16个共有峰为特征指纹信息，指认了其中4个，并对其新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C的含量进行了测定。结论通过黑骨藤HPLC指纹图谱与含量测定，能同时测定4种咖啡酰基奎宁酸类化学成分含量，不同产地之间该4种成分有较大的差异，各成分含量与产地有一定的关联为后期苗药黑骨藤质量标准研究奠定基础。实验例：检测方法研究1仪器与试剂电子天平(百分之一，型号：JE1002，上海浦春计量仪器有限公司)；电子天平(千分之一，型号：JA2003，上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；电子天平(十万分之一，型号：EX225DZH，奥豪斯仪器(常州)有限公司)；超声波清洗机(型号：SB-5200D7，宁波新芝生物科技股份有限公司)；高速多功能粉碎机(型号：0-300B，上海冰都电器有限公司)；循环水式多用真空泵(型号：SHZ-DIII，巩义市予华仪器有限责任公司)；高效液相色谱仪(型号：U-3000，赛默飞世尔科技)；电热鼓风干燥箱(型号：101-2AB，天津市泰斯特仪器有限公司)；高效液相色谱柱(型号：XtimateC18(4.6mm×250mm,5μm)，月旭科技股份有限公司)；其他常规玻璃仪器。甲醇(色谱纯，批号：20170914，天津市科密欧化学试剂有限公司)；丙酮(批号：20120731，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，批号：20180927，天津市科密欧化学试剂有限公司)；乙醇(批号：20171031，国药集团化学试剂有限公司)；无水乙醇(批号：20180618，天津市富宇精细化工有限公司)；甲酸(批号：20150612，成都金山化学试剂有限公司)；乙酸(批号：1601101，上海申博化工有限公司)；甲醇(分析纯，批号：20171023，天津市科密欧化学试剂有限公司)；娃哈哈纯净水(娃哈哈食品有限公司)；磷酸(批号：20180501，重庆川东集团有限公司)；绿原酸对照品(批号：CHB170713)；新绿原酸对照品(批号：CHB180308)；隐绿原酸对照品(批号：CHB170828)；异绿原酸C对照品(批号：CHB171013)，纯度均≥98％，均购于成都克洛玛生物科技有限公司。黑骨藤药材共27批，来源及其产地见表1，由贵州中医药大学刘刚老师鉴定为萝藦科(Asclepiadaceae)杠柳属(PeriplocaLinn)植物黑骨藤(PeriplocafarrestilSchltr.)。表1黑骨藤样品来源信息Table1SourceinformationofPeriplocafarrestilSchltr.2方法2.1供试品溶液的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法，其特征在于：包括有以下步骤：/na、供试品溶液的制备：将黑骨藤粉碎过筛，粉末置干燥器中保存，精密称取黑骨藤粉末1.000g，置50mL具塞锥形瓶中，加入50％甲醇20mL，称定重量，超声提取30min，待冷却至室温后，用50％甲醇补足超声过程中损失的重量，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得；/nb、对照品溶液的制备：分别精密称取新绿原酸5.00mg、绿原酸5.04mg、隐绿原酸5.00mg、异绿原酸C 5.03mg，分别置于5mL的容量瓶中，以0.1％的磷酸水和乙腈溶液使之充分溶解，定容，配制成浓度分别为新绿原酸1.00mg/mL、绿原酸1.008mg/mL、隐绿原酸1.00mg/mL、异绿原酸C1.006mg/mL的对照品溶液，备用；/n混合对照品溶液的配制：分别精密量取2mL的新绿原酸对照品溶液、5mL的绿原酸对照品溶液、2mL的隐绿原酸对照品溶液、2mL的异绿原酸C对照品溶液置于25mL容量瓶中，用75％的甲醇定容至刻度线，则混合对照品中4种成分的浓度分别为：新绿原酸0.08mg/mL、绿原酸0.2016mg/mL、隐绿原酸0.08mg/mL、异绿原酸C 0.0805mg/mL；/nc、将供试品溶液和混合对照品溶液分别进行液相色谱进样测定，将色谱对比后，并分别计算出试品溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸的含量；/nd、将供试品溶液按进行梯度洗脱，记录HPLC色谱图，并导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，计算相似度。/n...

【技术特征摘要】
1.一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法，其特征在于：包括有以下步骤：
a、供试品溶液的制备：将黑骨藤粉碎过筛，粉末置干燥器中保存，精密称取黑骨藤粉末1.000g，置50mL具塞锥形瓶中，加入50％甲醇20mL，称定重量，超声提取30min，待冷却至室温后，用50％甲醇补足超声过程中损失的重量，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得；
b、对照品溶液的制备：分别精密称取新绿原酸5.00mg、绿原酸5.04mg、隐绿原酸5.00mg、异绿原酸C5.03mg，分别置于5mL的容量瓶中，以0.1％的磷酸水和乙腈溶液使之充分溶解，定容，配制成浓度分别为新绿原酸1.00mg/mL、绿原酸1.008mg/mL、隐绿原酸1.00mg/mL、异绿原酸C1.006mg/mL的对照品溶液，备用；
混合对照品溶液的配制：分别精密量取2mL的新绿原酸对照品溶液、5mL的绿原酸对照品溶液、2mL的隐绿原酸对照品溶液、2mL的异绿原酸C对照品溶液置于25mL容量瓶中，用75％的甲醇定容至刻度线，则混合对照品中4种成分的浓度分别为：新绿原酸0.08mg/mL、绿原酸0.2016mg/mL、隐绿原酸0.08mg/mL、异绿原酸C0.0805mg/mL；
c、将供试品溶液和混合对照品溶液分别进行液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘刚，刘育辰，唐萍，代玉洁，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52