表达嵌合活化受体及嵌合刺激受体的细胞及其用途制造技术

本申请案提供免疫细胞(诸如T细胞)，其包括嵌合抗体‑T细胞受体TCR构筑体caTCR及嵌合信号传导受体CSR构筑体。所述caTCR包括特异性结合于靶抗原的抗原结合模块及能够募集至少一种TCR相关信号传导分子的T细胞受体模块TCRM，且所述CSR包括特异性结合于靶配体的配体结合域及能够提供刺激信号至所述免疫细胞的协同刺激信号传导域。还提供制造及使用这些细胞的方法。

Cells expressing chimeric activated receptor and chimeric stimulating receptor and their uses

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达嵌合活化受体及嵌合刺激受体的细胞及其用途相关申请案的交叉参考本申请案要求保护2017年4月26日提交的美国临时申请案第62/490,576号、2017年4月26日提交的美国临时申请案第62/490,578号及2017年4月26日提交的美国临时申请案第62/490,580号的优先权，所述申请案的内容在此以全文引用的方式并入本文中。以ASCII正文文件形式提交序列表以ASCII正文文件提交的以下内容以全文引用的方式并入本文中：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名称：750042001040SEQLIST.txt，记录日期：2018年4月24日，大小：107KB)。
专利技术涉及免疫细胞(诸如T细胞)，其包括嵌合抗体-T细胞受体(TCR)构筑体(caTCR)及嵌合信号传导受体(CSR)构筑体。所述caTCR包括特异性结合于靶抗原的抗原结合模块及能够募集至少一种TCR相关信号传导分子的T细胞受体模块(TCRM)，且所述CSR包括特异性结合于靶配体的配体结合域及能够提供刺激信号至所述免疫细胞的协同刺激信号传导域。
技术介绍
T细胞介导免疫为发展出抗原(Ag)-特异性T淋巴细胞来消除病毒、细菌、寄生虫感染或恶性细胞的适应过程。其也可涉及自体抗原的异常识别，导致自体免疫性发炎疾病。T淋巴细胞的Ag特异性是基于T细胞受体(TCR)对由主要组织相容性复合体(MHC)分子在Ag呈递细胞(APC)上呈递的独特抗原肽的识别(Broere等人,免疫药理学原理(PrinciplesofImmunopharmacology),2011)。由于在胸腺中成熟后的发育选择，各T淋巴细胞于细胞表面上表达独特的TCR。TCR以两种形式存在：αβ杂二聚体或γδ杂二聚体。T细胞于细胞表面上表达αβ形式或γδ形式的TCR。四条链α/β/γ/δ皆具有由高度多形“免疫球蛋白可变区”样N端域及“免疫球蛋白恒定区”样第二域组成的特征性胞外结构。这些域各自具有特征性域内二硫桥键。恒定区邻近细胞膜，其后为连接肽、跨膜区及短胞质尾区。杂二聚TCR的2条链之间的共价键是由位于短连接肽序列内的半胱氨酸残基形成，所述短连接肽序列桥接胞外恒定域与跨膜区，所述半胱氨酸残基与所配对的TCR链半胱氨酸残基在对应位置形成二硫键(TheTcellReceptorFactsbook,2001)。αβ及γδTCR与非多形膜结合CD3蛋白结合以形成功能性八聚TCR-CD3复合体，由TCR杂二聚体及三个二聚信号传导分子CD3δ/ε、CD3γ/ε及CD3ζ/ζ或ζ/η组成。各亚单位的跨膜域中的可电离残基形成将复合体固定在一起的极性相互作用网。关于T细胞活化，TCRN端可变区识别于靶细胞表面上呈递的肽/MHC复合体，而CD3蛋白则参与信号转导(Call等人,Cell.111(7):967-79,2002；TheTcellReceptorFactsbook,2001)。αβTCR也称作常规TCR，表达于大部分淋巴细胞上且由糖基化多形α及β链组成。不同的αβTCR可区分嵌入于尺寸及形状相对恒定的MHCII(大部分表达于APC细胞表面上)及MHCI(表达于所有有核细胞上)分子的表面中的不同肽。γδTCR尽管在结构上类似于αβTCR，但以与MHC呈递无关的方式识别携带碳水化合物、核苷酸或磷光体的抗原(TheTcellReceptorFactsbook,2001；Girardi等人,J.Invest.Dermatol.126(1):25-31,2006；Hayes等人,Immunity.16(6):827-38,2002)。在过去的二十年里，在免疫学及肿瘤生物学方面的根本性进展以及大量肿瘤抗原的鉴别促成了基于细胞的免疫疗法领域的显著进展。在基于细胞的免疫疗法领域中，T细胞疗法占据重要位置，其目标为通过将自体及离体扩增的T细胞转移给患者来治疗癌症，且已产生了一些值得注意的抗肿瘤反应(Blattman等人,Science.305(5681):200-5,2004)。举例来说，在黑色素瘤患者中，包含庞大的侵袭性肿瘤，在包括肝、肺、软组织及大脑的多个部位投与经离体扩增的天然存在的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)可介导在50-70％范围内的客观反应率(Rosenberg等人,Nat.Rev.Cancer.8(4):299-308,2008；DudleyME等人,J.Clin.Oncol.23(10):2346-57,2005)。TIL疗法的普遍应用的主要限制为难以产生具有抗肿瘤潜力的人类T细胞。作为替代方法，可经由T细胞工程改造将外源性高亲和力TCR引入患者的正常自体性T细胞中。这些细胞至淋巴缺乏患者中的授受性转移已显示可介导诸如黑色素瘤、结肠直肠癌及滑膜肉瘤的癌症的癌症消退(KunertR等人,Front.Immunol.4:363,2013)。最新的I期临床试验使用针对滑膜肉瘤的抗NY-ESO-1TCR，报告66％的整体反应率且在一名接受T细胞疗法的患者中达成完全反应(RobbinsPF等人,Clin.CancerRes.21(5):1019-27,2015)。TCR工程改造T细胞疗法的优势之一在于其可靶向潜在胞内肿瘤特异性蛋白的整个阵列，所述蛋白质经由MHC呈递经处理及传递至细胞表面。另外，TCR为高度敏感的且可仅由一些抗原肽/MHC分子活化，其又可触发细胞溶解性T细胞反应，包含细胞因子分泌、T细胞增殖及限定靶细胞的细胞溶解。因此，相较于抗体或小分子疗法，经TCR工程改造的T细胞因其以胞内靶抗原的极少拷贝杀灭靶细胞的能力而特别有价值(KunertR等人,Front.Immunol.4:363,2013)。然而，不同于治疗性抗体，其多半经由融合瘤或呈现技术发现，靶特异性TCR的鉴别要求从患者T细胞建立靶肽/MHC特异性TCR克隆且筛选出具有最佳靶抗原结合亲和力的正确α-β链组合。经常在从患者T细胞克隆TCR之后采用噬菌体/酵母呈现来进一步增强TCR的靶标结合亲和力。整个过程要求诸多领域的专业知识且耗时(KobayashiE等人,Oncoimmunology.3(1):e27258,2014)。TCR探索过程中的困难极大地阻碍了经TCR工程改造的T细胞疗法的普遍应用。其也受到治疗相关的毒性的妨碍，尤其是针对于肿瘤细胞上过度表达且也表达于健康细胞上的抗原的TCR，或识别脱靶肽/MHC复合体的TCR(RosenbergSA等人,Science.348(6230):62-8,2015)。近年来已研发出一种不同的方法来使T细胞参与靶向癌症免疫疗法。此新方法称作嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T)。其合并单克隆抗体的敏锐的靶向特异性与由细胞毒性T细胞提供的强力细胞毒性及长期存留。CAR是由识别细胞表面抗原的胞外域、跨膜区及胞内信号传导域构成。胞外域由来自单克隆抗体的重链及轻链的抗原结合可变区组成，所述可变区融合成单链可变片段(scFv)。胞内信号传导域含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)，诸如来自CD3ζ或FcRγ的那些，及一或多个协同刺激信号传导域，诸如来自CD2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫细胞，其包括：/na)嵌合抗体-T细胞受体TCR构筑体caTCR，其包括：/ni)特异性结合于靶抗原的抗原结合模块；及/nii)T细胞受体模块TCRM，其包括含有第一TCR跨膜域TCR-TM的第一TCR域TCRD及含有第二TCR-TM的第二TCRD，其中所述TCRM有助于募集至少一种TCR相关信号传导分子；及/nb)嵌合信号传导受体CSR，其包括：/ni)能够与靶配体结合或相互作用的配体结合模块；/nii)跨膜模块；及/niii)能够提供协同刺激信号至所述免疫细胞的协同刺激免疫细胞信号传导模块，其中所述配体结合模块及所述协同刺激免疫细胞信号传导模块并非源自同一分子，且其中所述CSR缺乏功能性原代免疫细胞信号传导域。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170426 US 62/490,576;20170426 US 62/490,578;20171.一种免疫细胞，其包括：
a)嵌合抗体-T细胞受体TCR构筑体caTCR，其包括：
i)特异性结合于靶抗原的抗原结合模块；及
ii)T细胞受体模块TCRM，其包括含有第一TCR跨膜域TCR-TM的第一TCR域TCRD及含有第二TCR-TM的第二TCRD，其中所述TCRM有助于募集至少一种TCR相关信号传导分子；及
b)嵌合信号传导受体CSR，其包括：
i)能够与靶配体结合或相互作用的配体结合模块；
ii)跨膜模块；及
iii)能够提供协同刺激信号至所述免疫细胞的协同刺激免疫细胞信号传导模块，其中所述配体结合模块及所述协同刺激免疫细胞信号传导模块并非源自同一分子，且其中所述CSR缺乏功能性原代免疫细胞信号传导域。


2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中所述CSR缺乏任何原代免疫细胞信号传导序列。


3.根据权利要求1或2所述的免疫细胞，其中所述靶抗原为细胞表面抗原。


4.根据权利要求1或2所述的免疫细胞，其中所述靶抗原为包括肽及主要组织相容性复合体MHC蛋白的复合体。


5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述第一TCR-TM源自第一T细胞受体的所述跨膜域中的一者且所述第二TCR-TM源自所述第一T细胞受体的另一跨膜域。


6.根据权利要求5所述的免疫细胞，其中所述TCR-TM中的至少一者为非天然存在的。


7.根据权利要求5或6所述的免疫细胞，其中所述第一T细胞受体为γ/δT细胞受体。


8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述抗原结合模块为多特异性的。


9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述caTCR进一步包括稳定模块，所述稳定模块包括第一稳定域及第二稳定域，其中所述第一稳定域及所述第二稳定域彼此具有使所述caTCR稳定的结合亲和力。


10.根据权利要求9所述的免疫细胞，其中所述稳定模块是选自由以下组成的群组：CH1-CL模块、CH2-CH2模块、CH3-CH3模块及CH4-CH4模块。


11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述靶抗原及所述靶配体相同。


12.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述靶抗原及所述靶配体不同。


13.根据权利要求12所述的免疫细胞，其中所述靶配体为表达于呈递所述靶抗原的细胞的表面上的配体。


14.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述靶配体为疾病相关配体。


15.根据权利要求14所述的免疫细胞，其中所述靶配体为癌症相关配体。


16.根据权利要求14所述的免疫细胞，其中所述靶配体为病毒相关配体。


17.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的免疫细胞，其中所述靶配体为免疫调节分子。


18.根据权利要求17所述的免疫细胞，其中所述免疫调节分子为免疫抑制受体，且所述CSR为所述免疫抑制受体的拮抗剂。


19.根据权利要求17所述的免疫细胞，其中所述免疫调节分子为免疫刺激受体，且所述CSR为所述免疫刺激受体的促效剂。


20.根据权利要求17所述的免疫细胞，其中所述靶配体为免疫检查点分子。


21.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宏，张鹏博，L·霍兰，许奕阳，B·K·斯特利，刘连兴，云泓若，
申请(专利权)人：优瑞科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US