鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1和SHISA3甲基化检测试剂盒，所述试剂盒包括碱性溶液、荧光PCR反应液，所述碱性溶液和所述荧光PCR反应液被热熔材料分层包装在同一PCR扩增管内；所述碱性溶液为pH值为12.5～13.3、浓度为50～100mmol/L的NaOH溶液，其体积不超过PCR反应液体积的50％；所述荧光PCR反应液包括针对DACT1、NFAT1、SHISA3基因的引物及探针和UDG酶。本发明专利技术通过在荧光PCR反应前进行分体系、分步热处理，有效地应用了UDG酶，有效地解决了甲基化检测中的PCR污染问题，并具有较高的检测灵敏度和特异性以及较高的检测通量。

Dact1, NFAT1, shisa3 methylation detection kit of NPC related genes

【技术实现步骤摘要】
鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化的检测试剂盒。技术背景鼻咽癌是一种起源于鼻咽上皮的恶性肿瘤，具有很强的局部侵袭性并可产生远处转移，其在中国南部和东南亚地区的发病率较高(TorreLAetal.,CACancerJClin,2015,65,87-108)。近年来调强放疗和化疗的应用大大改善了鼻咽癌的预后，尤其是早期鼻咽癌的预后，但仍有约30％的鼻咽癌患者最终发展为复发和/或远处转移(LaiSZetal.,IntJRadiationOncologyBiolPhys,2011,80,661-668)。因此，鼻咽癌治疗的主要挑战仍然是缺乏有效的生物标志物来开发更精确的诊断、预后、治疗和预防方法。与其他类型的癌症一样，鼻咽癌与多种基因突变和表观遗传异常有关；其中，启动子CpG岛的异常DNA甲基化是鼻咽癌发展和进展的基础(JiangWetal.,AsianPacJCancerPrev,2015,16,8059-80本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，包括碱性溶液、荧光PCR反应液，所述碱性溶液和所述荧光PCR反应液被热熔材料分层包装在同一PCR扩增管内；所述碱性溶液为pH值为12.5～13.3、浓度为50～100mmol/L的NaOH溶液，其体积不超过PCR反应液体积的50％；所述荧光PCR反应液包含PCR缓冲液，dNTP，针对DACT1、NFAT1、SHISA3基因的引物及探针，DNA聚合酶，无核酸酶的水和UDG酶。/n

【技术特征摘要】
1.鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，包括碱性溶液、荧光PCR反应液，所述碱性溶液和所述荧光PCR反应液被热熔材料分层包装在同一PCR扩增管内；所述碱性溶液为pH值为12.5～13.3、浓度为50～100mmol/L的NaOH溶液，其体积不超过PCR反应液体积的50％；所述荧光PCR反应液包含PCR缓冲液，dNTP，针对DACT1、NFAT1、SHISA3基因的引物及探针，DNA聚合酶，无核酸酶的水和UDG酶。


2.根据权利要求1所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述碱性溶液为pH值为12.5～12.8、浓度为70～80mmol/L的NaOH溶液，其体积不超过PCR反应液体积的50％。


3.根据权利要求1所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述热熔材料为疏水材料，其不与碱性溶液、PCR反应液和UDG酶互溶；优选地，所述的热熔材料为熔点54℃～56℃的石蜡。


4.根据权利要求1所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述引物及探针包含：针对DACT1基因的SEQIDNO.1至SEQIDNO.3、针对NFAT1基因的SEQIDNO.4至SEQIDNO.6、和/或针对SHISA3基因的SEQIDNO.
7至SEQIDNO.9。


5.根据权利要求1所述的鼻咽癌相关基因DACT1、NFAT1、SHISA3甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述引物3’端最外侧的3个碱基中的至少一个具有LNA修饰；优选地，所述引物的3’端最外侧的...

【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，吴诗扬，彭璨璨，刘志明，刘芳，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44