【技术实现步骤摘要】
一种基于尿液外泌体鉴定前列腺癌的分析方法
本专利技术涉及前列腺癌领域，具体为一种基于尿液外泌体鉴定前列腺癌的分析方法。
技术介绍
前列腺癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，随着我国人口老龄化的到来，前列腺癌发病率逐年上升，严重威胁老年男性的生命健康。目前，医学鉴定是否患有前列腺癌，主要通过穿刺活检，检测患者前列腺特异性抗原(PSA)的含量。PSA具有良好的前列腺组织特异性，但缺乏足够的前列腺癌特异性，在前列腺增生和前列腺炎的患者中，PSA的水平也会升高，导致一系列前列腺癌穿刺鉴定为阴性结果，增加患者的医疗费用和心里负担。目前，市场上出现基于PCA3(前列腺癌抗原3)/PSA的尿液检测试剂盒，应用转录介导的扩增(TMA)方法给出PCA3/PSA在尿液中的浓度(copy/mL)，然后二者相比后乘以1000即为前列腺癌风险评估值。该方法虽然提高前列腺癌预示诊断结果的准确度，且不必通过穿刺活检，降低患者的心里负担，但是该质控及结果准确率较低，复检率较高，与临床常规PCR仪器不兼容，需另外购置设备。目前，研究发现PCA3、E...
【技术保护点】
1.一种基于尿液外泌体鉴定前列腺癌的分析方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1、收集患者初始阶段尿液10～15mL，在2～6℃、2000～2500rpm离心5～10min，弃上清液，在底部沉淀内加入1.0～1.5mLPBS溶液并反复吹打混匀，得到混合外泌体溶液；/nS2、向S1中外泌体溶液加入1.0～1.5mL Trizol溶液，静置3～5min后，加入0.2～0.7mL氯仿，颠倒混匀，在2～6℃、10000～12000rpm离心10～15min，取上层澄清溶液，将上层澄清溶液通过多次离心，得到样品RNA溶液；/nS3、分别取阳性质控品、阴性质控品和S2中的样品RNA溶液...
【技术特征摘要】
1.一种基于尿液外泌体鉴定前列腺癌的分析方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、收集患者初始阶段尿液10～15mL，在2～6℃、2000～2500rpm离心5～10min，弃上清液，在底部沉淀内加入1.0～1.5mLPBS溶液并反复吹打混匀，得到混合外泌体溶液；
S2、向S1中外泌体溶液加入1.0～1.5mLTrizol溶液，静置3～5min后，加入0.2～0.7mL氯仿，颠倒混匀，在2～6℃、10000～12000rpm离心10～15min，取上层澄清溶液，将上层澄清溶液通过多次离心，得到样品RNA溶液；
S3、分别取阳性质控品、阴性质控品和S2中的样品RNA溶液各5～8μL，并分别与RT-PCR扩增试剂(该RT-PCR扩增试剂包PSA、PCA3、ERG以及SPDEF的特异引物和探针)进行扩增，分别得到阳性质控品PCR产物、阴性质控品PCR产物以及样品PCR产物(其中，阳性质控品PCR产物、阴性质控品PCR产物以及样品PCR产物中均包含有PSA-mRNA、PCA3-mRNA、ERG-mRNA以及SPDEF-mRNA)；
S4、分别对S3中的阳性质控品PCR产物、阴性质控品PCR产物以及样品PCR产物进行验证测序，并分别计算阳性质控品PCR产物、阴性质控品PCR产物以及样品PCR产物中的PCA3评分、ERG评分和SPDEF评分；
S5、分别对阳性质控品PCR产物与阴性质控品PCR产物的PCA3评分、ERG评分和SPDEF评分进行评判，若阳性质控品PCR产物的PCA3评分在56.4～60.3、ERG评分在60.2～65.4以及SPDEF评分在57.8～62.6之间，且阴性质控品PCR产物的PCA3评分在18.5～22.6、ERG评分在20.8～26.2以及SPDEF评分在19.4～24.7之间，则可进行下一步判断，若其中任何一项数值不在区间范围内，则从S3重新进行操作；
S6、对样品PCR产物的PCA3评分、ERG评分和SPDEF评分进行评判，若同时满足PCA3评分≧56.4、ERG评分≧60.2以及SPDEF评分≧57.8，则可判定该患者患有前列腺癌(准确率大于90％)。
2.根据权利要求1所述的一种基于尿液外泌体鉴定前列腺癌的分析方法，其特征在于：所述S1中PBS的pH为7.2～7.4。<...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。