一种人源化纳米抗体及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体公开了一种抗TNFα纳米抗体的人源化改造方法，本发明专利技术公开的人源化改造的抗TNFα纳米抗体核苷酸序列如SEQ.ID.NO.11所示，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.12；其改造方法包括以下步骤：确定FR2区三种关键氨基酸单突变与联合突变，核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1，3，5，7，9所示，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2，4，6，8，10所示；进一步多重序列对比确定人源化方案；通过上述得到人源化抗TNFα纳米抗体；经酵母表达系统表达。本发明专利技术改造的人源化抗TNFα纳米抗体，能保留较高的抗原亲和力，热稳定性以及生物活性，为今后人源化纳米抗体的疾病治疗药物的开发奠定基础。

A humanized nano antibody and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种人源化纳米抗体及其制备方法
本专利技术属于纳米抗体，具体涉及一种抗TNFα纳米抗体(NbTNFα)的人源化方法及其制备。
技术介绍
肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种研究最热门的多效应细胞因子，主要由活化的巨噬细胞分泌，同时淋巴细胞、可扑弗氏细胞、平滑肌细胞以及黑色素瘤、乳腺癌等多种肿瘤细胞也可以分泌。它不仅是炎症反应的关键介质，同时也可以通过调节信号转导引起细胞的凋亡与坏死。最近有新的研究发现，靶向TNFα的阻断剂在治疗相关疾病时，会引起糖尿病，银屑病，多发性硬化症等多种自身免疫疾病。另外，更多的研究也发现TNFα与肿瘤之间有着密切的关系，一方面低浓度的TNFα可以通过多种信号途径参与肿瘤的发生发展，另一方面高浓度的TNFα具有较强的抗肿瘤作用。目前对于TNFα的研究越来越深入，同时TNFα作为最成熟的靶点。目前已经多种TNFα抗体药物上市，其中包括三个进口(类克、恩利、修美乐)，三个国产(益赛普、强克、安百诺)。纳米抗体(nanobody)是一种特殊的小分子抗体，是从骆驼血清中分离出的一种缺失轻链和CH1恒定区的重链抗体，通过克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人源化抗TNFα纳米抗体，其特征在于，所述人源化抗TNFα纳米抗体的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.11所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种人源化抗TNFα纳米抗体，其特征在于，所述人源化抗TNFα纳米抗体的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.11所示。


2.根据权利要求1所述的一种人源化抗TNFα纳米抗体，其特征在于，编码人源化抗TNFα纳米抗体的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.12所示。


3.根据权利要求1所述的一种人源化抗TNFα纳米抗体制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
1)通过IMGT抗体CDRs区Numbering方案，对抗TNFα纳米抗体的CDRs与FR进行分区；
2)将对CDR3构象有影响的FR2骨架区的第42，50以及52位关键氨基酸进行不同组合突变，突变TNFα纳米抗体的核苷酸序列如SEQ.ID.NO....

【专利技术属性】
技术研发人员：纪雪梅，刘煜，赵明军，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32