本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体、制备方法以及应用。本发明专利技术提供的CXCR4‑Ost‑Lips以源于基质细胞衍生因子受体4基因重组蛋白为靶向载体，构建CXCR4‑Ost‑Lips并评价其对阿尔茨海默病模型小鼠的脑靶向作用。采用薄膜分散法制备CXCR4‑Ost‑Lips。小鼠活体成像及脑组织分布实验结果显示CXCR4‑Ost‑Lips可以增加药物在体内的循环时间，提高药物在AD小鼠脑内的分布，说明CXCR4‑Ost‑Lips在AD体内外模型中均具有较强的靶向性；并且CXCR4‑Ost‑Lips具有增强Ost‑Lips及游离Ost改善AD小鼠学习记忆能力、抑制炎症因子释放及增强抗氧化能力的作用。本发明专利技术提供的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用，为AD等神经系统疾病的治疗提供了新的思路。
A CXCR4 modified Osthol long circulating liposome, its preparation and Application
【技术实现步骤摘要】
一种CXCR4修饰的蛇床子素长循环脂质体、制备方法以及其应用
本专利技术属于医药
，具体涉及一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体、制备方法以及应用。
技术介绍
阿尔茨海默病（Alzheimer’disease，AD）是一种进行性发展的中枢神经系统退行性疾病，主要临床表现为逐渐发生的记忆力衰退、学习和保存新知识能力的下降，伴随着思维、行为精神障碍等。AD的病理特征包括β-淀粉样蛋白（Aβ）异常沉积、tau蛋白过度磷酸化形成的神经元纤维缠结、神经元丢失、氧化应激及神经炎症等。在过去的几十年中，上市的治疗药物只能缓解症状，并不能从根本上延缓AD的发病进程。蛇床子素（7-methoxy-8-isopentenoxycoumarin，C15H16O3，Osthole，Ost）是从伞形科植物独活中提取分离出来的香豆素类脂溶性化合物。药代动力学实验证实其可以透过血脑屏障，并分布于全身各个组织器官；并且专利技术人实验室前期实验结果已经发现Ost在阿尔茨海默病及脑损伤体内外模型中均具有较好的神经保护作用，但是Ost存在水溶性及稳定性差、生物利用度低等缺点，制约了其疗效的发挥。脂质体（Liposomes）是一种可以和细胞膜融合，将药物送进细胞内部，延长药物在体内的作用时间，增加体内血药浓度，从而提高药物疗效的新型纳米级载药体系。利用脂质体载药系统是改善蛇床子素溶解性、稳定性及生物利用度的有效途径之一，且目前国内外没有应用脂质体包载蛇床子素治疗AD的相关实验研究和报道。越来越多的学者认为神经炎症是AD的重要病理性特征之一，是由Aβ沉积引发的继发性反应，Aβ沉积会激活神经胶质细胞并释放细胞因子及趋化因子（chemmokines）。趋化因子是一种低分子蛋白质家族，广泛地表达于中枢神经系统，在神经炎症区域大量表达，能够吸引白细胞向感染部位迁移，是神经炎症效应的重要介质。AD患者脑内病灶区域表达大量的趋化因子SDF-1/CXCR4、MCP-1/CCR2、MIP-1α/CCR5、IL-8/CXCR1、IP-10/CXCR3等，其中趋化因子基质细胞衍生因子1（stromalcell-derivedfactor-1，SDF-1）首先在淋巴组织和骨髓中被发现，对其特异性受体基质细胞衍生因子受体4（CXCchemokinereceptor4，CXCR4）介导的造血干细胞或淋巴细胞的归巢起至关重要的作用。SDF-1/CXCR4具有改善神经系统退行性疾病小鼠认知功能，减少细胞凋亡和颅内炎症并诱导脑髓鞘再生的作用。有研究表明，CXCR4能够驱动骨髓间充质干细胞、造血干细胞向AD小鼠病灶区域迁移的作用，且AD患者脑内高表达的SDF-1是其唯一的配体，CXCR4具有成为脑靶向分子的潜质。由于普通脂质体稳定性不理想，靶向性不高，目前国内外没有应用脂质体包载靶向载体修饰蛇床子素治疗AD的相关实验研究和报道，因此，寻求新的AD治疗药物及靶点已经成为全世界医学专家亟待解决的问题。
技术实现思路
鉴于现有技术存在的问题，本专利技术的目的是提供一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体、制备方法以及CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。本专利技术将CRCR4重组蛋白修饰于蛇床子素脂质体（Ost-Lips）表面，利用CXCR4与其特异性配体SDF-1靶向结合的作用，将药物从血液转运至脑部病灶区域，实现靶向药物递释。采用薄膜分散法构建Ost-Lips与CXCR4修饰蛇床子素脂质体（CXCR4-Ost-Lips），对其理化性质进行表征并评价其脑靶向作用。本专利技术提供的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体利用阿尔兹海默病脑内微环境响应的聚合物组装载体包裹抗阿尔兹海默病药物在体内循环过程中保持稳定，到达阿尔兹海默病脑内后，高效的释放负载药物，提高脑组织和细胞内的药物浓度，从而提高疗效。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案。一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体是以基质细胞衍生因子受体4基因重组蛋白为靶向载体。一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体的制备原料按重量计由CXCR4重组蛋白1.5-2.5mg、DSPE-PEG20003-4mg、DSPE-PEG2000-MAL1-2mg、磷脂22-25mg、胆固醇4-5mg、蛇床子素1-1.4mg组成。进一步地，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体的制备原料按重量计由CXCR4重组蛋白2mg、DSPE-PEG20003.5mg、DSPE-PEG2000-MAL1.5mg、磷脂25mg、胆固醇5mg、蛇床子素1.4mg组成。一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体的制备方法，具体包括下述步骤：步骤一、精密称取CXCR4重组蛋白溶解于pH=8的磷酸缓冲液中，制成5mg/mL的CXCR4蛋白溶液；精密称取DSPE-PEG2000-MAL溶解于pH=6.5磷酸缓冲液中，制成3.6mg/mL的磷脂溶液；将CXCR4重组蛋白与Traut’s试剂按摩尔比1：10比例进行反应1h，将反应后的溶液置于截留分子量3Kd的透析袋中除去Traut’s试剂。将硫醇化的CXCR4蛋白与DSPE-PEG2000-MAL按摩尔比1：10比例进行反应得到CXCR4-DSPE-PEG2000。步骤二、采用薄膜分散法制备Ost-Lips：按摩尔比100:40:3.8:17.3精密称量磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000与Ost放在同一个圆底烧瓶中，加入5mL甲醇，40kHz超声溶解5min，用旋转蒸发器40℃减压去除溶剂，圆底烧瓶底部形成一层均匀的脂质膜，加入5mLpH为8.2的Tris碱缓冲液水化脂质膜，并于超声粉碎机中300W超声10min使脂质膜完全溶解，然后将得到的脂质膜水化液于超声波细胞粉碎机200w继续破乳10min，然后将脂质体溶液通过0.22μm聚碳酸酯膜挤压3次，即得Ost-Lips。步骤三、将步骤二制得的Ost-Lips与步骤一制得的CXCR4-DSPE-PEG2000按摩尔比658：1的比例室温孵育2h，即得CXCR4-Ost-Lips。一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。与现有技术比，本专利技术的有益效果如下。1）本专利技术提供的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体利用阿尔兹海默病脑内微环境响应的聚合物组装载体包裹抗阿尔兹海默病药物在体内循环过程中保持稳定，到达阿尔兹海默病脑内后，高效的释放负载药物，提高脑组织和细胞内的药物浓度，从而提高疗效。2）本专利技术制备的CXCR4-Ost-Lips的包封率及连接率分别为94.12±1.8%和77.94±4.8%，增加了AD细胞对药物的摄取并提高了药物在体内的循环时间及脑靶向性。3）本专利技术制备的CXCR4-Ost-Lips的药物释放率为72.93%，且不存在突释现象和药物降解现象，表明脂质体的双分子膜能大大延缓蛇床子素的释放速率，具有缓释作用，不仅可以避免药物直接释放造本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体，其特征在于，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体以基质细胞衍生因子受体4基因重组蛋白为靶向载体。/n
【技术特征摘要】
1.一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体，其特征在于，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体以基质细胞衍生因子受体4基因重组蛋白为靶向载体。
2.一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体，其特征在于，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体的制备原料按重量计由CXCR4重组蛋白1.5-2.5mg、DSPE-PEG20003-4mg、DSPE-PEG2000-MAL1-2mg、磷脂22-25mg、胆固醇4-5mg、蛇床子素1-1.4mg组成。
3.如权利要求2所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体，其特征在于，所述的CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体的制备原料按重量计由CXCR4重组蛋白2mg、DSPE-PEG20003.5mg、DSPE-PEG2000-MAL1.5mg、磷脂25mg、胆固醇5mg、蛇床子素1.4mg组成。
4.一种CXCR4修饰蛇床子素长循环脂质体的制备方法，具体包括下述步骤：
步骤一、精密称取CXCR4重组蛋白溶解于pH=8的磷酸缓冲液中，制成5mg/mL的CXCR4蛋白溶液；精密称取DSPE-PEG2000-MAL溶解于pH=6.5磷酸缓冲液中，制成3.6mg/mL的磷...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨静娴，倪颖男，孔亮，肖洪贺，吴雨桐，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。