用于BCL2抑制的P-乙氧基核酸制造技术

本文提供了用于寡核苷酸的改良的递送系统，所述递送系统包含有包含中性磷脂的脂质体和靶向编码BCL2的多核苷酸的P‑乙氧基寡核苷酸。还提供了用所述递送系统治疗患者的方法。

P-ethoxynucleic acid for BCL2 inhibition

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于BCL2抑制的P-乙氧基核酸本申请案要求2017年4月19日提交的美国临时申请案第62/487,302号的优先权，所述申请案的全部内容以引用的方式并入本文中。
本专利技术大体上涉及医学领域。更明确地说，本专利技术涉及与BCL2多核苷酸基因产物杂交的P-乙氧基寡核苷酸的脂质体配制物，和制造所述配制物并在医学中，甚至更明确地说在具有高BCL2基因表达或增加的活性的癌症治疗中使用所述配制物的方法。
技术介绍
Bcl-2是涉及于调节细胞凋亡或程序性细胞死亡中的蛋白质。Bcl-2的过度表达防止了响应于细胞损伤(cellularinsult)的细胞凋亡诱导，例如利用化学治疗剂进行的治疗。Bcl-2由于染色体重排而在超过90％滤泡性B细胞非霍奇金淋巴瘤中过度表达，并且是引发这种恶性肿瘤的关键因素。Bcl-2也在广泛多种的实体肿瘤中过度表达(据估计在40％癌症中过度表达)。举例来说，Bcl-2过度表达与前列腺癌从激素依赖性到激素独立性的进展相关联，并且可能促成在激素独立性前列腺癌中通常观察到的相对耐药表型。
技术实现思路
本文提供了在广泛范围的受Bcl2控制的癌细胞中诱导生长抑制和/或细胞凋亡的组合物和方法。Bcl2表达可以通过与防止Bcl2蛋白表达的中性脂质体组合的靶向编码Bcl2的多核苷酸的无毒耐核酸酶性寡核苷酸来靶向，因此消除了可用Bcl2蛋白池。在一个实施例中，提供了包含与BCL2多核苷酸基因产物杂交的寡核苷酸群的组合物。在一些方面中，所述群的寡核苷酸由通过磷酸酯骨架键连接在一起的核苷分子构成，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的至少一个是P-乙氧基骨架键，并且其中不超过80％每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的至少一个是磷酸二酯骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1-3中的任一个的序列。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1的序列。在一个方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1的序列，并且至少介于所述群的寡核苷酸的核苷酸5与6之间、核苷酸7与8之间、核苷酸9与10之间、核苷酸11与12之间和核苷酸14与15之间的磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:2的序列。在一个方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:2的序列，并且至少介于所述群的寡核苷酸的核苷酸5与6之间、核苷酸7与8之间和核苷酸9与10之间的磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:3的序列。在各种方面中，所述群的寡核苷酸抑制Bcl2的表达。在一些方面中，冻干组合物。在一些方面中，10％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；20％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；30％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；40％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；50％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；或60％到70％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键，或其中可衍生的任何范围是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，20％到90％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到80％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到70％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到60％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到50％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；或30％到40％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键，或其中可衍生的任何范围是磷酸二酯骨架键。在各种方面中，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或其中的任何值的磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。在各种方面中，至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或其中的任何值的磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。在某些方面中，磷酸二酯骨架键分布在整个寡核苷酸中。因此，寡核苷酸不是嵌合分子。在一些方面中，寡核苷酸不包含硫代磷酸酯骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸的尺寸介于7到30个核苷酸范围内。在某些方面中，所述群的寡核苷酸的尺寸介于12到25个核苷酸范围内。在各种方面中，所述群的寡核苷酸的尺寸是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。尺寸范围可以是所述群中的寡核苷酸的平均尺寸。在一些方面中，所述群的寡核苷酸的平均尺寸是7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的不超过5、6、7、8、8、9、10、11、11、12、13、14、15、15、16、17、18、19、20、20、21、22、23或24个分别是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸的平均尺寸是7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸，并且每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的至少2、2、2、2、3、3、3、3、4、4、4、4、4、5、5、5、5、5、5、6、6、6、6或6个分别是磷酸二酯骨架键。举例来说，所述群的寡核苷酸的平均尺寸可以是18个核苷酸，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的不超过14个是P-乙氧基骨架键；所述群的寡核苷酸的平均尺寸可以是20个核苷酸，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的不超过16个是P-乙氧基骨架键；所述群的寡核苷酸的平均尺寸可以是25个核苷酸，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的不超过20个是P-乙氧基骨架键；或所述群的寡核苷酸的平均尺寸可以是30个核苷酸，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的不超过24个是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，寡核苷酸群包含单一种类的寡核苷酸。在其它方面中，寡核苷酸群包含至少两个种类的寡核苷酸。单一种类的寡核苷酸可以具有相同核苷酸序列，但是在分子内的不同位置具有或缺乏P-乙氧基键。因此，所述群在核苷酸序列方面可以是均匀的，而在所述群的寡核苷酸之间的磷酸二酯骨架键的分布方面可以是不均匀的。另外，所述群在所述群的寡核苷酸之间的P-乙氧基骨架键和磷酸二酯骨架键的数量方面可以是不均匀的。作为非限制性实例，所述群的寡核苷酸的第一部分可以具有70％P-乙氧基键和30％磷酸二酯键，而所述群的寡核苷酸的第二部分可以具有60％P-乙氧基键和40％磷酸二酯键。在一些方面中，寡核苷酸群包含反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)或piwiRNA(piRNA)。在各种方面中，组合物进一步包含磷脂。在一些方面中，磷脂和寡核苷酸以约5:1到约100:1的摩尔比存在。在一些方面中，寡核苷酸和磷脂形成寡核苷酸-脂质复合物，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其包含寡核苷酸群，其中所述寡核苷酸与BCL2多核苷酸基因产物杂交，其中所述群的寡核苷酸由通过磷酸酯骨架键连接在一起的核苷分子构成，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的至少一个是P-乙氧基骨架键，并且其中不超过80％的每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170419 US 62/487,3021.一种组合物，其包含寡核苷酸群，其中所述寡核苷酸与BCL2多核苷酸基因产物杂交，其中所述群的寡核苷酸由通过磷酸酯骨架键连接在一起的核苷分子构成，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的至少一个是P-乙氧基骨架键，并且其中不超过80％的每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。


2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1到3中的任一个的序列。


3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1的序列。


4.根据权利要求3所述的组合物，其中至少介于所述群的所述寡核苷酸的核苷酸5与6之间、核苷酸7与8之间、核苷酸9与10之间、核苷酸11与12之间和核苷酸14与15之间的所述磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。


5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:2的序列。


6.根据权利要求2所述的组合物，其中至少介于所述群的所述寡核苷酸的核苷酸5与6之间、核苷酸7与8之间和核苷酸9与10之间的所述磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。


7.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:3的序列。


8.根据权利要求1所述的组合物，其中50％到80％所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。


9.根据权利要求8所述的组合物，其中60％到75％所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。


10.根据权利要求1所述的组合物，其中20％到50％所述磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。


11.根据权利要求10所述的组合物，其中25％到40％所述磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。


12.根据权利要求1所述的组合物，其中磷酸二酯骨架键分布遍及每一个寡核苷酸。


13.根据权利要求1所述的组合物，其中磷酸二酯骨架键不聚集在每一个寡核苷酸的一部分内。


14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群就存在于所述群的所述寡核苷酸中的P-乙氧基骨架键和磷酸二酯骨架键的数量而言是不均匀的。


15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的尺寸介于18到30个核苷酸范围内。


16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是18个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过14个是P-乙氧基骨架键。


17.根据权利要求15所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是20个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过16个是P-乙氧基骨架键。


18.根据权利要求15所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是25个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过20个是P-乙氧基骨架键。


19.根据权利要求15所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是30个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过24个是P-乙氧基骨架键。


20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群包含单一种类的寡核苷酸。


21.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群包含至少两个种类的寡核苷酸。


22.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群就所述群的所述寡核苷酸之间的磷酸二酯骨架键的分布而言是不均匀的。


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【专利技术属性】
技术研发人员：A·T·阿西扎瓦，P·尼尔森，
申请(专利权)人：拜奥帕斯控股股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US