用于STAT3抑制的P-乙氧基核酸制造技术

本文提供了用于寡核苷酸的改良的递送系统，所述递送系统包含有包含中性磷脂的脂质体和靶向编码STAT3的多核苷酸的P‑乙氧基寡核苷酸。还提供了用所述递送系统治疗患者的方法。

P-ethoxynucleic acid for STAT3 inhibition

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于STAT3抑制的P-乙氧基核酸本申请案要求2017年4月19日提交的美国临时申请案第62/487,292号的优先权，所述申请案的全部内容以引用的方式并入本文中。
本专利技术大体上涉及医学领域。更明确地说，本专利技术涉及与STAT3多核苷酸基因产物杂交的P-乙氧基寡核苷酸的脂质体配制物，和制造所述配制物并在医学中，甚至更明确地说在实体癌症和血液癌治疗中使用所述配制物的方法，所述实体癌症和血液癌具有高STAT3基因表达或增加的活性。
技术介绍
许多基因涉及于恶化前和晚期难治愈肿瘤中的癌细胞的持续增殖和存活中。已知信号转导及转录激活蛋白(STAT)信号传导路径的成员在这种能力中起着至关重要的作用。STAT3是在所有实体肿瘤和血液癌的约70％中被过度激活的转录因子。当被激活时，STAT3从胞质溶胶易位到细胞核中以驱动包括存活素、Bcl-XL、Mcl-1、c-Myc、细胞周期素D1、p21、细胞周期素E、基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶-2以及VEGF的大量基因的表达，来调节例如细胞存活、生长、迁移、侵入、转移和血管生成的广泛范围的细胞过程(Wu等人,2011；Hardee等人,2013)。另外，STAT3调节涉及于癌症进展中的几个重要信号传导路径，包括IL-3、IL-6和NF-κB级联，同时还激活增强其自身激活的反馈路径(Hardee等人，2013)。尽管STAT3通常在健康细胞的胞质溶胶中低水平表达，但在包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的癌症中，其常常被过度表达和激活(磷酸化并定位到细胞核)。在DLBCL中，其最常在疾病的ABC亚型中被激活，而不常在GC亚型DLBCL中被激活(Wu等人，2011；Hardee等人，2013；Scuto等人，2011)。重要的是，与表达较低含量的STAT3的肿瘤相比，STAT3过度表达、过度磷酸化和细胞核定位与这些肿瘤中的不良总体预后有关。另外，携带过度激活的STAT3的肿瘤在ABC亚型DLBCL中也展现出增加的NF-κB信号传导，表明STAT3信号传导在DLBCL的进展中起作用。由于STAT3蛋白的本质，因此设计小分子直接靶向其信号传导活性不容易，使其成为反义和其它基因敲落方法的理想靶标。鉴于STAT3在如此多种形式的癌症和其它疾病中所起的核心作用，因此已经进行了许多尝试，以设计肽、诱饵寡核苷酸(decoyoligonucleotide)和基于小分子的化合物来阻断STAT3激活、二聚化、DNA结合或加速酶失活(Miklossy等人，2013)。作为替代方法，多个小组正在努力研发JAK激酶(JAK)抑制剂以阻断STAT3在LCL和其它疾病中的磷酸化和激活，并获得了不同成功(Amin等人，2003；Fagard等人，2013)。靶向STAT3的方法特定地涉及使用寡核苷酸以通过基于反义寡核苷酸(ASO)和siRNA的技术通过RNaseH机制阻断STAT3mRNA转译成蛋白质或诱导RNA降解。这些策略提供了降低毒性的方法并且不太适应于耐药性突变。针对这种用于STAT3的方法的几次尝试均未成功。因此，需要用于治疗疾病的改良的靶向STAT3的反义组合物。
技术实现思路
本文提供了在广泛范围的受STAT3控制的癌细胞中诱导生长抑制和/或细胞凋亡的组合物和方法。STAT3蛋白表达可以通过与中性脂质体组合的靶向编码STAT3的多核苷酸的无毒耐核酸酶性寡核苷酸来防止，因此消除了可用STAT3蛋白池。在一个实施例中，提供了包含与STAT3多核苷酸基因产物杂交的寡核苷酸群的组合物。在一些方面中，所述群的寡核苷酸由通过磷酸酯骨架键连接在一起的核苷分子构成，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的至少一个是P-乙氧基骨架键，并且其中不超过80％每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的至少一个是磷酸二酯骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1-4中的任一个的序列。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1的序列。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:2的序列。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:3的序列。在一些方面中，所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:4的序列。在各种方面中，所述群的寡核苷酸抑制STAT3的表达。在一些方面中，冻干组合物。在一些方面中，10％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；20％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；30％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；40％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；50％到80％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键；或60％到70％磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键，或其中可衍生的任何范围是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，20％到90％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到80％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到70％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到60％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；20％到50％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键；或30％到40％磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键，或其中可衍生的任何范围是磷酸二酯骨架键。在各种方面中，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或其中的任何值的磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。在各种方面中，至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％或其中的任何值的磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。在某些方面中，磷酸二酯骨架键分布在整个寡核苷酸中。因此，寡核苷酸不是嵌合分子。在一些方面中，寡核苷酸不包含硫代磷酸酯骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸的尺寸介于7到30个核苷酸范围内。在某些方面中，所述群的寡核苷酸的尺寸介于12到25个核苷酸范围内。在各种方面中，所述群的寡核苷酸的尺寸是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。尺寸范围可以是所述群中的寡核苷酸的平均尺寸。在一些方面中，所述群的寡核苷酸的平均尺寸是7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸，其中每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的不超过5、6、7、8、8、9、10、11、11、12、13、14、15、15、16、17、18、19、20、20、21、22、23或24个分别是P-乙氧基骨架键。在一些方面中，所述群的寡核苷酸的平均尺寸是7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸，并且每个寡核苷酸中的磷酸酯骨架键中的至少2、2、2、2、3、3、3、3、4、4、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其包含寡核苷酸群，其中所述寡核苷酸与STAT3多核苷酸基因产物杂交，其中所述群的寡核苷酸由通过磷酸酯骨架键连接在一起的核苷分子构成，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的至少一个是P-乙氧基骨架键，并且其中不超过80％的每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170419 US 62/487,2921.一种组合物，其包含寡核苷酸群，其中所述寡核苷酸与STAT3多核苷酸基因产物杂交，其中所述群的寡核苷酸由通过磷酸酯骨架键连接在一起的核苷分子构成，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的至少一个是P-乙氧基骨架键，并且其中不超过80％的每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。


2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1到4中的任一个的序列。


3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:1的序列。


4.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:2的序列。


5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:3的序列。


6.根据权利要求2所述的组合物，其中所述群的寡核苷酸包含根据SEQIDNO:4的序列。


7.根据权利要求1所述的组合物，其中50％到80％所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。


8.根据权利要求7所述的组合物，其中60％到75％所述磷酸酯骨架键是P-乙氧基骨架键。


9.根据权利要求1所述的组合物，其中20％到50％所述磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。


10.根据权利要求9所述的组合物，其中25％到40％所述磷酸酯骨架键是磷酸二酯骨架键。


11.根据权利要求1所述的组合物，其中磷酸二酯骨架键分布遍及每一个寡核苷酸。


12.根据权利要求1所述的组合物，其中磷酸二酯骨架键不聚集在每一个寡核苷酸的一部分内。


13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群就存在于所述群的所述寡核苷酸中的P-乙氧基骨架键和磷酸二酯骨架键的数量而言是不均匀的。


14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的尺寸介于18到30个核苷酸范围内。


15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是18个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过14个是P-乙氧基骨架键。


16.根据权利要求14所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是20个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过16个是P-乙氧基骨架键。


17.根据权利要求14所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是25个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过20个是P-乙氧基骨架键。


18.根据权利要求14所述的组合物，其中所述群的所述寡核苷酸的平均尺寸是30个核苷酸，其中每一个寡核苷酸中的所述磷酸酯骨架键中的不超过24个是P-乙氧基骨架键。


19.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群包含单一种类的寡核苷酸。


20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述寡核苷酸群包含至少两个种类的寡核苷酸。


21.根据权利要求1所述的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·T·阿西扎瓦，
申请(专利权)人：拜奥帕斯控股股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US