用于检测分析物的方法技术

本公开提供用于使用单一固相检测多种分析物的方法。本公开还涉及固相的制备，所述固相包含容器，所述容器具有其上附着的针对至少两种不同分析物的抗体。本公开的方法可用于例如样品中分析物的定量检测及其测量。

Methods used to detect analytes

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测分析物的方法相关申请的交叉参考本申请要求2017年3月7日提交的美国临时申请第62/468114号的优先权的益处，其全部内容通过参考结合至本文中。公开领域本公开涉及用于检测和测量样品中的分析物的方法。本公开还涉及固相的制备，固相包含具有其上固定的抗体的容器，抗体针对至少两种不同的分析物。例如，本公开的方法可用于检测样品中的分析物及其测量。背景用于确定样品中特定分析物的存在和量的目前定量方法和测定(比如免疫测定)限于每个固相单一抗原(分析物)的识别。通常，这种定量方法限于使用固相，比如含有微孔的板或其上仅固定一种特定抗体的膜。参见US2016/0289308、US2016/0297893。一般地，在这种测定中使用的抗体以使其一旦结合样品中的抗原即可检测(或不可检测)的方式标记(例如荧光、放射性、发光、二抗)。因此，为了定量检测样品中的一种以上分析物，目前的测定采用单独的固相组分，每种固相组分具有对其上固定的一种特定分析物特异性的单一抗体。先前利用单一固相检测多种分析物的尝试已涉及使用侧流测定(参见例如US2016/0289308、US2016/0297893和US2010/061377)。侧流测定需要测试样品沿着吸水或非吸水多孔固相(比如膜)以色谱方式流动。在典型的侧流测定中，将样品在第一位置(即应用区)应用于固相并穿过固相直至样品到达固相上的第二离散位置(第一测试区)，其包含对第一分析物特异性的第一抗体。然后分析第一测试区以确定样品中第一分析物的存在或量。然后样品必须流动直至其到达固相上的第三离散位置(第二测试区)，其包含对另一种分析物特异性的另一抗体。在侧流测定中，然后分析第二测试区以确定样品中分析物的存在或量。在侧流测定中确定分析物的存在需要在固相上的每个离散位置(测试区)处的可检测信号，其然后通过仪器比如荧光计读取。然而，为了辨别在每个区中检测到的每种分析物的量，一般地使用不同标记，比如不同波长的光、不同的荧光染料标记或不同的标记二抗。因此，侧流检测测定昂贵，技术复杂并且容易出现基于操作者的错误。固相分析物免疫测定通常能够“检测”样品中多种分析物的存在，但仅能以定性方式。在一些情况下，包括其上固定多种分析物的固相的固相分析物免疫测定可为定量的，但这些限于竞争性测定。例如，在固相分析物免疫测定中，非抗体的分析物与固相结合。结合的分析物与样品中存在的分析物竞争结合对目标分析物特异性的标记抗体。在这些测定中，与含有全部与可检测抗体结合的所固定分析物的固相(即对照)相比较，在洗涤步骤中去除样品(和与其结合的抗体)，导致信号丧失。因此，当与对照相比较时，从减少信号推导出样品中分析物的存在。如上所述，使用单一固相检测多种分析物需要差异标记的抗体，并且需要将样品和特异性抗体应用和重新应用于固相。这种应用所需的多种标记抗体的应用和随后的洗涤步骤使得竞争性固相测定效率低，劳动强度大且成本高。另外，竞争性测定对非复合的标记抗体敏感，所述非复合的标记抗体与样品中存在的“免疫反应性”多肽种类而不是目标分析物结合，并因此易于产生假阳性。通过使用其上连接多种抗体的固相来检测多种分析物的固相免疫测定通常为定性的。例如，当将样品提供给结合多种抗体的固相时，其每种对不同目标抗原特异性的抗体与样品接触；如果样品含有任何目标抗原则会产生信号。然而，该测定在没有不同的不同标记和用于检测每种不同标记的方法的情况下不能在样品中存在的许多目标抗原之间进行辨别。进一步地，在这种测定中获得的信号为由所有不同的结合抗原产生的信号的复合信号。因此，目前的方法在没有使用针对每种目标分析物的单独固相的情况下不能定量确定样品中存在多少特定目标抗原。鉴于上述情况，产生对测定的每种分析物特异性的单独固相组分的要求使得多分析物测定不精确、昂贵、技术复杂且耗时。因此，需要能够使用单一固相定量检测样品中的多种分析物的方法。公开概述本文提供的方法利用包含多个容器的单一固相。每个容器具有至少两种其上附着的抗体(捕获抗体)。每种捕获抗体识别抗原(分析物)，并且至少两种捕获抗体识别至少两种不同的目标抗原(分析物)。因此，本文提供的方法助于使用单一固相检测多种分析物。使用单一固相检测多种分析物消除了与产生用于检测每种特定目标分析物的单独固相相关的成本。使用单一固相检测样品中的多种分析物也需要较少的消耗品(例如试剂和缓冲液)并且使得能够更有效地使用自动化测定仪器内的内部空间。本公开的方法还通过经简化已知的实验程序和减少检测样品中的多种分析物所需的组分的量来限制用户出错的可能性，从而提高效率。另外，本方法利用具有相同可检测标记的标记的检测抗体。这通过减少对差异可检测标记以及用于定量检测多种信号的方法的需要进一步简化多种分析物的检测。在第一方面，本公开提供用于检测样品中目标分析物的存在的方法。方法包括提供包含容器的固相，容器各自包被有抗体，抗体结合(捕获)样品中至少两种不同的目标分析物(如果存在的话)。每个容器包含两种或更多种固定于其表面的不同的捕获抗体，其中至少两种固定的抗体各自识别不同的分析物(即至少两种固定的抗体识别至少两种不同的分析物)。在一些实施方案中，分析物为包含目标表位或氨基酸序列的任何多肽。在某些实施方案中，多肽(蛋白)分析物可从细胞分离、合成产生或重组产生。在一个实施方案中，分析物为由细胞产生的蛋白或其片段。在某些实施方案中，分析物为存在于细胞膜的最外表面上的蛋白。在一个实施方案中，存在于细胞膜的最外表面上的蛋白具有抗体可及的抗原或表位。在仍然其他的实施方案中，分析物为由细胞分泌的蛋白或其片段。在某些示例性的实施方案中，分析物为胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)、其衍生物、类似物或同系物。在其他示例性的实施方案中，分析物为基质金属蛋白酶的抑制剂、其衍生物、类似物或同系物。在某些实施方案中，分析物为金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)。在一些实施方案中，本公开的分析物包含至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种或更多种不同的蛋白或多肽。在具体的实施方案中，本公开的分析物包含两种不同的多肽或蛋白。在一个实施方案中，本公开的方法用于检测样品中TIMP2和IGFP7的存在和/或量。在一些实施方案中，固定于固相容器的抗体识别至少两种不同的抗原或表位(分析物)。在本方法的某些实施方案中，固相容器包含固定于其表面的2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种不同的抗体。在具体的实施方案中，捕获抗体结合两种不同的目标分析物。在另一个实施方案中，固定于固相的每个容器的捕获抗体对TIMP2和IGFP7具有特异性。在一些实施方案中，抗体为对TIMP2和IGFBP7特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，固定于固相的每个容器的捕获抗体为对TIMP2和IGFBP7特异性的小鼠单克隆抗体。在一个具体的实施方案中，对TIMP2特异性的捕获抗体为小鼠单克隆抗体6E2.1，和对IGFBP7特异性的捕获抗体为小鼠单克隆抗体1D6。在某些实施方案中，捕获抗体可直接或间接地附着于容器的表面。例如，捕获抗体可通过捕获抗体的一部本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测分析物的方法，所述方法包括：/n提供包含两个容器的固相，其中所述两个容器的每一个包含其上附着的第一捕获抗体和第二捕获抗体，其中所述第一捕获抗体与第一分析物结合和所述第二捕获抗体与第二分析物结合，并且其中所述第一分析物和所述第二分析物不同；/n提供样品，其中将所述样品的一部分提供给所述两个容器的每一个；/n向所述固相提供对所述第一分析物特异性的第一检测抗体和对所述第二分析物特异性的第二检测抗体，其中使第一容器中所述样品的部分与所述第一检测抗体接触和使第二容器中所述样品的部分与所述第二检测抗体接触，并且其中所述第一检测抗体和所述第二检测抗体产生相同的可检测信号；和/n在所述样品中检测所述第一分析物和检测所述第二分析物。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170307 US 62/468,1141.一种用于检测分析物的方法，所述方法包括：
提供包含两个容器的固相，其中所述两个容器的每一个包含其上附着的第一捕获抗体和第二捕获抗体，其中所述第一捕获抗体与第一分析物结合和所述第二捕获抗体与第二分析物结合，并且其中所述第一分析物和所述第二分析物不同；
提供样品，其中将所述样品的一部分提供给所述两个容器的每一个；
向所述固相提供对所述第一分析物特异性的第一检测抗体和对所述第二分析物特异性的第二检测抗体，其中使第一容器中所述样品的部分与所述第一检测抗体接触和使第二容器中所述样品的部分与所述第二检测抗体接触，并且其中所述第一检测抗体和所述第二检测抗体产生相同的可检测信号；和
在所述样品中检测所述第一分析物和检测所述第二分析物。


2.权利要求1的方法，其中所述两个容器为锥形容器。


3.权利要求1的方法，其进一步包括量化在所述两个容器的每一个中检测到的分析物的量。


4.权利要求3的方法，其中所述量化包括获得每个容器所检测的分析物的量并提供单一数值。


5.权利要求1的方法，其进一步包括在所述两个容器的每一个中分配发光底物和电子转移剂，其中所述发光底物在所述第一容器和所述第二容器的每一个中产生可检测信号。


6.权利要求5的方法，其中在所述第一容器和所述第二容器的每一个中的所述可检测信号为光。


7.权利要求6的方法，其中在所述第一容器和所述第二容器的每一个中的所述可检测信号为相同波长的光。


8.权利要求7的方法，其中所述样品中所述第一分析物的所述量与所述第一容器中检测到的光量成正比。


9.权利要求8的方法，其中所述样品中所述第二分析物的所述量与所述第二容器中检测到的光量成正比。


10.权利要求5的方法，其中所述发光底物通过在第一容器中与所述检测抗体接触或通过在第二容器中与所述检测抗体接触而被氧化。


11.权利要求5的方法，其中所述发光底物包含鲁米诺衍生物和过酸盐。


12.权利要求5的方法，其中所述电...

【专利技术属性】
技术研发人员：G奥邦纳，S杰克逊，T曼根，J帕塞尔斯，
申请(专利权)人：奥索临床诊断有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US