激活NK细胞的融合蛋白、NK细胞和包含其的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于癌症治疗的融合蛋白及其用途。本发明专利技术的用于预防或治疗癌症的融合蛋白包括：结合肿瘤相关抗原的抗体或其片段；接头；以及包含自然杀伤细胞诱导蛋白CXCL16的融合多肽。因此，当与自然杀伤细胞(一种免疫细胞治疗剂)共同施用时，融合多肽大大提高了自然杀伤细胞向表达特定抗原的癌症中的引入，因而对预防或治疗癌症具有显著作用。

Fusion protein activating NK cells, NK cells and pharmaceutical composition containing them

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】激活NK细胞的融合蛋白、NK细胞和包含其的药物组合物
本专利技术涉及一种新的抗癌免疫细胞疗法，其使用融合蛋白和自然杀伤细胞以增加自然杀伤细胞向癌症的流入并最大化抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。另外，本专利技术涉及用融合蛋白治疗癌症的方法以及融合蛋白的各种用途。
技术介绍
自然杀伤(NK)细胞是一种在体内免疫系统防御机制的一线中起作用的效应细胞，如无需事先用抗原致敏即可执行去除肿瘤细胞和感染有细菌、细胞内寄生虫或病毒的宿主细胞的功能；排斥不适当的骨髓移植；调节T细胞的免疫应答；等等。自然杀伤细胞的免疫功能取决于诱导其杀伤功能的刺激信号与抑制杀伤功能的抑制信号之间的平衡。特别地，强烈接收刺激信号的自然杀伤细胞攻击并去除靶细胞，而强烈接收抑制信号的自然杀伤细胞使靶细胞存活。作为自然杀伤细胞的杀伤功能，有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和自然杀伤。ADCC和自然杀伤的共同点是，它们都需要蛋白酪氨酸激酶(PTK)的激活，并都被自然杀伤细胞抑制受体所递送的抑制信号阻断。NK细胞的杀伤功能取决于刺激信号和抑制信号之间的平衡，因此自然杀伤细胞可以区分正常宿主细胞与感染或癌变的细胞，以去除后者。可以根据CD56的表达水平对自然杀伤细胞进行分类，至少90％CD56暗的自然杀伤细胞是分布在外周血中的自然杀伤细胞。众所周知，CD56暗比其他表达CD56的自然杀伤细胞具有更高的细胞毒性，并显示出高表达的杀伤Ig样受体(KIR)和穿孔素，它们是自然杀伤细胞的激活受体。还已知与CD56暗自然杀伤细胞相比，CD56明自然杀伤细胞数量较少并且具有较低的细胞毒性能力。然而，据报道，CD56明自然杀伤细胞不仅具有高的免疫调节功能(IFN-γ、TNF-α等)，而且还具有高ADCC功能(TheJournalofImmunology，2011，186：6753-6761)。特别地，预期CD56明自然杀伤细胞在组合疗法中对抗体和癌症具有改善的作用。另一方面，众所周知，肿瘤可以表达与其恶性表型相关的独特蛋白质，或者可以比正常细胞在数量上过表达某种蛋白质。独特蛋白质在肿瘤细胞表面上的表达使得有可能探测肿瘤的表型特性、生化组成和活性，从而为诊断和表征疾病提供机会，或者也有可能靶向肿瘤相关抗原，从而开发出一种新的肿瘤治疗方法。已知对肿瘤相关抗原显示特异性的抗原抗体反应的抗体通过诱导各种体内免疫应答(抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性、补体依赖性细胞毒性(CDC)活性等)攻击癌细胞并导致细胞死亡。因此，目前正在开发可用于肿瘤治疗等的抗体，但是增强其治疗功效的研究和开发则很少。在这些背景下，需要通过使用自然杀伤细胞和在癌细胞表面上特异性表达的癌抗原对有效治疗癌症的方法进行研究和开发。[现有技术参考][专利文件]韩国专利公开号10-2006-0079180韩国专利公开号10-2015-0063145
技术实现思路
技术问题本专利技术提供了一种融合多肽，其包含：结合肿瘤相关抗原的抗体或其片段；接头；和自然杀伤细胞诱导蛋白CXCL16。本专利技术还提供了编码融合多肽的核酸；包含其的载体；或包含所述载体的宿主细胞。本专利技术还提供了用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含融合多肽，所述融合多肽包含：结合肿瘤相关抗原的抗体或其片段；接头；和自然杀伤细胞诱导蛋白CXCL16。本专利技术还提供了用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含融合多肽和自然杀伤细胞，所述融合多肽包含：结合肿瘤相关抗原的抗体或其片段；接头；和自然杀伤细胞诱导蛋白CXCL16。本专利技术还提供了包含融合多肽的组合物，其用于癌症治疗。本专利技术还提供了融合多肽在制备用于癌症治疗的药物中的用途。本专利技术还提供了融合多肽用于癌症治疗的用途。本专利技术还提供了一种治疗癌症的方法，其通过向患者施用药学有效量的包含融合多肽的组合物进行。技术方案本专利技术人已经研究和开发了一种方法，其用于有效地将自然杀伤细胞，一种免疫细胞治疗剂引入癌组织。结果，本专利技术人已经鉴定，在自然杀伤细胞表面上表达的活性诱导物质的受体中，CXCR3和CXCR6在自然杀伤细胞表面上过表达，然后本专利技术人鉴定，在其配体中，CXCL16对自然杀伤细胞的迁移有效，然后鉴定通过制备和施用肿瘤相关抗原特异性融合蛋白以及具有自然杀伤细胞诱导特性的CXCL16，显著增加了自然杀伤细胞向癌症中的诱导，因此对癌症治疗具有显著作用，从而完成了本专利技术。如本文所用，术语“肿瘤相关抗原”是指在正常细胞上不表达、或与正常细胞相反仅在肿瘤细胞上过表达的抗原，优选在肿瘤细胞表面上特异性表达的抗原，其中所述抗原是指由肿瘤细胞产生的抗原性物质。在肿瘤上特异性表达的肿瘤相关抗原可以包括例如4-1BB(CD137)、5T4、AGS-5、AGS-16、血管生成素2、CD19(分化簇19)、B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、B7DC、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、癌胚抗原、CTLA4、Cripto、ED-B、ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFL7、EpCAM、EphA2、EphA3、EphB2、FAP、纤连蛋白、叶酸受体、神经节苷脂GM3、GD2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、gp100、gpA33、GPNMB、ICOS、IGFIR、整联蛋白αυ、整联蛋白αυβ、KIR、LAG-3、LewisY、间皮素、c-MET、Her2(人EGFR相关的2)、MN碳酸酐酶IX、MUC1、MUC16、粘连蛋白-4、NKGD2、NOTCH、OX40、OX40L、PD-1、PD-L1(程序性死亡配体1)、PSCA、PSMA、RANKL、ROR1、ROR2、SLC44A4、多配体聚糖-1、TACI、TAG-72、腱糖蛋白、TIM3、TRAILR1、TRAILR2、EGFR、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3或等等，但不限于此。在本专利技术的一个实施例中，鉴定了融合多肽对间皮素、PD-L1、Her2、CD19、MUC1、EGFR和VEGFR的作用。如本文所用，术语“抗体”包括完整抗体、具有抗原识别和结合能力的抗体片段、单克隆抗体、多克隆抗体和抗体样物质。抗体可以是IgM、IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgD、IgA或IgE。如本文所用，术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分，通常是包含完整抗体的抗原结合或可变区的分子。抗体片段的示例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；和单结构域抗体。与非肿瘤细胞或正常细胞相比，“抗体或其片段”可以特异地或优选地结合肿瘤细胞，优选地肿瘤相关抗原特异性地在肿瘤中表达。在本文中，“特异性结合”或“优选结合”是指两个结合伴侣(例如，抗体及其结合伴侣，即抗原)之间的结合对于两个结合伴侣是选择性的，并且可以区别于不需要的或非特异的相互作用。如本文所用，术语“单链Fv”或“scFv(单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合多肽，其包含：/n结合肿瘤相关抗原的抗体或其片段；/n接头；和/n自然杀伤(NK)细胞诱导蛋白CXCL16。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170405 KR 10-2017-00439881.一种融合多肽，其包含：
结合肿瘤相关抗原的抗体或其片段；
接头；和
自然杀伤(NK)细胞诱导蛋白CXCL16。


2.根据权利要求1所述的融合多肽，其中所述肿瘤相关抗原选自间皮素、PD-L1(程序性死亡配体1)、Her2(人EGFR相关的2)、CD19、MUC1、EGFR、VEGFR、B7H1、B7H2、B7H3、BT-062、BTLA、CAIX、4-1BB、5T4、AGS-5或AGS-16中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的融合多肽，其中所述抗体是单链Fv片段(scFv)。


4.根据权利要求1所述的融合多肽，其中所述接头包含弗林蛋白酶切割位点。


5.根据权利要求4所述的融合多肽，其中所述弗林蛋白酶切割位点包含SEQIDNO：15的氨基酸序列。


6.根据权利要求1所述的融合多肽，其中所述CXCL16包含SEQIDNO：17的氨基酸序列。


7.一种核酸，其编码根据权利要求1至9中任一项所述的融合多肽。


8.一种表达载体，其包含权利要求7所述的编码融合多肽的核酸。


9.一种宿主细胞，其包含权利要求8所述的表达载...

【专利技术属性】
技术研发人员：金锡湖，李在民，赵德，
申请(专利权)人：韩国生命工学研究院，
类型：发明
国别省市：韩国;KR