一种γδT细胞和NK细胞共培养诱导扩增的方法技术

本发明专利技术公开了一种γδT细胞和NK细胞共培养诱导扩增的方法，γδT细胞和NK细胞通过共培养方式获得，通过采集外周血分离筛选单个核细胞并刺激诱导单个核细胞诱导出γδT细胞和NK细胞，后通过活化扩增培养，扩增出具有数量大、扩增倍数高、细胞毒性强等特点的γδT细胞和NK细胞复合细胞物，复合形成一种共培养细胞组合物，其具有非常好的临床应用价值。且该共培养诱导扩增方法提高细胞培养效率，大幅度降低培养成本，也降低了培养技术难度，简化了在临床中治疗过程，也降低了治疗成本，简化了治疗手段。

A method of co culture of \u03b3 \u03b4 T cells and NK cells to induce amplification

【技术实现步骤摘要】
一种γδT细胞和NK细胞共培养诱导扩增的方法
：本专利技术涉及一种细胞诱导扩增方法，具体涉及γδT细胞和NK细胞共培养诱导扩增的方法，及使用该方法获得的γδT-NK细胞复合细胞在癌细胞SK-BR-3上的应用。
技术介绍
：γδT细胞是一种既能杀伤癌细胞，肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞。γδT细胞是执行固有免疫功能的T细胞，其TCR由γ和δ链组成。此类T细胞主要分布于肠道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下组织，在外周血中只占CD3+T细胞的0.5％-1％。其TCR缺乏多样性，可直接识别某些完整的多肽抗原。γδT细胞所识别的抗原种类有限:①HSP；②感染细胞表面CD1分子提成的脂类抗原；③某些病毒蛋白或表达于感染细胞表面的病毒蛋白；④细菌裂解产物中的磷酸化抗原。γδT细胞是一种既能杀伤癌细胞，肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞，它的杀伤性较强，但肿瘤干细胞杀伤不如NK细胞。因此，它主要用于杀伤癌细胞与协助DC细胞识别发现癌细胞抗原，然后将这些抗原进行杀伤或是传递给其他细胞。同时，γδT细胞主要分布于皮肤和黏膜组织上，因此对于黏本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种γδT细胞和NK细胞共培养诱导扩增的方法，其特征在于：/n(1)单个核细胞的制备：分离单个核细胞，用含体积百分比50％-100％的含10vt％FBS或自体血清的RMPI 1640和0％-50％X-vivo15的混合培养基重悬细胞，接种在培养瓶或培养袋中培养；/n(2)γδT-NK细胞的诱导：加入含浓度为1-100μM的唑来膦酸和500～3000U/mL IL-2的混合培养基体外刺激4天后加入含有10～500ng/mL anti-human CD3Ab、10～500ng/mLanti-human CD28Ab、10～200ng/mL IL-15、10～200ng/mL IL-21、500...

【技术特征摘要】
1.一种γδT细胞和NK细胞共培养诱导扩增的方法，其特征在于：
(1)单个核细胞的制备：分离单个核细胞，用含体积百分比50％-100％的含10vt％FBS或自体血清的RMPI1640和0％-50％X-vivo15的混合培养基重悬细胞，接种在培养瓶或培养袋中培养；
(2)γδT-NK细胞的诱导：加入含浓度为1-100μM的唑来膦酸和500～3000U/mLIL-2的混合培养基体外刺激4天后加入含有10～500ng/mLanti-humanCD3Ab、10～500ng/mLanti-humanCD28Ab、10～200ng/mLIL-15、10～200ng/mLIL-21、500～3000U/mLIL-2的混合培养基进行半量换液，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；
(3)培养2～3天，在培养瓶或培养袋中增补2mL无血清混合培养基和IL2细胞因子使得最终浓度与原始浓度相同，然后培养箱中培养4天；
(4)培养4天后，对细胞进行500g速度离心，离心5min后弃上清，然后将培养瓶或培养袋中的细胞分别转至T25细胞培养瓶中，再然后，更换5mLEX培养基进行扩增培养，依次加入无血清EX培养基、IL2细胞因子、IL-15、IL-21；
(5)培养3-4天后，在T25细胞培养瓶中增补5mL无血清EX培养基、IL2细胞因子、IL-15、IL-21、1-100μM的唑来膦酸，使得最终浓度与原始浓度一致，总体积为20mL；
(6)培养3-5天后，检测NK及γδT细胞比例及细胞总数。


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【专利技术属性】
技术研发人员：邢永梅，邓蒙蒙，程箫，刘丹，吴疆，王保如，
申请(专利权)人：安徽瑞达健康产业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34