一种禽多瘤病毒检测引物、检测试剂盒、病毒检测方法及应用技术

本发明专利技术属于动物病原分子检测技术领域，具体涉及一种禽多瘤病毒检测引物、检测试剂盒、病毒检测方法及应用。运用特定引物通过PCR合成经地高辛标记的特异性核酸探针，通过斑点分子杂交，该特异性探针可用于检测病料样品中禽多瘤病毒核酸的存在，用于判定是否有禽多瘤病毒感染。利用本发明专利技术所涉及的试剂盒，通过提取病料组织样品的DNA进行斑点分子杂交，可在24h～36h内完成检测并报告结果，特异性强，准确性高。

A primer, kit, method and application for detection of avian polyomavirus

The invention belongs to the technical field of animal pathogenic molecule detection, in particular to a primer, detection kit, virus detection method and application for detection of avian polyomavirus. A digoxin labeled specific nucleic acid probe was synthesized by PCR with specific primers. By dot molecular hybridization, the specific probe can be used to detect the presence of avian polyomavirus nucleic acid in the disease samples and determine whether there is avian polyomavirus infection. By using the kit and extracting the DNA of the diseased tissue sample for dot molecular hybridization, the detection can be completed within 24-36 hours and the results can be reported, with strong specificity and high accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种禽多瘤病毒检测引物、检测试剂盒、病毒检测方法及应用
本专利技术属于动物病原分子检测
，具体涉及一种禽多瘤病毒检测引物、检测试剂盒、病毒检测方法及应用。
技术介绍
禽多瘤病毒（avianpolyomavirus，APV）感染，也称为鹦鹉幼雏病（budgerigarfledglingdisease，BFD），是由APV病毒引起多个品种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病。APV主要感染出壳1～3周的鹦鹉，死亡率高达80%，病症表现为厌食、消瘦、皮下出血、腹泻和呼吸困难等症状，嗉囊常饱满，内充满食物。粪便稀薄，常呈淡绿色并略带白色，病鸟常在出现腹泻后1-5天死亡。明显的临床特征还包括羽毛发育障碍，15日龄以内的发病鹦鹉背部与腹部缺乏绒毛，颈部缺乏纤毛；15日龄以上的鹦鹉尾羽和廓羽生长受损；25日龄以上耐过本病的鹦鹉，羽毛又开始发育，但个体瘦小，羽毛始终发育不全，失去观赏价值和经济意义。成鸟感染APV常会有猝死而无临床症状。禽多瘤病毒（APV），是第一个被发现的禽类多瘤病毒，属于乳多空病毒科、多瘤病毒属。APV是一种无囊膜的二十面体对称的、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种禽多瘤病毒的检测引物，其特征在于，包括如下引物：/nAPV上游引物为AP-F：5’-CAGAACATATCGAAATGG-3’；/nAPV下游引物为AP-R：5’-TGCAGATATCAAGACTGCC-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种禽多瘤病毒的检测引物，其特征在于，包括如下引物：
APV上游引物为AP-F：5’-CAGAACATATCGAAATGG-3’；
APV下游引物为AP-R：5’-TGCAGATATCAAGACTGCC-3’。


2.一种禽多瘤病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：
（1）如权利要求1所述的禽多瘤病毒的检测引物，
（2）特异性核酸探针，所述特异性核酸探针为经地高辛标记的有731bp的序列1。


3.根据权利要求2所述的禽多瘤病毒试剂盒，其特征在于，包括APV反应液、APV阳性对照、阴性对照、尼龙膜、碱基磷酸酶标记的抗地高辛抗体、显色底物NBT/BCIP溶液和其他试剂，所述APV反应液包括PCR缓冲溶液、dNTP、APV引物和特异性核酸探针。


4.根据权利要求3所述的禽多瘤病毒试剂盒，其特征在于，所述APV阳性对照为未经标记的731bp的序列1。


5.根据权利要求3所述的禽多瘤病毒试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为经检验合格SPF鸡胚制备的CEF提取的DNA。


6.根据权利要求3所述的禽多瘤病毒试剂盒，其特征在于，所述其他试剂为变性液、中和液、预杂交液、洗液I、洗液II、缓冲液I、缓冲液II、缓冲液。


7.一种禽多瘤病毒的检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
步骤一：核酸样品的制备
样品DNA的提取：取待检测组织样品每份0.1g研磨后，加入0.5ml抽提缓冲液和终浓度为100μg/ml的蛋白酶K于55℃消化过夜；
加入等体积苯酚/氯仿溶液，充分振荡混匀后，12000r/min离心5分钟，上清液转移至另一离心管中，再加入两倍体积的无水乙醇混匀后置于-20℃冷冻1小时以上，12000r/min离心15分钟，弃去上清；
再加入1ml70%的无水乙醇洗涤1次，沉淀溶解于适量TE缓冲液中，即为样品DNA；
步骤二：斑点分子杂交及免疫检测
（1）取一张试剂盒中的尼龙膜，划好格子，做好标记；
（2）把试剂盒中的阴性对照核酸和APV阳性对照核酸各取1μl及步骤一中提取的样品DNA各取2μl分别点样到（1）中尼龙膜各个格子的中央；
（3）用镊...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志，李阳，孙学强，于晓慧，尼博，孙晓东，周晓翠，李昂，孙明军，王琳，
申请(专利权)人：青岛立见诊断技术发展中心，中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：山东;37