人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。该人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCCNO：C2017218的杂交瘤细胞株分泌产生。该人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体可用于检测人流感嗜血杆菌。本发明专利技术还公开了一种基于该单克隆抗体的人流感嗜血杆菌表面蛋白捕获ELISA试剂盒。

Monoclonal antibody and antigen capture ELISA kit for the surface protein of Haemophilus influenzae

The invention discloses a monoclonal antibody against the surface protein of Haemophilus influenzae and an antigen capture ELISA kit. The monoclonal antibody against the surface protein of Haemophilus influenzae was produced by the hybridoma cell line cctccno: c2017218. The monoclonal antibody against the surface protein of Haemophilus influenzae can be used to detect Haemophilus influenzae. The invention also discloses a surface protein capture ELISA kit of Haemophilus influenzae based on the monoclonal antibody.

【技术实现步骤摘要】
人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒
本专利技术属于免疫学领域，涉及一种人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒。
技术介绍
流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae，Hi)简称流感杆菌，属嗜血杆菌属。本属细菌因人工培养时必须加新鲜血液或血液成分方能生长，故名嗜血杆菌。流感嗜血杆菌一般有六种菌株，称为a型、b型(又称乙型)、c型、d型、e型及f型。由流感嗜血杆菌自然产生的疾病只会在人类出现。在婴儿及孩童中，乙型流感嗜血杆菌会引致菌血病症及急性细菌性脑膜炎。偶尔地它会引致蜂窝组织炎、骨髓炎及关节感染。自从1990年开始，美国使用HiB结合型疫苗后，HiB病症的患病率减少至每十万名儿童有1.3名儿童感染。但是，HiB仍然是发展中国家引致婴儿及儿童下呼吸道疾病的主因。此外，没有荚膜的无分型流感嗜血杆菌亦会引致儿童的耳朵感染(如中耳炎)、眼睛感染(结膜炎)及鼻窦炎，并且联带肺炎，而该种菌株并无相应的疫苗应用。目前检测呼吸道中致病微生物的方法主要以传统方法为主，即分离鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017218的杂交瘤细胞株Hi-7#。/n

【技术特征摘要】
1.一种产生人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCCNO：C2017218的杂交瘤细胞株Hi-7#。


2.一种产生人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
1)以重组人流感嗜血杆菌表面蛋白P6为抗原，对8周龄的BALB/c小鼠进行免疫后，采用间接ELISA方法检测抗血清效价；
2)SP2/0骨髓瘤细胞的复苏和培养；
3)制备饲养细胞；
4)制备免疫脾细胞悬液；
5)制备SP2/0骨髓瘤细胞悬液；
6)细胞融合；
7)阳性克隆的筛选和克隆化培养，以人流感嗜血杆菌菌体为包被抗原，采用间接ELISA法检测；用酶联检测仪测定OD450，满足P/N值＞2.1为阳性；选取连续阳性的克隆孔进行2-3次亚克隆，筛选出单克隆杂交瘤细胞；对单克隆杂交瘤细胞进行扩大培养，获取含单克隆抗体的细胞培养液上清；以呼吸道病原菌分别包被酶标板，对所筛抗体的特异性进行ELISA检测，淘汰与这些病原体有阳性反应的单克隆抗体，筛选出合格的细胞株；所述呼吸道病原菌包括人肺炎支原体、铜绿假单胞菌、卡他莫拉菌、鲍曼不动杆菌、副流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、人肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌以及假丝酵母菌。


3.根据权利要求2所述的产生人流感嗜血杆菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中重组人流感嗜血杆菌表面蛋白P6的制备过程是：
1.1)人流感嗜血杆菌P6基因的克隆表达
对人流感嗜血杆菌表面蛋白P6基因进行生物信息学分析，结合GC含量、密码子偏爱性、mRNA二级结构、RNA不稳定基序以及mRNA自由能稳定性，优化人流感嗜血杆菌表面蛋白P6基因的DNA编码序列，同时在人流感嗜血杆菌表面蛋白P6基因的5’引入酶切位点NdeI、在人流感嗜血杆菌表面蛋白P6基因的3’端引入终止信号TAA和酶切位点XhoI后化学合成全基因序列后连于载体pUC57上，记为P6’；将含有该段人工合成的DNA片段的载体pUC57用NdeI及XhoI进行双酶切后按常规方法回收目的片段，备用；同时采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡征，
申请(专利权)人：湖北云璐生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42