人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。该人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCC NO：C2017217的杂交瘤细胞株分泌产生。该人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体可用于检测人肺炎支原体。本发明专利技术还公开了一种基于该单克隆抗体的人肺炎支原体表面蛋白捕获ELISA试剂盒。

Monoclonal antibody and antigen capture ELISA kit for Mycoplasma pneumoniae surface protein

The invention discloses a monoclonal antibody of Mycoplasma pneumoniae surface protein and an antigen capture ELISA kit. The monoclonal antibody against the surface protein of Mycoplasma pneumoniae was secreted by a hybridoma cell line, CCTCC No: c2017217. The monoclonal antibody can be used to detect Mycoplasma pneumoniae. The invention also discloses a human Mycoplasma pneumoniae surface protein capture ELISA kit based on the monoclonal antibody.

【技术实现步骤摘要】
人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒
本专利技术属于免疫学领域，涉及一种人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒。
技术介绍
肺炎支原体(M.Pneumonia，Mp)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。其一年四季均可发生，但多在秋冬时节。支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。若要明确诊断，需要进行病原体的检测。目前检测呼吸道中肺炎支原体的方法主要以传统方法为主，即分离鉴定法，该方法所需时间长，一般要2-3天，很难满足快速鉴定的需要；近几年发展起来的PCR技术，是一种快速、灵敏、特异性好的技术，但是目前该技术还是依赖于传统方法的前增菌步骤，而增菌液中往往还有PCR抑制剂，从而影响扩增的效果。同时，该技术还需要专业的检测设备，不适合进行床旁检测。以抗体为基础的免疫学检测已成为人体病原微生物检测不可或缺的重要技术手段。目本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017217的杂交瘤细胞株Mp-7#。/n

【技术特征摘要】
1.一种产生人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCCNO：C2017217的杂交瘤细胞株Mp-7#。


2.一种产生人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
1)以重组人肺炎支原体表面蛋白P1为抗原，对8周龄的BALB/c小鼠进行免疫后，采用间接ELISA方法检测抗血清效价；
2)SP2/0骨髓瘤细胞的复苏和培养；
3)制备饲养细胞；
4)制备免疫脾细胞悬液；
5)制备SP2/0骨髓瘤细胞悬液；
6)细胞融合；
7)阳性克隆的筛选和克隆化培养，以人肺炎支原体菌体为包被抗原，采用间接ELISA法检测；用酶联检测仪测定OD450，满足P/N值＞2.1为阳性；选取连续阳性的克隆孔进行2-3次亚克隆，筛选出单克隆杂交瘤细胞；对单克隆杂交瘤细胞进行扩大培养，获取含单克隆抗体的细胞培养液上清；以呼吸道病原菌分别包被酶标板，对所筛抗体的特异性进行ELISA检测，淘汰与这些病原体有阳性反应的单克隆抗体，筛选出合格的细胞株；所述呼吸道病原菌包括人嗜肺军团菌、铜绿假单胞菌、卡他莫拉菌、鲍曼不动杆菌、副流感嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、人肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌以及假丝酵母菌。


3.根据权利要求2所述的产生人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中重组人肺炎支原体表面蛋白P1的制备过程是：
1.1)人肺炎支原体P1基因的克隆表达
对人肺炎支原体表面蛋白P1基因进行生物信息学分析，结合GC含量、密码子偏爱性、mRNA二级结构、RNA不稳定基序以及mRNA自由能稳定性，优化人肺炎支原体表面蛋白P1基因的DNA编码序列，同时在人肺炎支原体表面蛋白P1基因的5’引入酶切位点NdeI、在人肺炎支原体表面蛋白P1基因的3’端引入终止信号TAA和酶切位点EcoRI后化学合成全基因序列后连于载体pUC57上，记为P1’；将含有该段人工合成的DNA片段的载体pUC57用NdeI及EcoRI进行双酶切后按常规方法回收目的片段，备用...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡征，
申请(专利权)人：湖北云璐生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42