人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。该人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCCNO：C2017216的杂交瘤细胞株分泌产生。该人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体可用于检测人嗜肺军团菌。本发明专利技术还公开了一种基于该单克隆抗体的人嗜肺军团菌表面蛋白捕获ELISA试剂盒。

Monoclonal antibody and antigen capture ELISA kit for the surface protein of Legionella pneumophila

The invention discloses a monoclonal antibody against the surface protein of Legionella pneumophila and an antigen capture ELISA kit. The monoclonal antibody against the surface protein of Legionella pneumophila was produced by the hybridoma cell line cctccno: c2017216. The monoclonal antibody against the surface protein of Legionella pneumophila can be used to detect Legionella pneumophila. The invention also discloses a human Legionella pneumophila surface protein capture ELISA kit based on the monoclonal antibody.

【技术实现步骤摘要】
人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒
本专利技术属于免疫学领域，涉及一种人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒。
技术介绍
军团菌是一种革兰阴性致病菌，常污染水环境，引起人呼吸道急性感染，可作为生物战剂使用。军团菌为需氧革兰阴性杆菌，无菌膜，不产酸，不产气，有一至数根端鞭毛或侧鞭毛，可运动。目前，军团菌现已发现49个种，70多个血清型，其中至少有20种与人类疾病有关。常见的有嗜肺军团菌(L.pneumophila,LP)、麦氏军团菌、博氏军团菌、菲氏军团菌、杜氏军团菌、长滩军团菌等，其中嗜肺军团菌是引起获得性肺炎的重要病原菌。该菌广泛存在于自然界水源中，还可存在于冷、热水管道系统中。在土壤、灰尘、河水、沟渠、冷却水、空调冷凝水、医院用水及呼吸机等产生的气溶胶中常可被检出，因此能以气溶胶方式传播。由于嗜肺军团菌病暴发范围广，且对人类健康构成了严重威胁，因此越来越受到人们的关注。尽管嗜肺军团菌在全球范围内传播，但可用于实验室诊断的标准化商品试剂的种类极少。目前检测该致病微生物的方法主要以传本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017216的杂交瘤细胞株Lp-2#。/n

【技术特征摘要】
1.一种产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCCNO：C2017216的杂交瘤细胞株Lp-2#。


2.一种产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
1)以重组人嗜肺军团菌表面蛋白PAL为抗原，对8周龄的BALB/c小鼠进行免疫后，采用间接ELISA方法检测抗血清效价；
2)SP2/0骨髓瘤细胞的复苏和培养；
3)制备饲养细胞；
4)制备免疫脾细胞悬液；
5)制备SP2/0骨髓瘤细胞悬液；
6)细胞融合；
7)阳性克隆的筛选和克隆化培养，以人嗜肺军团菌菌体为包被抗原，采用间接ELISA法检测；用酶联检测仪测定OD450，满足P/N值＞2.1为阳性；选取连续阳性的克隆孔进行2-3次亚克隆，筛选出单克隆杂交瘤细胞；对单克隆杂交瘤细胞进行扩大培养，获取含单克隆抗体的细胞培养液上清；以呼吸道病原菌分别包被酶标板，对所筛抗体的特异性进行ELISA检测，淘汰与这些病原体有阳性反应的单克隆抗体，筛选出合格的细胞株；所述呼吸道病原菌包括人肺炎支原体、铜绿假单胞菌、卡他莫拉菌、鲍曼不动杆菌、副流感嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、人肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌以及假丝酵母菌。


3.根据权利要求2所述的产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中重组人嗜肺军团菌表面蛋白PAL的制备过程是：
1.1)人嗜肺军团菌PAL基因的克隆表达
对人嗜肺军团菌表面蛋白PAL基因进行生物信息学分析，结合GC含量、密码子偏爱性、mRNA二级结构、RNA不稳定基序以及mRNA自由能稳定性，优化人嗜肺军团菌表面蛋白PAL基因的DNA编码序列，同时在人嗜肺军团菌表面蛋白PAL基因的5’引入酶切位点NdeI、在人嗜肺军团菌表面蛋白PAL基因的3’端引入终止信号TAA和酶切位点EcoRI后化学合成全基因序列后连于载体pUC57上，记为PAL’；将含有该段人工合成的DNA片段的载体pUC57用NdeI及EcoRI进行双酶切后按常规方法回收目的片段，备...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡征，
申请(专利权)人：湖北云璐生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42