人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。该人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCC No：C2017211的杂交瘤细胞株分泌产生。该人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体可用于检测人肺炎链球菌。本发明专利技术还公开了一种基于该单克隆抗体的人肺炎链球菌表面蛋白捕获ELISA试剂盒。

Monoclonal antibody and antigen capture ELISA kit of human Streptococcus pneumoniae surface protein

The invention discloses a monoclonal antibody against the surface protein of Streptococcus pneumoniae and an antigen capture ELISA kit. The monoclonal antibody against the surface protein of Streptococcus pneumoniae was secreted by a hybridoma cell line, CCTCC No: c2017211. The monoclonal antibody against the surface protein of Streptococcus pneumoniae can be used for the detection of Streptococcus pneumoniae. The invention also discloses a human Streptococcus pneumoniae surface protein capture ELISA kit based on the monoclonal antibody.

【技术实现步骤摘要】
人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒
本专利技术属于免疫学领域，涉及一种人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒。
技术介绍
肺炎链球菌于1881年首次由巴斯德(LouisPasteur)及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。其为革兰染色阳性菌，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外有化学成分为多糖的荚膜。5％～10％正常人上呼吸道中携带此菌。有毒株是引起人类疾病的重要病原菌。在化脓性球菌中，肺炎链球菌的致病力仅次于金黄色葡萄球菌。肺炎链球菌主要引起大叶性肺炎以及气管炎、中耳炎、脑膜炎、胸膜炎、心内膜炎、败血症等疾病。由肺炎链球菌引起的急性肺部感染叫肺炎链球菌肺炎。若3岁以下的婴幼儿肺部受到感染，则引起支气管肺炎。儿童患肺炎是呼吸道传染病里面最为严重的问题，呼吸道传染病死亡数大于艾滋病加麻疹加疟疾等疾病之和，其死亡率非常大。有数据显示，全球发展中国家有超过1亿5千万的5岁以下儿童患肺炎，其中有超过150万儿童因为肺炎而死去。作为人口大国的中国,其肺炎死亡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017211的杂交瘤细胞株Sp-10#。/n

【技术特征摘要】
1.一种产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCCNO：C2017211的杂交瘤细胞株Sp-10#。


2.一种产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
1)以重组人肺炎链球菌表面蛋白PspA为抗原，对8周龄的BALB/c小鼠进行免疫后，采用间接ELISA方法检测抗血清效价；
2)SP2/0骨髓瘤细胞的复苏和培养；
3)制备饲养细胞；
4)制备免疫脾细胞悬液；
5)制备SP2/0骨髓瘤细胞悬液；
6)细胞融合；
7)阳性克隆的筛选和克隆化培养，以人肺炎链球菌菌体为包被抗原，采用间接ELISA法检测；用酶联检测仪测定OD450，满足P/N值＞2.1为阳性；选取连续阳性的克隆孔进行2-3次亚克隆，筛选出单克隆杂交瘤细胞；对单克隆杂交瘤细胞进行扩大培养，获取含单克隆抗体的细胞培养液上清；以呼吸道病原菌分别包被酶标板，对所筛抗体的特异性进行ELISA检测，淘汰与这些病原体有阳性反应的单克隆抗体，筛选出合格的细胞株；所述呼吸道病原菌包括人肺炎支原体、铜绿假单胞菌、卡他莫拉菌、鲍曼不动杆菌、副流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、人流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌以及假丝酵母菌。


3.根据权利要求2所述的产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中重组人肺炎链球菌表面蛋白PspA的制备过程是：
1.1)人肺炎链球菌PspA基因的克隆表达
对人肺炎链球菌表面蛋白PspA基因进行生物信息学分析，结合GC含量、密码子偏爱性、mRNA二级结构、RNA不稳定基序以及mRNA自由能稳定性，优化人肺炎链球菌表面蛋白PspA基因的DNA编码序列，同时在人肺炎链球菌表面蛋白PspA基因的5’引入酶切位点NdeI、在人肺炎链球菌表面蛋白PspA基因的3’端引入终止信号TAA和酶切位点XhoI后化学合成全基因序列后连于载体pUC57上，记为PspA’；将含有该段人工合成的DNA片段的载体pUC57用NdeI及XhoI进行双酶切后按常规方法回收目的片段，备...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡征，
申请(专利权)人：湖北云璐生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42