人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。该人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCCNO：C2017215的杂交瘤细胞株分泌产生。该人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体可用于检测人卡他莫拉菌。本发明专利技术还公开了一种基于该单克隆抗体的人卡他莫拉菌表面蛋白捕获ELISA试剂盒。

Monoclonal antibody and antigen capture ELISA kit for the surface protein of Moraxella catarrhalis

The invention discloses a monoclonal antibody and an antigen capture ELISA kit for the surface protein of Moraxella catarrhalis. The monoclonal antibody against the surface protein of Moraxella catarrhalis was produced by the hybridoma cell line cctccno: c2017215. The monoclonal antibody against the surface protein of the human catarrhal Moraxella can be used for the detection of the human catarrhal Moraxella. The invention also discloses an ELISA kit for protein capture on the surface of human catarrhal Moraxella based on the monoclonal antibody.

【技术实现步骤摘要】
人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒
本专利技术属于免疫学领域，涉及一种人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒。
技术介绍
卡他莫拉菌(Moraxellacatarrhalis，简称MC)首次发现于1896年，当时称之为卡他微球菌(Micrococcuscatarrhalis)，尔后又称为卡他奈瑟菌(Neisseriacatarrhalis)和卡他布兰汉菌(Branhamellacatarhalis)。过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌。但是，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，而且其发病率逐年增加，尤其多见于慢性阻塞性肺病患者。卡他莫拉菌院内感染可通过呼吸道传播，有证据表明卡他莫拉菌在痰液中可生存3星期以上，所以呼吸病房尤易造成人与人间的传播。目前检测呼吸道中致病微生物的方法主要以传本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017215的杂交瘤细胞株Mc-4#。/n

【技术特征摘要】
1.一种产生人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号是保藏编号CCTCCNO：C2017215的杂交瘤细胞株Mc-4#。


2.一种产生人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
1)以重组人卡他莫拉菌表面蛋白UspA1为抗原，对8周龄的BALB/c小鼠进行免疫后，采用间接ELISA方法检测抗血清效价；
2)SP2/0骨髓瘤细胞的复苏和培养；
3)制备饲养细胞；
4)制备免疫脾细胞悬液；
5)制备SP2/0骨髓瘤细胞悬液；
6)细胞融合；
7)阳性克隆的筛选和克隆化培养，以人卡他莫拉菌菌体为包被抗原，采用间接ELISA法检测；用酶联检测仪测定OD450，满足P/N值＞2.1为阳性；选取连续阳性的克隆孔进行2-3次亚克隆，筛选出单克隆杂交瘤细胞；对单克隆杂交瘤细胞进行扩大培养，获取含单克隆抗体的细胞培养液上清；以呼吸道病原菌分别包被酶标板，对所筛抗体的特异性进行ELISA检测，淘汰与这些病原体有阳性反应的单克隆抗体，筛选出合格的细胞株；所述呼吸道病原菌包括人肺炎支原体、铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、鲍曼不动杆菌、副流感嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、人肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌以及假丝酵母菌。


3.根据权利要求2所述的产生人卡他莫拉菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中重组人卡他莫拉菌表面蛋白UspA1的制备过程是：
1.1)人卡他莫拉菌UspA1基因的克隆表达
对人卡他莫拉菌表面蛋白UspA1基因进行生物信息学分析，结合GC含量、密码子偏爱性、mRNA二级结构、RNA不稳定基序以及mRNA自由能稳定性，优化人卡他莫拉菌表面蛋白UspA1基因的DNA编码序列，同时在人卡他莫拉菌表面蛋白UspA1基因的5’引入酶切位点NdeI、在人卡他莫拉菌表面蛋白UspA1基因的3’端引入终止信号TAA和酶切位点EcoRI后化学合成全基因序列后连于载体pUC57上，记为UspA1’；将含有该段人工合成的DNA片段的载体pUC57用NdeI及EcoRI进行双酶切后按常规方法回收目的片...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡征，
申请(专利权)人：湖北云璐生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42