The invention discloses a detection method for mutation sites of vitamin E absorption related genes, which relates to the field of biomedical technology. The target segment is obtained by single tube multiple PCR amplification reaction of designed target site-specific primers, the target segment is digested by restriction endonuclease, and then the target segment digested by restriction endonuclease is bidirectional by single base extension technology Extending, obtaining the gene site to be detected, and finally accurately determining the target DNA sequence through nucleic acid mass spectrometry analysis; wherein, the single base extension technology adopts the single base extension primer group to extend the target fragment in two directions; compared with the traditional SNP site detection technology, the method of detecting gene mutation in the invention can realize the detection of multiple SNP sites in one reaction It has high application value.
【技术实现步骤摘要】
一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法
本专利技术涉及生物医学
,特别是涉及一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法。
技术介绍
维生素E是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是最主要的抗氧化剂之一,可减轻自由基对生物膜的破坏作用,避免过度氧化自由基对内皮细胞的损伤。首次从麦芽中分离出来的,主要贮存在脂肪组织中。维生素E吸收与肠道脂肪有关,影响脂肪吸收的因素也影响维生素E吸收。大部分被吸收的维生素E通过乳糜微粒到肝脏,为肝细胞所摄取。多种基因影响人体对维生素E的吸收和代谢,比如人体内参与脂质的代谢的CYP4F2基因,属于P450家族,存在于细胞的内质网;ZPR1基因,其携带G等位基因群体的血清维生素E浓度较C等位基因携带群体高。这些基因均通过影响脂质的吸收代谢来影响维生素E的吸收和代谢。这些基因多态性的筛查能帮助个体充分了解自己的遗传状况,提前采取相应的健康管理措施。这些基因多态性的筛查一般采用传统的SNP位点检测技术,而传统的SNP位点检测技术一次只能检测其中的一种基因,导致检测工作量大。
技术实现思路
为了解决传统的SNP位点检测技术一次只能检测其中的一种基因,导致检测工作量大的问题,本专利技术提供了一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法。本专利技术所采用的技术方案为:一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法,通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,目标片段经过限制性内切酶消化,然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内 ...
【技术保护点】
1.一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,目标片段经过限制性内切酶消化,然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸,得到待检基因位点,最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列;/n其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。/n
【技术特征摘要】
1.一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,目标片段经过限制性内切酶消化,然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸,得到待检基因位点,最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列;
其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。
2.根据权利要求1所述的维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,所述目标位点特异性引物包括:
用于扩增维生素E吸收相关基因CYP4F2-RS2108622片段的第一特异性引物,第一特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:1所示且反向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:2所示;
用于扩增维生素E吸收相关基因ZPR1-RS964184片段的第二特异性引物,第二特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:3所示且反向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:4所示。
3.根据权利要求1所述的维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,所述单碱基延伸技术所用的引物包括:
用于扩增维生素E吸收相关基因CYP4F2-RS2108622片段的第一单碱基延伸引物,第一单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQIDNos:5所示;
用于扩增维生素E吸收相关基因ZPR1-RS964184片段的第二单碱基延伸引物,第二单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQIDNos:6所示。
4.根据权利要求3所述的维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,在所述第一单碱基延伸引物的5`端和第二单碱基延伸引物的5`端均加...
【专利技术属性】
技术研发人员:张立波,张宇,
申请(专利权)人:杭州云鼎基因生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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