The invention discloses a detection method of mutation sites of genes related to alcohol metabolism, which relates to the field of biomedical technology; the target fragment is obtained by single tube multiple PCR amplification reaction of designed target site-specific primers, the target fragment is digested by restriction endonuclease, and then the target fragment digested by restriction endonuclease is bidirectional extended by single base extension technology The single base extension technology uses a single base extension primer group to extend the target fragment in two directions. Compared with the traditional SNP site detection technology, it can realize the detection of multiple SNP sites in one reaction, which has higher application value and reduces the detection work Work quantity and improve detection efficiency.
【技术实现步骤摘要】
一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法
本专利技术涉及生物医学
,特别是涉及一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法。
技术介绍
现代医学认为,人们对酒精的耐受性的表现不同,主要与其自身的酒精代谢能力(酒精敏感度)有关,其关键在于基因;不同的基因决定了人们对酒精的敏感度和代谢能力。对人体内与酒精代谢相关的基因的检测是非常有必要的,能给于人们对自身酒精代谢能力的认知,便于控制自身酒精的摄入量。研究发现乙醇脱氢酶ADH1B(rs1229984)基因和乙醛脱氢酶ALDH2(rs671)基因变异,会影响酒精的代谢;而关于乙醇脱氢酶ADH1B(rs1229984)基因和乙醛脱氢酶ALDH2(rs671)基因的检测,传统的SNP位点检测技术,一次只能检测其中的一种基因,导致检测工作量大。
技术实现思路
传统的SNP位点检测技术存在的一次只能检测其中的一种基因,导致检测工作量大的问题,本专利技术提供了一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法。本专利技术所采用的技术方案为:一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法,通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,目标片段经过限制性内切酶消化,然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸,得到待检基因位点,最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列;其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。在其中一个实施例中,所述目标位点特异性引物包括:用于扩增 ...
【技术保护点】
1.一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,目标片段经过限制性内切酶消化,然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸,得到待检基因位点,最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列;/n其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。/n
【技术特征摘要】
1.一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,目标片段经过限制性内切酶消化,然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸,得到待检基因位点,最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列;
其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。
2.根据权利要求1所述的酒精代谢相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,所述目标位点特异性引物包括:
用于扩增酒精代谢相关基因ADH1B-RS1229984片段的第一特异性引物,第一特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:1所示且反向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:2所示;
用于扩增酒精代谢相关基因ALDH2-RS671片段的第二特异性引物,第二特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:3所示且反向引物的核苷酸序列如SEQIDNos:4所示。
3.根据权利要求1所述的酒精代谢相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,所述单碱基延伸技术所用的引物包括:
用于扩增酒精代谢相关基因ADH1B-RS1229984片段的第一单碱基延伸引物,核苷酸序列如SEQIDNos:5所示;
用于扩增酒精代谢相关基因ALDH2-RS671片段的第二单碱基延伸引物,核苷酸序列如SEQIDNos:6所示。
4.根据权利要求3所述的酒精代谢相关基因突变位点的检测方法,其特征在于,第一单碱基延伸引物的5`端和第二单碱基延伸引物的5`端均加入10个核苷酸,10个核苷酸的固定序...
【专利技术属性】
技术研发人员:张立波,张宇,
申请(专利权)人:杭州云鼎基因生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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