A method for producing a protein variant using a plurality of culture conditions and perfusion production is disclosed.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生产生物产物变体的方法相关申请本申请要求2017年2月17日提交的美国临时申请62/460,387的权益，其通过引用完整并入本文。专利
本公开内容涉及使用在多个不同培养条件下操作的培养系统生产生物产物，例如蛋白质，例如蛋白质变体的方法、组合物和装置。专利技术背景包括治疗性蛋白质和单抗在内的得到批准的治疗性产物通常仅在一部分治疗群体中是有效的。根本原因并不总是充分了解的，但是可以是由于患者之间的遗传、表观遗传、代谢、生活方式和其他差异所致。因此，越来越有趋势来了解疾病自身和患者两者的根本原因并且开发出更特制的疗法。现在公认的另一种并发症是即使每位患者可表现出相同的疾病症状，疾病自身也可能因患者而异，例如，现在公认有11种不同形式的血液癌(E.Papaemmanuilet.al.,NEnglJMed2016；374:2209-2221)。朝向精确且个性化的治疗的此种增长趋势预计依赖于产物质量属性差异较小的治疗产物。每种在产物质量属性上各自具有较低异质性(即较小差异)的治疗产物的多个变体也可能会有助于有效治疗疾病异质性和患者异质性两者。当前用于生产生物产物如重组蛋白和单克隆抗体(单抗)的方法通常导致产物在产物质量属性如糖基化、唾液酸化和电荷变异方面具有高度可变性(Paciset.al.BiotechnolBioeng2011；108:2348-2358)。这些方法通常依赖于在1到14天的任何地方培养的微生物或动物细胞的补料分批培养。使用补料分批培养产生的产物通常是异质混合物，例如，哺乳动物细...
【技术保护点】
1.制备多个变体制剂的方法，所述多个至少包含产物的第一变体(产物变体1)的制剂和产物的第二变体(产物变体2)的制剂，所述方法包括：/n在配置成允许细胞培养的容器中提供细胞群体；/n(a-i)在第一条件下在培养基中培养所述细胞群体以形成含有产物变体1的条件化培养基；/n(a-ii)从培养物中回收产物变体1；/n(a-iii)任选地向所述条件化培养基添加替代培养基；/n(a-iv)任选地在所述第一条件下进一步培养所述细胞群体以产生另外的条件化培养基；/n(a-v)任选地回收另外的产物变体1；/n(a-vi)任选地组合来自(a-ii)和(a-v)的产物变体1；/n(b-i)在第二条件下在培养基中培养细胞群体以形成含有产物变体2的条件化培养基；/n(b-ii)从培养物中回收产物变体2；/n(b-iii)任选地向所述条件化培养基添加替代培养基，/n(b-iv)任选地在所述第二条件下进一步培养所述细胞群体以产生另外的条件化培养基；/n(b-v)任选地回收另外的产物变体2；/n(b-vi)任选地组合来自(b-ii)和(b-v)的产物变体2；/n从一批产物变体1中获得产物变体1；/n从一批产物变体2中...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170217 US 62/460,3871.制备多个变体制剂的方法，所述多个至少包含产物的第一变体(产物变体1)的制剂和产物的第二变体(产物变体2)的制剂，所述方法包括：
在配置成允许细胞培养的容器中提供细胞群体；
(a-i)在第一条件下在培养基中培养所述细胞群体以形成含有产物变体1的条件化培养基；
(a-ii)从培养物中回收产物变体1；
(a-iii)任选地向所述条件化培养基添加替代培养基；
(a-iv)任选地在所述第一条件下进一步培养所述细胞群体以产生另外的条件化培养基；
(a-v)任选地回收另外的产物变体1；
(a-vi)任选地组合来自(a-ii)和(a-v)的产物变体1；
(b-i)在第二条件下在培养基中培养细胞群体以形成含有产物变体2的条件化培养基；
(b-ii)从培养物中回收产物变体2；
(b-iii)任选地向所述条件化培养基添加替代培养基，
(b-iv)任选地在所述第二条件下进一步培养所述细胞群体以产生另外的条件化培养基；
(b-v)任选地回收另外的产物变体2；
(b-vi)任选地组合来自(b-ii)和(b-v)的产物变体2；
从一批产物变体1中获得产物变体1；
从一批产物变体2中获得产物变体2；
从而提供多个变体制剂，所述多个至少包含产物的第一变体(产物变体1)的制剂和产物的第二变体(产物变体2)的制剂，
其中变体1(或变体1的制剂)与变体2(或变体2的制剂)的不同之处在于物理、化学、生物学或药学性质。
2.制备多个变体制剂的方法，所述多个至少包含产物的第一变体(产物变体1)的制剂和产物的第二变体(产物变体2)的制剂，所述方法包括：
(a)在第一条件下在培养基中培养细胞群体以形成含有产物变体1的条件化培养基；
(b)回收产物变体1；
(c)在第二条件下在培养基中培养所述细胞群体以形成含有产物变体2的条件化培养基；
(d)回收产物变体2；
从而提供多个变体制剂，所述多个至少包含产物的第一变体(产物变体1)的制剂和产物的第二变体(产物变体2)的制剂，
其中产物变体1(或产物变体1的制剂)与产物变体2(或产物变体2的制剂)的不同之处在于物理、化学、生物学或药学性质。
3.权利要求2或3的方法，其中在步骤(b)中回收包括获得在步骤(a)中形成的条件化培养基的等分试样。
4.权利要求3的方法，其进一步包括从所述条件化培养基的等分试样中回收产物变体1。
5.权利要求3的方法，其中步骤(b)进一步包括将替代培养基添加到所述条件化培养基。
6.权利要求5的方法，其中(a)中的所述培养基和所述替代培养基是相同的。
7.权利要求5的方法，其中(b)进一步包括在所述第一条件下进一步培养所述细胞群体以产生另外的条件化培养基。
8.权利要求5或7的方法，其包括：(bii)回收第二量的产物变体1。
9.权利要求8的方法，其中在步骤(bii)中回收包括获得进一步的条件化培养基的等分试样。
10.权利要求8或9的方法，其包括：向先前步骤的培养基添加替代培养基，并重复权利要求7和8以及任选地权利要求9的步骤，例如将权利要求7和8以及任选地权利要求9的步骤重复X次，其中X为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
11.权利要求10的方法，其中(a)中的所述培养基和替代培养基是相同的。
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中在达到参数的目标值之后，在所述第二条件下培养所述细胞群体。
13.权利要求12的方法，其中所述参数选自：产生的产物变体1的量、在所述第一条件下的培养持续时间或培养物的存活力。
14.权利要求1至13中任一项的方法，其包括：对所述培养基或其他条件进行操作以实现所述第二条件。
15.权利要求14的方法，其中对所述培养基或其他条件的操作包括改变以下中的一项或多项：pH；dO2水平；搅动；温度；体积；细胞群体密度；培养基成分的浓度；搅动；下列的存在或含量：营养物、药物、抑制剂或其他化学成分(例如，化学盐、金属和金属离子、氨基酸、氨基酸衍生物、糖成分、氨基己糖、n-乙酰基氨基己糖、维生素、脂质、多胺、还原剂/氧化剂、缓冲液成分或激素)。
16.权利要求15的方法，其包括将不同的培养基添加到所述细胞群体。
17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述细胞群体的培养是灌注生产培养。
18.权利要求17的方法，其包括在所述培养基转变成第二条件时中断灌注。
19.权利要求17的方法，其包括在所述培养基转变成第二条件时将灌注物转向至废物。
20.权利要求1至19中任一项的方法，其中在产物变体2的生产期间从下游单元操作中除去产物变体1。
21.权利要求1至20中任一项的方法，其包括培养所述细胞直至达到参数的目标值。
22.权利要求2-21中任一项的方法，其中在步骤(d)中回收包括获得在步骤(c)中形成的条件化培养基的等分试样。
23.权利要求22的方法，其进一步包括从条件化培养基的等分试样中回收产物变体2。
24.权利要求23的方法，其中步骤(d)进一步包括将替代培养基添加到所述条件化培养基。
25.权利要求24的方法，其中(c)中的所述培养基和所述替代培养基是相同的。
26.权利要求24的方法，其中(d)进一步包括在所述第二条件下进一步培养所述细胞群体以产生另外的条件化培养基。
27.权利要求24或26的方法，其包括(dii)回收第二量的产物变体2。
28.权利要求27的方法，其中在步骤(dii)中回收包括获得进一步的条件化培养基的等分试样。
29.权利要求27或28的方法，其包括向先前步骤的培养基添加替代培养基，并重复权利要求26和27以及任选地权利要求28的步骤，例如，将权利要求26和27以及任选地权利要求28的步骤重复X次，其中X是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
30.权利要求29的方法，其中(c)中的所述培养基和所述替代培养基是相同的。
31.权利要求1的方法，其中步骤(a)和步骤(b)在同一容器，例如生产培养容器中进行。
32.权利要求3-31中任一项的方法，其中步骤(a)至(d)在同一容器，例如生产培养容器中进行。
33.权利要求32的方法，其中所述容器配置为允许以灌注模式操作。
34.权利要求33的方法，其中所述容器配置为允许在培养期间取出培养基和添加培养基。
35.权利要求31或34的方法，其中所述容器包含可变直径的生物反应器。
36.权利要求1-35中任一项的方法，其进一步包括针对下列一项或多项，评估第一产物变体(或所述第一产物变体的制剂)与第二产物变体(或第二产物变体的制剂)如何不同：
糖基化(例如半乳糖基化)；
唾液酸化；
电荷(例如pI)；
序列，例如N端或C端序列，
同质性；
纯度；
活性；
无活性变体的量；
聚集的倾向或聚集；
澄清度；
脱酰胺；
糖化；
脯氨酸酰胺化；
二硫化物异质性；
二聚化；
蛋白酶易感性或蛋白水解降解；和
甲硫氨酸氧化。
37.权利要求1-36中任一项的方法，其中第一产物变体(或所述第一变体的制剂)与第二产物变体(或第二产物变体的制剂)的不同之处在于以下中的一项或多项：
糖基化(例如半乳糖基化)；
唾液酸化；
电荷(例如pI)；
序列，例如N端或C端序列，
同质性；
纯度；
活性；
无活性变体的量；
聚集的倾向或聚集；
澄清度；
脱酰胺；
糖化；
脯氨酸酰胺化；
二硫化物异质性；
二聚化；
蛋白酶易感性或蛋白水解降解；和
甲硫氨酸氧化。
38.权利要求1-37中任一项的方法，其包括产生多个产物变体(或产物变体的制剂)，其中所述产物变体(或产物变体的制剂)中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20或更多个各自彼此的不同之处在于以下中的...
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