一种金钗石斛提取物及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种金钗石斛提取物及制备方法，将金钗石斛干燥茎为原料，破碎后经浸泡、渗漉得到渗漉液；用石灰乳调pH后，上大孔树脂柱并洗脱，洗脱液调pH为中性，减压浓缩为清膏；清膏与硅胶拌匀，硅胶柱分配层析得洗脱液，回收溶液后重结晶、干燥、粉碎，即得金钗石斛提取物。金钗石斛提取物所含总生物碱的含量大于50％。本发明专利技术在减少有机溶剂的使用、降低有毒有机溶剂对生产技术人员身体危害的风险、降低生产成本和能耗方面具有优势。

A Dendrobium nobile extract and its preparation

The invention provides an extract of Dendrobium nobile and a preparation method. The dried stem of Dendrobium nobile is used as the raw material, and after being broken, it is soaked and percolated to obtain the percolate; after adjusting the pH with lime milk, it is eluted with a macroporous resin column, the eluent is adjusted to be neutral, and concentrated into a clear cream under reduced pressure; the clear cream is mixed with silica gel, and the eluent is obtained by chromatography after being distributed on silica gel column, and recrystallized, dried and crushed after recovery of the solution , which is the extract of Dendrobium nobile. The content of total alkaloids in the extracts of Dendrobium nobile is more than 50%. The invention has advantages in reducing the use of organic solvent, reducing the risk of toxic organic solvent to the health of production technicians, and reducing the production cost and energy consumption.

【技术实现步骤摘要】
一种金钗石斛提取物及制备方法
本专利技术属于中药提取物领域，具体涉及一种金钗石斛提取物及制备方法。
技术介绍
金钗石斛药材为兰科植物石斛(DendrobiumnobileLindl)的干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热的功效。金钗石斛含有石斛碱等多种生物碱类成分，现代研究表明，金钗石斛总生物碱具有抗糖尿病、抗高血脂、抗老年痴呆等活性(黄琦.金钗石斛总生物碱对糖尿病大鼠模型的保护作用.遵义医学院,2009.；陈晶.金钗石斛总生物碱对ApoE-/-小鼠高血脂和血管动脉粥样硬化的影响.遵义医学院,2016.；姜琳珊,李菲,聂晶,等.金钗石斛总生物碱对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响.遵义医学院学报,2016,39(3):246-249.；巴智胜,蔡锐,尹彩霞,等.金钗石斛总生物碱改善链脲佐菌素所致大鼠海马神经元损伤.中国新药与临床杂志,2017,36(6):340-346.)，金钗石斛总生物碱中的主要成分石斛碱还有抗甲型流感病毒的活性(LiR,LiuT,LiuM,etal.Anti-influenzaAvirusactivityofdendrobineanditsmechanismofaction[J].Journalofagriculturalandfoodchemistry,2017,65(18):3665-3674.)。可见，金钗石斛总生物碱在新药开发方面有很好的潜力。根据《药品注册管理办法》附件1“中药、天然药物注册分类及申报资料要求”的规定，第五类新药，其有效部位含量应占提取物的50％以上。因此，开发金钗石斛总生物碱的提取纯化方法很有意义。关于金钗石斛生物碱的提取纯化方法，已有一些技术方案(CN101653563B；CN101537128B；CN108175831A；CN101735231B)，但其缺陷是采用了大量有机溶剂，生产成本高、能耗大；而且有的技术方案中采用了氯仿处理(CN101537128B；CN104557956A；赵福坤,吴芹,陆远富,等.金钗石斛总生物碱提取及含量测定方法的改进.遵义医学院学报,2015,38(5):532-535.；曹云丽,潘自红,赵晓军.金钗石斛中生物碱提取的动力学分析.平顶山学院学报,2017,32(5):44-49.)，其缺陷是氯仿有较大毒性，危害生产技术人员身体的风险很大。
技术实现思路
本专利技术为克服上述现有技术所述的缺陷，提供一种主要以水性溶剂进行提取分离，辅用较少量有机溶剂进行处理的金钗石斛提取物的制备方法，所制得的提取物中，金钗石斛总生物碱的含量达到50％以上。本专利技术的技术方案为：以兰科植物石斛(DendrobiumnobileLindl)的干燥茎为原料，按下述顺序的步骤制备提取物：(1)将金钗石斛药材破碎成颗粒状；(2)取颗粒状原料，加溶剂浸泡6～12h后渗漉，收集原料重量的10～50倍量体积的渗漉液；所述溶剂为含质量比1％～5％甘氨酸和醋酸铵混合物的pH1～4的盐酸水溶液，甘氨酸和醋酸铵混合物中，二者摩尔比为1:1～1:3；(3)取渗漉液用石灰乳调pH为6～7，上D101或AB-8或类似极性的大孔树脂柱，先用3倍柱床体积的纯水洗，弃去水洗液，再用3～6倍柱床体积的pH1～4的盐酸水溶液洗脱，收集洗脱液A；(4)取洗脱液A，用饱和碳酸钠水溶液调pH为中性，减压浓缩为清膏；(5)取清膏，用等量80目硅胶拌匀，然后进行硅胶柱分配层析，用3～6倍柱床体积的乙酸乙酯洗脱，得洗脱液B；所述分配层析，支持剂为80目硅胶，固定相为饱和碳酸钠水溶液(预先用乙酸乙酯饱和)，洗脱剂为乙酸乙酯；(6)取洗脱液B，回收溶剂后，按重结晶处理方法，用甲醇处理1～3次；(7)取经重结晶处理后的固体，60℃干燥、粉碎，即得金钗石斛提取物。优选地，步骤(2)中，浸泡8h，收集原料重量的30倍量体积的渗漉液。优选地，步骤(2)中，所述溶剂为含3％甘氨酸和醋酸铵混合物的pH2的盐酸水溶液，甘氨酸和醋酸铵混合物中，二者摩尔比为1:1。优选地，步骤(3)中，用石灰乳调pH为6.5，上D101大孔树脂柱，用4.5倍柱床体积的pH2的盐酸水溶液洗脱。优选地，步骤(5)中，用4倍柱床体积的乙酸乙酯洗脱。优选地，步骤(6)中，用甲醇处理2次。上述步骤(2)中，渗漉提取时也可辅以微波或超声处理。上述步骤(6)中，甲醇也可以换为乙醇或乙酸乙酯。金钗石斛生物碱类成分多为亲脂性的，本专利技术通过酸水与生物碱成盐而将其提出；在溶剂中添加的甘氨酸和醋酸铵，二者为氢键供体和氢键受体，可使金钗石斛生物碱形成氢键，从而达到助溶效果。本专利技术通过调节pH值使金钗石斛生物碱处于成盐状态或游离状态，以方便其溶解或被吸附。本专利技术通过大孔树脂柱层析，水洗可除去糖类、氨基酸类及蛋白质等杂质。本专利技术通过固定相为饱和碳酸钠水溶液的硅胶柱分配层析，可使一些酚酸性杂质进入固定相而与金钗石斛生物碱分离。本专利技术所用有机溶剂的量远低于现有技术方案，有机溶剂本身的成本低，而且需要加热的环节少，故能耗低。本专利技术所用有机溶剂仅为醇类溶剂和乙酸乙酯，没有采用常见的氯仿处理方法，因此危害生产技术人员身体的风险很小。本专利技术中的大孔树脂柱层析、硅胶柱分配层析，可重复使用，从而也能使生产成本降低。本专利技术金钗石斛提取物中，总生物碱的含量达50％以上，较高的活性成分含量、较低的生产成本，是本专利技术的突出优势。具体实施方式通过以下具体实施例进一步详细说明本专利技术，应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术，可以在本专利技术权利限定的范围内进行各种改变。实施例1一种金钗石斛提取物，其制备方法为，按下述顺序的步骤制备：(1)取金钗石斛药材200g，破碎成颗粒状；(2)取颗粒状原料，加溶剂浸泡8h后渗漉，收集原料重量的30倍量体积的渗漉液；所述溶剂为含3％甘氨酸和醋酸铵混合物的pH2的盐酸水溶液，甘氨酸和醋酸铵混合物中，二者摩尔比为1:1。(3)取渗漉液用石灰乳调pH为6.5，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱床体积的纯水洗，弃去水洗液，再用4.5倍柱床体积的pH2的盐酸水溶液洗脱，收集洗脱液A；(4)取洗脱液A，用饱和碳酸钠水溶液调pH为中性，减压浓缩为清膏；(5)取清膏，用等量80目硅胶拌匀，然后进行硅胶柱分配层析，用4倍柱床体积的乙酸乙酯洗脱，得洗脱液B；所述分配层析，支持剂为80目硅胶，固定相为饱和碳酸钠水溶液(预先用乙酸乙酯饱和)，洗脱剂为乙酸乙酯。(6)取洗脱液B，回收溶剂后，按重结晶处理方法，用甲醇处理2次；(7)取经重结晶处理后的固体，60℃干燥、粉碎，即得金钗石斛提取物。实施例2一种金钗石斛提取物，其制备方法为，按下述顺序的步骤制备：(1)取金钗石斛药材200g，破碎成颗粒状；(2)取颗粒状原料，加溶剂浸泡12h后渗漉，收集原料本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金钗石斛提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将金钗石斛干燥茎为原料，破碎成颗粒状；/n(2)取颗粒状原料，加溶剂浸泡6～12h后渗漉，收集原料重量的10～50倍量体积的渗漉液；/n(3)取渗漉液用石灰乳调pH为6～7，上大孔树脂柱，先用3倍柱床体积的纯水洗，弃去水洗液，再用3～6倍柱床体积的pH 1～4的盐酸水溶液洗脱，收集洗脱液A；/n(4)取洗脱液A，用饱和碳酸钠水溶液调pH为中性，减压浓缩为清膏；/n(5)取清膏，用等量80目硅胶拌匀，然后进行硅胶柱分配层析，用3～6倍柱床体积的乙酸乙酯洗脱，得洗脱液B；/n所述分配层析，支持剂为80目硅胶，固定相为饱和碳酸钠水溶液，预先用乙酸乙酯饱和，洗脱剂为乙酸乙酯；/n(6)取洗脱液B，回收溶剂后，按重结晶处理方法，用甲醇、乙醇或乙酸乙酯处理1～3次；/n(7)取经重结晶处理后的固体，60℃干燥、粉碎，即得金钗石斛提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种金钗石斛提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将金钗石斛干燥茎为原料，破碎成颗粒状；
(2)取颗粒状原料，加溶剂浸泡6～12h后渗漉，收集原料重量的10～50倍量体积的渗漉液；
(3)取渗漉液用石灰乳调pH为6～7，上大孔树脂柱，先用3倍柱床体积的纯水洗，弃去水洗液，再用3～6倍柱床体积的pH1～4的盐酸水溶液洗脱，收集洗脱液A；
(4)取洗脱液A，用饱和碳酸钠水溶液调pH为中性，减压浓缩为清膏；
(5)取清膏，用等量80目硅胶拌匀，然后进行硅胶柱分配层析，用3～6倍柱床体积的乙酸乙酯洗脱，得洗脱液B；
所述分配层...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文宇，钟爱琳，王萌，肖阳，詹茂玲，陈祥贵，李明元，唐显福，王岚，
申请(专利权)人：西华大学，贵州仙草生物科技有限公司，赤水市供销社综合经营公司，
类型：发明
国别省市：四川;51