一种血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，属于试剂盒技术领域。解决了现有技术中超氧化物歧化酶的检测方法成本高、稳定性差，检测结果不准确等技术问题。本发明专利技术的测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；其中，R1试剂包括缓冲液和防腐剂；R2试剂包括缓冲液、邻苯三酚、保护剂、金属螯合剂和防腐剂。该测定试剂盒采用金属离子螯合剂和保护剂，提高试剂的开封稳定性和高温稳定性，检测重复性好，适用于多种全自动生化分析仪，具有更广泛的通用性，便于推广；能够有效避免临床测试的假性结果，极大提高了检测效率；且原材料成本较低，可替代进口试剂，节约病患开支。

A kit for the determination of superoxide dismutase in serum

The invention relates to a test kit for superoxide dismutase in serum, which belongs to the technical field of the kit. It solves the technical problems such as high cost, poor stability and inaccurate detection results of the detection method of superoxide dismutase in the prior art. The determination kit of the invention includes R1 reagent and R2 reagent, wherein R1 reagent includes buffer solution and preservative, R2 reagent includes buffer solution, pyrogallol, protectant, metal chelating agent and preservative. The test kit adopts metal ion chelating agent and protective agent to improve the opening stability and high-temperature stability of the reagent, and has good repeatability. It is suitable for a variety of automatic biochemical analyzers, and has a wider universality, which is convenient for promotion. It can effectively avoid the false results of clinical tests and greatly improve the detection efficiency. Moreover, the cost of raw materials is low, which can replace imported reagents, Save patient expenses.

【技术实现步骤摘要】
一种血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒
本专利技术属于试剂盒
，具体涉及一种血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒。
技术介绍
超氧化物歧化酶，别名肝蛋白、简称为SOD。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。从1938年首次从牛红血球中分离得到SOD开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白催化过氧阴离子发生歧化反应，并命名为超氧化物歧化酶。超氧化物歧化酶按其所含金属辅基的不同可分为三种，第一种含铜(Cu)锌(Zn)金属辅基，称为Cu.Zn-SOD，是最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种含锰(Mn)金属辅基，称为Mn-SOD，呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种含铁(Fe)金属辅基，称为Fe-SOD，呈黄褐色，存在于原核细胞中。超氧化物歧化酶常用于对缺血性/出血性心、脑等重要脏器病伤(或手术治疗后)引发的继发性(自由基)过氧化损伤及其自由基清除药物治疗效果的监测，以指导临床制定相应的自由基清除干预对策及最佳治疗时间窗的确立。它对自由基继发损伤病情的诊断、自由基清除治疗疗效跟踪和预后判断与评估等具有重要参考价值。现有技术中，超氧化物歧化酶的检测方法主要有酶联免疫吸附法、化学发光法、生化胶乳免疫比浊法。酶联免疫吸附法使用超氧化物歧化酶抗体，会造成试剂成本偏高，另外由于样本及试剂的加入需要人工操作，测试人为误差较大，虽然目前已研发出自动添加试剂的酶标仪，但试剂的混匀过程仍不可控。化学发光法、生化胶乳免疫比浊法使用了超氧化物歧化酶抗体，同样试剂成本偏高。除此之外，超氧化物歧化酶的检测方法还有底物法，但底物法因为试剂的稳定性较差，测试结果的不稳定性等原因，应用并不广泛。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术为解决现有技术中超氧化物歧化酶的检测方法成本高、稳定性差，检测结果不准确等技术问题，提供一种血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒。本专利技术解决上述技术问题采取的技术方案如下。本专利技术提供一种血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂包括缓冲液和防腐剂；所述R2试剂包括缓冲液、邻苯三酚、保护剂、金属螯合剂和防腐剂。优选的，所述R1试剂中，缓冲液是浓度为60-120mM的3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸(AMPSO)缓冲液、浓度为10-15g/L的三乙醇胺缓冲液或浓度为40-100mM的三羟基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液。优选的，所述R1试剂中，防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin300中的一种或几种，防腐剂的浓度为0.1％。优选的，所述R1试剂的pH为8.5±0.05(25±0.5℃)。优选的，所述R2试剂中，缓冲液是浓度为20-100mM的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪]-乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、浓度为30-120mM的3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液或浓度为50-150mM的3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)缓冲液。优选的，所述R2试剂中，邻苯三酚的浓度为0.1-1mM。优选的，所述R2试剂中，保护剂为酪蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、蔗糖、甘氨酸中的一种或几种，保护剂的浓度为0.1％-2％。优选的，所述R2试剂中，金属螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)、谷氨酸二乙酸四钠(GLDA)中的一种或几种，金属螯合剂的浓度为0.2-2mM。优选的，所述R2试剂中，防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin300中的一种或几种，防腐剂的浓度为0.1％。优选的，所述R2试剂的pH为7.2±0.05(25±0.5℃)。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：1、本专利技术的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒采用金属离子螯合剂和保护剂，提高试剂的开封稳定性和高温稳定性，检测重复性好，适用于多种全自动生化分析仪，具有更广泛的通用性，便于推广；2、本专利技术的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒有效避免临床测试的假性结果，极大提高了检测效率；3、本专利技术的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒原材料成本较低，可替代进口试剂，节约病患开支。附图说明图1为本专利技术提供的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒的校准曲线。具体实施方式为了进一步说明本专利技术，下面结合具体实施方式对本专利技术的优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点而不是对本专利技术专利要求的限制。本专利技术的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，R1试剂包括缓冲液和防腐剂，R2试剂包括缓冲液、邻苯三酚、保护剂、金属螯合剂和防腐剂。上述技术方案中，R1试剂和R2试剂的体积比优选为3:1。上述技术方案，R1试剂中，缓冲液是浓度为60-120mM的AMPSO缓冲液、浓度为10-15g/L的三乙醇胺缓冲液或浓度为40-100mM的Tris-HCl缓冲液，优选浓度为60mM的Tris-HCl缓冲液。上述技术方案，R1试剂中，防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin300中的一种或几种，防腐剂的浓度为0.1％，优选Proclin300，浓度为0.1％。上述技术方案中，R1试剂的pH为8.2±0.05(25±0.5℃)。上述技术方案，R2试剂中，缓冲液是浓度为20-100mM的HEPES缓冲液、浓度为30-120mM的MOPSO缓冲液或浓度为50-150mM的MOPS缓冲液，优选浓度为50mM的HEPES缓冲液。上述技术方案，R2试剂中，邻苯三酚的浓度为0.1-1mM。上述技术方案，R2试剂中，保护剂为酪蛋白、BSA、蔗糖、甘氨酸中的一种或几种，保护剂的浓度为0.1％-2％，优选甘氨酸，浓度为1％，此时试剂盒的稳定性更好。上述技术方案，R2试剂中，金属螯合剂为EDTA、EGTA、GLDA中的一种或几种，金属螯合剂的浓度为0.2-2mM，优选EDTA、EGTA和GLDA同时使用，浓度分别为0.5mM、1mM、0.5mM，此时试剂盒的重复性更好。现有的几十种氨羧配合剂中，应用最广的是乙二胺四乙酸(简称EDTA)，由于它在水中的溶解度很小(室温下，每100ml水中能溶0.02g)，故常用它的二钠盐(也简称EDTA)，后者溶解度较大(室温下，每100ml水中能溶解11.2g)，饱和水溶液的浓度约为0.3mol/L。乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸，简称EGTA，可以与钙离子较稳定的结合，是常用的钙离子螯合剂。谷氨酸二乙酸四钠，简称GLDA，是新型绿色螯合剂，由于对环境的污染远小于EDTA，因此现用于土壤改良，本申请首次将其应用于检测超氧化物歧化酶中，提高检测重复性。上述技术方案，R2试剂中，防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin300中的一种或几种，防腐剂的浓度为0.1％，优选Proclin300，浓度为0.1％。上述技术方案中，R2试剂的pH为7.2±0.05(25±0.5℃)。本专利技术的试剂盒的制备方法，无特殊操作，按各组份配比分别配置R1试剂和R2试剂，组装即可。本专利技术的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒的检测原理为：在碱性情况下，邻苯三酚会产生自氧化显色反应，当SOD活性升高时，SOD催化超氧阴离子自由基发生歧化反应增强，超氧阴离子自由基浓度降低，自氧化反应增强，反应吸光本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂包括缓冲液和防腐剂；所述R2试剂包括缓冲液、邻苯三酚、保护剂、金属螯合剂和防腐剂。

【技术特征摘要】
1.血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂包括缓冲液和防腐剂；所述R2试剂包括缓冲液、邻苯三酚、保护剂、金属螯合剂和防腐剂。2.根据权利要求1所述的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，缓冲液为浓度为60-120mM的3-[(1,1-二甲基-2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸缓冲液、浓度为10-15g/L的三乙醇胺缓冲液或浓度为40-100mM的三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液。3.根据权利要求1所述的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，防腐剂为叠氮纳、庆大霉素、Proclin300中的一种或几种，防腐剂的浓度为0.1％。4.根据权利要求1所述的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的pH为8.5±0.05(25±0.5℃)。5.根据权利要求1所述的血清中超氧化物歧化酶测定试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，缓冲液是浓度为20-100mM的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪]-乙烷磺酸缓冲液、浓度为3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，孟令洋，夏冬梅，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22