一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及胸苷激酶检测技术领域，具体是公开了一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。本发明专利技术克服了现有技术的不足，采用化学发光法进行检测，将检测周期控制在50min，操作简单方便，灵敏度大大提高，试验盒的实验结果稳定，重复性高。

【技术实现步骤摘要】
一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及胸苷激酶检测
，具体属于一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
胸苷激酶(TK1)是一种激酶，参与DNA的合成。胸苷激酶(TK1)被认为是一种较有参考价值的新肿瘤标记物,且其升高或降低与肿瘤的发生、发展、转移有密切关系。TK1酶活性与其对应蛋白量都在S期早期迅速升高和积累，并在进行有丝分裂细胞中达到最高。现有的检测方法，检出率低，特异性不好，容易存在假阳性，假阴性的问题，对患者的病情的评判受到很大程度的影响。因此，必须通过适当的检测分析方法改善传统检测方法中存在的不足，以达到准确检测的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，解决现有检测方法检测时间长，灵敏度不高，重复性差的问题，对杂质的控制不严格，不能保证检测结果准确性的问题。为解决上述问题，本专利技术所采取的技术方案如下：一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。进一步，所述酶结合物采用辣根过氧化物酶作为标记酶，所述化学发光底物采用DAB显色液，所述DAB显色液包括显色液A和显色液B。一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)制备包被载体；抗TK1抗体用包被缓冲液稀释，取待包被微孔板，将经过稀释的抗TK1抗体负载于微孔板上，包被结束后，吸去包被缓冲液，再加入封闭液，置于37℃封闭3小时或在室温下封闭过夜；弃去封闭液，干燥包被载体后加入干燥剂密封包装，得到抗TK1抗体包被载体。(2)制备公共液体：A、制备终止液：终止液为pH7.2、6mmol/L的苏木精染色液；B、制备DAB显色液；显色液A为pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，显色液B为pH6.0、10mmol/L的过氧化氢溶液；C、制备浓缩洗涤液；浓缩洗涤液为pH7.2-7.4、20mmol/LPBS缓冲液；(3)制备标准品和质控品；用稀释液与人体血清按体积比3∶1比例混合配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100、80、60、40、20、0ng/mL标准品；用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100ng/mL高值质控品和50ng/mL低值质控品。(4)组装试剂盒；将标准品和质控品、包被载体、公共液体经过半成品分装经过半成品质检后组装成胸苷激酶化学发光法检测试剂盒。进一步，步骤1中包被缓冲液为pH7.2、10mmol/L的磷酸盐溶液，所述封闭液为pH7.4、20mmol/L的PBST溶液，内含1％BSA、0.1％Proclin300以及3％蔗糖。进一步，所述步骤2中显色剂A和显色剂B按照1:1的比例混合使用，现用现配。进一步，所述步骤3中稀释液为pH7.4、20mmol/LPBS溶液。进一步，所述步骤4中采用滴配实验的方式进行半成品检测，检测合格的产品再进行组装。一种利用权利要求1所述的试剂盒检测胸苷激酶含量的检测方法，包括如下步骤：1)加入待测样品，100μL/孔，37℃孵育60min；2)加酶：每孔加入两滴或100ul的酶标记物；3)温育：用封口膜将条板封好(防止污染),37℃温育60分钟；4)洗板：取出反应板，甩尽板中液体，洗板5次，拍干，在洗涤过程中应避免产生气泡；5)每孔加入显色剂A、B溶液各一滴或各50ul，充分混匀；6)测定：用半自动发光仪，测定各孔OD.值；7)结果计算：以校准品浓度作横坐标，OD.值作纵坐标。通过标本的OD.值可在标准曲线上查出其浓度本专利技术与现有技术相比较，本专利技术的实施效果如下：1、采用化学发光法进行检测，将检测周期控制在50min，操作简单方便，灵敏度大大提高，试验盒的实验结果稳定，重复性高。2、经过多次实验探究，对缓冲溶液组成、原料配比程序等条件进行筛选，兼顾7个有关物质分离的需要，主成分与各有关物质之间、各有关物质之间均能达到基线分离。3、选用适当的有机相和缓冲溶液为流动相，采用梯度洗脱，有效完成胸苷激酶1及其相关杂质的分离情况，同时对比国内外相关标准，显著提升了检测能力，保证胸苷激酶的有效检出。附图说明：图1为本专利技术中试剂盒的加工生产流程图。图2为本专利技术中试剂盒测试标准曲线，相关系数：0.9852。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述，但本专利技术不仅限于这些实例，在为脱离本专利技术宗旨的前提下，所为任何改进均落在本专利技术的保护范围之内。实施例1一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，载体采用微孔板，工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品；其中酶结合物采用辣根过氧化物酶作为标记酶，化学发光底物采用DAB显色液，DAB显色液包括显色液A和显色液B。实施例2实施例1中胸苷激酶化学发光法检测试剂盒的具体制备方法，包括如下步骤：(1)制备包被载体；抗TK1抗体用包被缓冲液稀释，取待包被微孔板，将经过稀释的抗TK1抗体负载于微孔板上，包被结束后，吸去包被缓冲液，再加入封闭液，置于37℃封闭3小时或在室温下封闭过夜；弃去封闭液，干燥包被载体后加入干燥剂密封包装，得到抗TK1抗体包被载体。(2)制备公共液体：A、制备终止液：终止液为pH7.2、6mmol/L的苏木精染色液；B、制备DAB显色液；显色液A为pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，显色液B为pH6.0、10mmol/L的过氧化氢溶液；C、制备浓缩洗涤液；浓缩洗涤液为pH7.2-7.4、20mmol/LPBS缓冲液；(3)制备标准品和质控品；用稀释液与人体血清按体积比3∶1比例混合配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100、80、60、40、20、0ng/mL标准品；用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100ng/mL高值质控品和50ng/mL低值质控品。(4)组装试剂盒；将标准品和质控品、包被载体、公共液体经过半成品分装经过半成品质检后组装成胸苷激酶化学发光法检测试剂盒。优选的，步骤1中包被缓冲液为pH7.2、10mmol/L的磷酸盐溶液，所述封闭液为pH7.4、20mmol/L的PBST溶液，内含1％BSA、0.1％Proclin300以及3％蔗糖；所述步骤2中显色剂A和显色剂B按照1:1的比例混合使用，现用现配；所述步骤3中稀释液为pH7.4、20mmol/LPBS溶液；所述步骤4中采用滴配实验的方式进行半成品检测，检测合格的产品再进行组装。具体的本实施例中胸苷激酶化学发光法检测试剂盒批量生产的流程图如图1所示。实施例3采用实施例1、2中胸苷激酶化学发光法检测试剂盒的具体检测方法：包括如下步骤：1)加入待测样品，100μL/孔，37℃孵育60min；2)加酶：每孔加入两滴或100ul的酶标记物；3)温育：用封口膜将条板封好(防止污染),37℃温育60分钟；4)洗板：取出反应板，甩尽板中液体，洗板5次，拍干，在洗涤过程中应避免产生气泡；5)每孔加入显色剂A、B溶液各一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。

【技术特征摘要】
1.一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。2.根据权利要求1所述的一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物采用辣根过氧化物酶作为标记酶，所述化学发光底物采用DAB显色液，所述DAB显色液包括显色液A和显色液B。3.一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)制备包被载体；抗TK1抗体用包被缓冲液稀释，取待包被微孔板，将经过稀释的抗TK1抗体负载于微孔板上，包被结束后，吸去包被缓冲液，再加入封闭液，置于37℃封闭3小时或在室温下封闭过夜；弃去封闭液，干燥包被载体后加入干燥剂密封包装，得到抗TK1抗体包被载体。(2)制备公共液体：A、制备终止液：终止液为pH7.2、6mmol/L的苏木精染色液；B、制备DAB显色液；显色液A为pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，显色液B为pH6.0、10mmol/L的过氧化氢溶液；C、制备浓缩洗涤液；浓缩洗涤液为pH7.2-7.4、20mmol/LPBS缓冲液；(3)制备标准品和质控品；用稀释液与人体血清按体积比3∶1比例混合配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100、80、60、40、20、0ng/mL标准品；用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100ng/mL高值质控品和5...

【专利技术属性】
技术研发人员：余旭亮，
申请(专利权)人：安徽恩禾生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34