用于提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱装置制造方法及图纸

提供一种免疫色谱方法和免疫色谱装置，在在免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱法中，通过用充足的时间进行亚硝酸提取处理能够实现足够的灵敏度的测定。免疫色谱装置包括免疫色谱试验片和存放该试验片的容器，并在试验片的样品垫上具有检体添加口，该免疫色谱试验片包括：添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体的样品垫、包含将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体的标记体区域及将所述糖链抗原的抗体进行了固相化的检测区域，在检测区域形成抗体‑糖链抗原‑标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体的情况下具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体的情况下具有含浸有亚硝酸盐的区域，该免疫色谱试验片用于提取并测定检体中的糖链抗原，其中，(i)该免疫色谱装置具有用于保持添加的检体样本溶液并通过将检体样本溶液在短时间内供给至含浸有所述固态酸性试剂或亚硝酸盐的区域来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取的较大的检体添加口；(ii)添加口与样品垫之间没有间隙，使得样本不从添加口旁溢。

An immunochromatographic device for the extraction and determination of glycochain antigens

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱装置
本专利技术涉及一种能够在免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理的、用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱装置。
技术介绍
很多以免疫色谱法为原理的快速诊断试剂被作为快速且简便地测定病毒或细菌感染症、并确定治疗方案的一种手段而广泛使用。一般的以免疫色谱法为原理的快速诊断试剂能够通过将检体悬浮于检体悬浮液后，将该悬浮液供给至免疫色谱试验片来快速且简便地进行测定。为了检测A组β溶血性链球菌(A组β溶链菌)、口腔内链球菌等属于链球菌属的微生物，需要提取糖链抗原，并对糖链抗原进行测定。例如，报告有通过如下操作即可在免疫色谱试验片上进行亚硝酸提取处理的方法：事先使免疫色谱试验片含有亚硝酸钠和中和试剂，将检体悬浮于乙酸等酸性溶液并供给至免疫色谱试验片(专利文献1)。此外，还有如下方法：事先使免疫色谱试验片含有酸性试剂和中和试剂，将检体悬浮于亚硝酸盐并供给至免疫色谱试验片。在免疫色谱法中，有时需要控制免疫色谱试验片中的色谱展开速度，已报告有通过装置形状进行控制、通过贴合位置进行控制、通过使用的原材料(无纺布等材料)进行控制、通过试剂进行控制等形式的免疫色谱法(专利文献2和3)。现有技术文献专利文献专利文献1：国际专利公开WO2005/121794号公报专利文献2：日本特开2005-331471号公报专利文献3：日本特开2005-331463号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的课题为了检测A组β溶血性链球菌(A组β溶链菌)、口腔内链球菌等属于链球菌属的微生物，提取糖链抗原并对糖链抗原进行测定。为了提取糖链抗原，需要使用亚硝酸。由于亚硝酸单独使用时不稳定，所以进行亚硝酸提取时，通过将亚硝酸盐溶液与酸溶液(醋酸、柠檬酸和/或酒石酸等)现场混合产生亚硝酸来进行抗原提取。用免疫色谱法检测时，将亚硝酸溶液或酸溶液的任意一方涂布并干燥，编入免疫色谱试验片即可。在这种试剂形态中，与液态试剂相比，不需要试剂的混合操作所以操作简便，另一方面也存在如下课题：试剂混合后，像常规的免疫色谱法那样，如果样本在短时间内展开，则由于亚硝酸提取处理未能充分进行，因此灵敏度不足。在将液态试剂混合进行亚硝酸提取的试剂形态中，通常用1～2分钟提取样本。因此，为了得到与液态形态同等的灵敏度，需要将样本在中和的上游保持1～2分钟。本专利技术的目的在于提供一种免疫色谱方法和免疫色谱装置，在在免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱法中，通过用充足的时间进行亚硝酸提取处理而能够实现足够的灵敏度的测定。用于解决课题的手段本专利技术的专利技术人对如下技术做了深入研究：在能够在免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理的、用于提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱法中，用充足的时间进行亚硝酸提取处理。由此，发现通过将免疫色谱装置的添加口加大使得能够添加大量的检体，并且通过引入检体不从添加口流出、并对展开速度进行调节的机制能够达成上述目的，最终完成了本专利技术。即本专利技术如下所述。[1]一种免疫色谱装置，包括免疫色谱试验片和存放该试验片的容器，并在试验片的样品垫上具有检体添加口，该免疫色谱试验片包括：添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体的样品垫、包含将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体的标记体区域及将所述糖链抗原的抗体进行了固相化的检测区域，在检测区域形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体的情况下具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体的情况下具有含浸有亚硝酸盐的区域，该免疫色谱试验片用于提取并测定检体中的糖链抗原，其中，(i)免疫色谱装置具有保持添加的检体样本溶液并通过将检体样本溶液在短时间内供给至含浸有所述固态酸性试剂或亚硝酸盐的区域来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取的较大的检体添加口；(ii)添加口与样品垫之间没有间隙，使得样本不从添加口旁溢。[2]根据[1]的免疫色谱装置，其中，免疫色谱装置的检体添加口具有24～75mm2的尺寸。[3]根据[1]或[2]的免疫色谱装置，其中，免疫色谱试验片上的含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐或者中和试剂的垫由疏水性较高的原材料构成，从而通过使检体样本溶液的展开时间延迟，来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取。[4]根据[3]的免疫色谱装置，其中，疏水性较高的原材料选自由聚乙烯、聚酯、聚苯乙烯、聚丙烯、人造丝和尼龙构成的组。[5]根据[1]或[2]的免疫色谱装置，其中，免疫色谱试验片上的含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐或者中和试剂的垫由亲水度较高的原材料构成，从而通过使检体样本溶液的展开时间延迟，来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取。[6]根据[5]的免疫色谱装置，其中，亲水度较高的原材料为具有厚度的滤纸。[7]根据[1]～[6]中任一项的免疫色谱装置，其中，通过向免疫色谱试验片上的含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐或者中和试剂的垫添加表面活性剂，对检体样本溶液的展开时间进行调节，来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取。[8]根据[7]的免疫色谱装置，其中，表面活性剂选自由聚氧乙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、胆酸钠、脱氧胆酸、十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠构成的组。[9]根据[1]～[8]中任一项的免疫色谱装置，其中，通过向免疫色谱试验片上的含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐或者中和试剂的垫添加具有固定化作用的高分子化合物，对检体样本溶液的展开时间进行调节，来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取。[10]根据[9]的免疫色谱装置，其中，具有固定化作用的高分子化合物为PVA或PLL。[11]根据[1]～[10]中任一项的免疫色谱装置，其中，含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐的区域存在于样品垫上或涂布有标记体区域的垫上。[12]根据[1]～[11]中任一项的免疫色谱装置，其中，固态酸性试剂选自由丙二酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸和酒石酸构成的组。[13]根据[1]～[12]中任一项的免疫色谱装置，其中，中和试剂为三羟甲基氨基甲烷或氢氧化钠。[14]根据[1]～[13]中任一项的免疫色谱装置，糖链抗原为原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次体、衣原体或病毒的糖链抗原。[15]一种测定检体中的糖链抗原的方法，使用[1]～[14]中任一项的免疫色谱装置，通过免疫色谱法测定检体中的糖链抗原，所述测定检体中的糖链抗原的方法包括：当免疫色谱装置具有含浸有固态酸性试剂的区域时，将检体与亚硝酸溶液混合，当免疫色谱装置具有含浸有亚硝酸盐的区域时，将检体与酸性溶液混合，并添加至所述免疫色谱装置的样品垫，在含浸有固态酸性试剂的区域或含浸有亚硝酸盐的区域中，通过亚硝酸盐与固态酸性试剂反应产生的亚硝酸的作用从检体提取出糖链抗原，在含浸有中和试剂的区域，包含所述糖链抗原的酸性溶液被中和，在检测区域中形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，所述方法通过上述免疫色谱法促进糖链抗原的提取，并对检体中的糖链抗原进行测定。本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本专利申请第2017-049163号的公开内容。专利技术的效果使用本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫色谱装置，其特征在于，包括免疫色谱试验片和存放所述试验片的容器，并在试验片的样品垫上具有检体添加口，所述免疫色谱试验片用于提取检体中的糖链抗原并进行测定，该免疫色谱试验片包括：样品垫，用于添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体；标记体区域，包含有将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体；及检测区域，对所述糖链抗原的抗体进行了固相化，在检测区域形成抗体‑糖链抗原‑标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，其中，(i)所述免疫色谱装置具有用于保持添加的检体样本溶液并通过将检体样本溶液短时间内供给至含浸有所述固态酸性试剂或亚硝酸盐的区域来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取的较大的检体添加口；(ii)添加口与样品垫之间没有间隙，使得样本不从添加口旁溢。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.03.14 JP 2017-0491631.一种免疫色谱装置，其特征在于，包括免疫色谱试验片和存放所述试验片的容器，并在试验片的样品垫上具有检体添加口，所述免疫色谱试验片用于提取检体中的糖链抗原并进行测定，该免疫色谱试验片包括：样品垫，用于添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体；标记体区域，包含有将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体；及检测区域，对所述糖链抗原的抗体进行了固相化，在检测区域形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，其中，(i)所述免疫色谱装置具有用于保持添加的检体样本溶液并通过将检体样本溶液短时间内供给至含浸有所述固态酸性试剂或亚硝酸盐的区域来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取的较大的检体添加口；(ii)添加口与样品垫之间没有间隙，使得样本不从添加口旁溢。2.根据权利要求1所述的免疫色谱装置，其特征在于，所述免疫色谱装置的检体添加口具有24～75mm2的尺寸。3.根据权利要求1或2所述的免疫色谱装置，其特征在于，所述免疫色谱试验片上的含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐或者中和试剂的垫由疏水性较高的原材料构成，从而通过使检体样本溶液的展开时间延迟，来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取。4.根据权利要求3所述的免疫色谱装置，其特征在于，所述疏水性较高的原材料选自由聚乙烯、聚酯、聚苯乙烯、聚丙烯、人造丝和尼龙构成的组。5.根据权利要求1或2所述的免疫色谱装置，其特征在于，所述免疫色谱试验片上的含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐或者中和试剂的垫由亲水度高的原材料构成，从而通过使检体样本溶液的展开时间延迟，来促进亚硝酸盐和固态酸性试剂对糖链抗原的提取。6.根据权利要求5所述的免疫色谱装置，其特征在于，所述亲水度较高的原材料为具有厚度的滤纸。7.根据权利要求1～6中任一项所述的免疫色谱装置，其特征在于，通过向所述免疫色谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：加藤大介，村松志野，服部友洋，
申请(专利权)人：电化生研株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP