红细胞的凝集方法和分离方法以及红细胞凝集用试剂技术

本发明专利技术提供可从血液试样使红细胞瞬间地以充分的尺寸凝集，可从血液试样完全地分离红细胞的、红细胞的凝集方法和分离方法以及红细胞凝集用试剂。本发明专利技术的红细胞的凝集方法包括在血液试样中添加含有胆酸系表面活性剂和酸的溶液。另外，本发明专利技术的红细胞的分离方法包括分离通过上述本发明专利技术的方法凝集的红细胞。此外，本发明专利技术的红细胞凝集用试剂含有胆酸系表面活性剂和酸。

Agglutination and Separation of Red Blood Cells and Reagents for Red Blood Cell Agglutination

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】红细胞的凝集方法和分离方法以及红细胞凝集用试剂
本专利技术涉及红细胞的凝集方法和分离方法以及红细胞凝集用试剂。
技术介绍
血液被用于各种疾病的诊断或治疗的判定，由红细胞、白细胞和血小板等血细胞成分及作为液体成分的血浆构成。该血液中含有的血浆(液体成分)或从血液除去血细胞成分和纤维蛋白得到的血清含有蛋白质、糖类、脂质等维持生物体功能所需要的各种成分，可用作用于进行内脏系统疾病等的诊断或治疗的生物化学检查用的分析用试样。但是，若在进行生物化学检查时血细胞成分存在于分析用试样中，则有血细胞成分妨碍检查的情况，特别是在利用比色分析等来进行生物化学检查的情况下，有红细胞对试样的颜色或浊度造成影响而妨碍检查的情况。因此，在生物化学检查中，将预先从全血试样分离红细胞等血细胞成分得到的血浆或血清用作分析用试样。作为将血细胞成分与血浆或血清分离的方法，采用以下方法：将使用采血针从患者采血得到的血液放入采血管中，将含有血液的采血管置于离心分离机中进行离心分离。但是，使用上述离心分离机的分离有需要长时间，操作繁杂等问题，需要更简便的分离方法。另外，作为离心分离以外的分离方法，有使用血细胞分离膜、血细胞分离材料、称作中空丝的特殊过滤器的方法。例如，报道了使用由固相层支持体粒子、固相层支持体粘合剂膜、红细胞凝集素构成的过滤器，从全血样品分离红细胞，生成血浆的方法(专利文献1)。但是，在使用这些过滤器的情况下，滴加的血液试样在过滤器内浸透并扩散，导致血浆或血清残留在过滤器中。因此，在血液试样为少量的情况下，分离红细胞后的血浆或血清的量变少，有无法得到充分进行生物化学检查的量的分析用试样的问题。此外，由于在分离操作的过程中对过滤器施加一定的压力，所以有产生溶血，或血液飞散等问题。作为从全血除去红细胞的其它方法，报道了在可有效地使红细胞凝集的条件下，使含有选自乙酸、枸橼酸、抗坏血酸、乳酸、马来酸、苹果酸和丙二酸的酸的溶液与全血试样接触，接着使用纤维状材料过滤的方法(专利文献2)。另一方面，报道了作为表面活性剂的一种的胆酸系表面活性剂为用于膜蛋白质的提取或分离的阴离子型表面活性剂，例如在使用具备生物传感器的装置来测定血红蛋白浓度时，将胆酸系表面活性剂用作为溶血剂(专利文献3)。但是，到目前为止未报道过在使红细胞凝集时使用胆酸系表面活性剂的实例。现有技术文献专利文献专利文献1：美国专利第5981294号专利文献2：美国专利第5118428号专利文献3：日本特开2014-102143。
技术实现思路
专利技术所要解决的课题如上所述，在目前的利用离心分离法或特殊的过滤器的红细胞的分离法中，操作需要长时间且复杂，或有溶血或血液飞散的问题。另外，即使在使用酸来使红细胞凝集的方法(专利文献2)的情况下，由于所凝集的红细胞的尺寸小，所以红细胞的分离不完全，作为用于生物化学检查的分析用试剂而言不充分。本专利技术鉴于上述情况而完成的，其目的在于，提供可从血液试样使红细胞瞬间地以充分的尺寸凝集，可从血液试样完全地分离红细胞的、红细胞的凝集方法和分离方法以及红细胞凝集用试剂。用于解决课题的手段本专利技术人反复深入研究，结果发现，在使血液试样中的红细胞凝集的方法中，通过在血液试样中添加同时含有酸和胆酸系表面活性剂的溶液，与目前的只添加酸的红细胞凝集法相比，可瞬间地凝集充分的尺寸的红细胞，从而完成了本专利技术。胆酸系表面活性剂目前作为溶血剂为人所知，但在使红细胞凝集时，通过在血液试样中添加将胆酸系表面活性剂与酸组合而含有的溶液，可不发生溶血，而使红细胞瞬间地以充分的尺寸凝集，这是目前无法预料到的事实。即，本专利技术提供红细胞的凝集方法，所述方法包括在血液试样中添加含有胆酸系表面活性剂和酸的溶液。另外，本专利技术提供从血液试样分离红细胞的方法，所述方法包括分离通过上述本专利技术方法凝集的红细胞。此外，本专利技术提供含有胆酸系表面活性剂和酸的红细胞凝集用试剂。此外，本专利技术提供本专利技术的试剂作为用于使红细胞凝集的试剂的应用。专利技术效果通过采用本专利技术的方法和试剂，可从血液试样瞬间地凝集充分的尺寸的红细胞，即使不采用如目前的利用长时间的离心分离或特殊的过滤器的分离方法，也可完全地分离红细胞，可容易且简便地将含有血清和血浆的成分与红细胞分离。附图简述[图1]是表示在比较例1-1、比较例1-2和实施例1中进行的红细胞凝集确认实验的结果的照片。[图2]是表示在比较例2-1、比较例2-2和实施例2中进行的红细胞凝集确认实验的结果的照片。[图3]是表示在比较例3-1、比较例3-2和实施例3中进行的红细胞凝集确认实验的结果的照片。[图4]是表示在比较例4-1、比较例4-2和实施例4中进行的红细胞凝集确认实验的结果的照片。具体实施方式本专利技术所涉及的红细胞的凝集方法的特征在于，在血液试样中添加含有胆酸系表面活性剂和酸的溶液。(血液试样)在本专利技术中，血液试样为从人或动物的受试者通过采血取得的含有红细胞的试样。作为血液试样，可直接使用从受试者采血得到的全血，或可使用将采集的全血用生理盐水等稀释得到的试样，但从操作的简便性的观点出发，优选直接使用从受试者采血得到的全血。在本专利技术的方法中使用的血液试样的量通常为10μl~50ml，优选为(望ましくは)10μl~1ml，更优选为10μl~100μl。(胆酸系表面活性剂)本专利技术中使用的胆酸系表面活性剂为分子内具有类固醇骨架的表面活性剂，具体而言为具有胆酸或胆酸衍生物的结构的表面活性剂。在这里，胆酸衍生物是指由胆酸衍生的所有的化合物，具体而言，可列举出脱氧胆酸等脱羟基化合物、牛磺脱氧胆酸等取代酰胺化合物等。本专利技术中使用的胆酸系表面活性剂优选为选自胆酸、胆酸钠、脱氧胆酸、脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸钠、甘氨石胆酸、甘氨石胆酸钠、石胆酸、石胆酸钠、牛磺胆酸、牛磺胆酸钠、牛磺熊脱氧胆酸、牛磺熊脱氧胆酸钠等阴离子型表面活性剂，聚氧乙烯胆甾醇醚、N,N-双(3-D-葡糖酰氨基丙基)胆酰胺(N,N-Bis[3-D-gluconamidopropyl]cholamide)(BIGCHAPS)等非离子型表面活性剂，硫酸-3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵基]-1-丙烷(CHAPS)等两性型表面活性剂，或它们的水合物的化合物。这些胆酸系表面活性剂可单独使用或组合使用2种以上。作为胆酸系表面活性剂，其中从凝集速度和红细胞更完全的分离的观点出发，优选胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠及它们的水合物等阴离子型胆酸系表面活性剂，特别优选牛磺脱氧胆酸钠及其水合物。(酸)作为本专利技术中使用的酸，只要是在水溶液中产生氢离子(H+)的物质即可。具体而言，可列举出无机酸和有机酸以及它们的盐。作为无机酸，可列举出盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等。作为有机酸，例如可列举出乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸、丙二酸、抗坏血酸、巴莫酸、马来酸、己二酸、海藻酸、天冬氨酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸盐、半氨基磺酸(hemisulfanicacid)、庚酸、己酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.红细胞的凝集方法，所述方法包括在血液试样中添加含有胆酸系表面活性剂和酸的溶液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.05 JP 2016-1969631.红细胞的凝集方法，所述方法包括在血液试样中添加含有胆酸系表面活性剂和酸的溶液。2.权利要求1所述的方法，其中，上述溶液的pH值为2.5~4.0。3.权利要求1或2所述的方法，其中，上述胆酸系表面活性剂为牛磺脱氧胆酸钠水合物。4.从血液试样分离红...

【专利技术属性】
技术研发人员：村松志野，加藤大介，服部友洋，
申请(专利权)人：电化生研株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP