可防止非特异反应的、用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱试验片制造技术

提供一种免疫色谱试验片，在在免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱法中，通过使包含亚硝酸的展开液高效且持续地与中和试剂接触来进行中和，从而防止非特异反应。该免疫色谱试验片包括：添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体的样品垫、包含将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体的标记体区域及将所述糖链抗原的抗体进行了固相化的检测区域，在检测区域形成抗体‑糖链抗原‑标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，该免疫色谱试验片用于提取并测定检体中的糖链抗原，其中，含浸有中和试剂的区域的原材料是具有吸收性高、保水性高、且释放性低或释放性持续这三种特性的滤纸或玻璃纤维滤纸，通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性和高保水性而充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，并通过含浸有中和试剂的区域的低释放性或持续释放性，抑制残留的酸性溶液到达检测区域或使经充分中和的试验液持续向检测区域展开，从而抑制非特异反应。

Immunochromatographic test piece for extraction and determination of glycochain antigen, which can prevent nonspecific reaction

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可防止非特异反应的、用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱试验片
本专利技术涉及一种能够在免疫色谱试验片上进行糖链抗原的亚硝酸提取处理的、用于提取并测定糖链抗原的免疫色谱试验片。
技术介绍
很多以免疫色谱法为原理的快速诊断试剂被作为快速且简便地测定病毒或细菌感染症、并确定治疗方案的一种手段而广泛使用。一般的以免疫色谱法为原理的快速诊断试剂能够通过将检体悬浮于检体悬浮液后，将该悬浮液供给至免疫色谱试验片来快速且简便地进行测定。为了检测A组β溶血性链球菌(A组β溶链菌)、口腔内链球菌等属于链球菌属的微生物，需要提取糖链抗原，并对糖链抗原进行测定。例如，报告有通过如下操作即可在免疫色谱试验片上进行亚硝酸提取处理的方法：事先使免疫色谱试验片含有亚硝酸钠和中和试剂，将检体悬浮于乙酸等酸性溶液并供给至免疫色谱试验片(专利文献1)。另外，也有使免疫色谱试验片预先包含酸性试剂和中和试剂，将检体悬浮在亚硝酸盐中供给到免疫色谱试验片的方法。目前市售的利用免疫色谱法的A组β溶血性链球菌抗原检测试剂大多是利用下面的方法：在试验刚开始前混合亚硝酸盐溶液和酸溶液这两种液体，产生酸性亚硝酸，由产生的亚硝酸提取抗原用于试验，或者利用将含浸了酸性试剂的垫组装到免疫色谱装置(免疫色谱试验片)中，在免疫色谱试验片上产生亚硝酸，提取抗原的方法。在该方法中，需要中和所产生的酸性亚硝酸，在免疫色谱试验片上事先以干燥状态包含中和试剂，利用该中和试剂中和亚硝酸。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开WO2005/121794号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的课题目前市售的利用免疫色谱法的A组β溶血性链球菌抗原检测试剂大多将亚硝酸盐溶液和酸溶液混合而产生的酸性亚硝酸用于抗原的提取，含有用于抗原提取的亚硝酸的展开液在用免疫色谱试验片上所含的干燥状态的中和试剂中和后，使抗原抗体反应进行测定。但是，在该以往的方法中，存在产生非特异反应的问题。本专利技术的目的在于提供一种免疫色谱试验片，在在免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱法中，通过使包含亚硝酸的展开液高效且持续地与中和试剂接触来进行中和，从而防止非特异反应。用于解决课题的方案本专利技术人为了解决在以往的方法中在免疫色谱试验片上通过亚硝酸提取来提取糖链抗原并进行测定的免疫色谱法中经过一定时间后发生非特异反应的问题点进行了深入研究。本专利技术人等发现，在以往的方法中，经过一定时间后，中和试剂被残留在免疫色谱试验片的上游的酸全部消耗，免疫色谱试验片上的展开液整体偏酸性，结果发生非特异反应。因此，考虑用免疫色谱试验片上的中和试剂可靠且持续地中和用于亚硝酸提取的酸，或者使残留在免疫色谱试验片的上游的酸停留在上游而不到达发生抗原抗体反应的检测区域。本专利技术人等发现，作为含浸有中和试剂的区域中使用的多孔性材料，通过使用为克重10～400g/m2、且厚度0.1～2.0mm的织物的、吸收性高、保水性高、且可长时间(1小时以上)持续地释放中和剂的原材料，即使在酸经过一定时间后(例如作为判定时间的5分钟以后)一点一点地向测试条的下游展开时，也能够维持充分的中和能力，抑制非特异反应。而且，发现在使用吸收性和保水性高、释放性低的玻璃纤维滤纸的情况下，经过一定时间后，含浸在样品垫中的酸移动到中和垫时，酸从该区域被释放，抑制其到达发生抗原抗体反应的检测区域，结果，阴性的情况下，抑制非特异反应，在最小检测灵敏度附近的阳性检体的情况下，防止在判定时间以后条带显色，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下。[1]一种免疫色谱试验片，包括：添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体的样品垫、包含将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体的标记体区域及将上述糖链抗原的抗体进行了固相化的检测区域，在检测区域形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在上述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，该免疫色谱试验片用于提取并测定检体中的糖链抗原，其中，含浸有中和试剂的区域的原材料是具有吸收性高、保水性高、且释放性低或释放性持续这三种特性的滤纸或玻璃纤维滤纸，通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性和高保水性而充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，并通过含浸有中和试剂的区域的低释放性或持续释放性，抑制残留的酸性溶液到达检测区域或使经充分中和的试验液持续向检测区域展开，从而抑制非特异反应。[2]一种免疫色谱试验片，包括：添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体的样品垫、包含将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体的标记体区域及将所述糖链抗原的抗体进行了固相化的检测区域，在检测区域形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，该免疫色谱试验片用于提取并测定检体中的糖链抗原，含浸有中和试剂的区域的原材料是克重为10～400g/m2，且厚度为0.1～2.0mm的织物。[3]根据[1]或[2]所述的免疫色谱试验片，所述织物的每1cm/m2的吸水量为10～100μl/cm2，且吸水速度为1.0～5.0μl/sec，进而将1cm/m2的片段在润湿状态下与检测区域接触，静置5分钟后，保水量为10～100μl/cm2，将1cm/m2的片段在润湿状态下与膜接触，静置5分钟后，溶液扩散面积为20mm2以下。[4]根据[1]至[3]中任一项所述的免疫色谱试验片，通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性和高保水性而充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，并通过含浸有中和试剂的区域的释放性持续力，即使残留的酸性溶液到达检测区域时，也通过蓄积充分的中和能力而抑制非特异反应。[5]根据[1]至[4]中任一项所述的免疫色谱试验片，通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性和高保水性而充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，并通过含浸有中和试剂的区域的低释放性，抑制残留的酸性溶液到达检测区域，在阴性的情况下抑制非特异反应，在阳性的情况下防止判定时间以后的条带显色。[6]根据[1]至[5]中任一项所述的免疫色谱试验片，含浸有固态酸性试剂或亚硝酸盐的区域存在于样品垫上或涂布有标记体区域的垫上。[7]根据[1]至[6]中任一项所述的免疫色谱试验片，固态酸性试剂选自由丙二酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸和酒石酸构成的组。[8]根据[1]至[7]中任一项所述的免疫色谱试验片，中和试剂是三羟甲基氨基甲烷或氢氧化钠。[9]根据[1]至[8]中任一项所述的免疫色谱试验片，糖链抗原为原生动物、真菌、细菌、支原体、立克次体、衣原体或病毒的糖链抗原。[10]一种测定检体中的糖链抗原的方法，使用[1]～[9]中任一项的免疫色谱试验片，通过免疫色谱法测定检体中的糖链抗原，上述方法包括：当免疫色谱试验片具有含浸有固态酸性试剂的区域时，将检体与亚硝酸溶液混合，当免疫色谱试验片具有含浸有亚硝酸盐的区域时，将检体与酸性溶液混合，并添加至上述免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫色谱试验片，用于提取并测定检体中的糖链抗原，其特征在于，该免疫色谱试验片包括：样品垫，用于添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体；标记体区域，包含有将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体；及检测区域，对所述糖链抗原的抗体进行了固相化，在检测区域形成抗体‑糖链抗原‑标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，其中，含浸有中和试剂的区域的原材料是具有吸收性高、保水性高且释放性低或释放性持续这三种特性的滤纸或玻璃纤维滤纸，通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性和高保水性而充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，并通过含浸有中和试剂的区域的低释放性或持续释放性而抑制残留的酸性溶液到达检测区域或使经充分中和的试验液持续向检测区域展开，从而抑制非特异反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.03.14 JP 2017-0491551.一种免疫色谱试验片，用于提取并测定检体中的糖链抗原，其特征在于，该免疫色谱试验片包括：样品垫，用于添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体；标记体区域，包含有将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体；及检测区域，对所述糖链抗原的抗体进行了固相化，在检测区域形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，其中，含浸有中和试剂的区域的原材料是具有吸收性高、保水性高且释放性低或释放性持续这三种特性的滤纸或玻璃纤维滤纸，通过含浸有中和试剂的区域的高吸水性和高保水性而充分中和包含所述糖链抗原的酸性溶液，并通过含浸有中和试剂的区域的低释放性或持续释放性而抑制残留的酸性溶液到达检测区域或使经充分中和的试验液持续向检测区域展开，从而抑制非特异反应。2.一种免疫色谱试验片，包括：添加与亚硝酸盐或酸性溶液混合而得的检体的样品垫、包含将糖链抗原的抗体标记而得的标记抗体的标记体区域及将所述糖链抗原的抗体进行了固相化的检测区域，在检测区域形成抗体-糖链抗原-标记抗体复合体，并对糖链抗原进行测定，该免疫色谱试验片在所述标记体区域的上游具有含浸有中和试剂的区域，进一步，在该含浸有中和试剂的区域的上游，在使用与亚硝酸盐混合而得的检体时具有含浸有固态酸性试剂的区域，在使用与酸性溶液混合而得的检体时具有含浸有亚硝酸盐的区域，该免疫色谱试验片用于提取并测定检体中的糖链抗原，所述免疫色谱试验片的特征在于，含浸有中和试剂的区域的原材料是克重为10～400g/m2，且厚度为0.1～2.0mm的织物。3.根据权利要求1或2所述的免疫色谱试验片，其特征在于，所述织物的每1cm/m2的吸水量为10～100μl/cm2，且吸水速度为1.0～5.0μl/sec，进而将1cm/m2的片段在润湿状态下与检测区域接触，静置5分钟后，保水量为10～100μl/cm2，将1cm/m2的片段在润湿状态下与膜接触，静置5分钟后，溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：加藤大介，村松志野，服部友洋，
申请(专利权)人：电化生研株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP