抗PD-1抗体及其用途制造技术

本申请提供抗PD‑1抗体或其片段。在各种实例中，所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1(SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13)、HCDR2(SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14)和HCDR3(SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15)，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1(SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16)、LCDR2(SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:17)和LCDR3(SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:18)。还提供了使用所述抗体或其片段来治疗和诊断诸如癌症、感染或免疫紊乱的疾病的方法。

Anti PD-1 antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-1抗体及其用途
技术介绍
程序性细胞死亡1(PD-1)的cDNA于1992年从鼠T细胞杂交瘤和经历细胞凋亡的造血祖细胞系中分离出。基因切除(geneticablation)研究显示，PD-1的缺陷在多种的小鼠品系中导致不同的自身免疫表型。具有转基因T细胞受体(TCR)的PD-1缺陷的同种异体T细胞对同种抗原(alloantigen)表现出增强的反应，表明T细胞上的PD-1在响应抗原中起到负调节作用。几项研究对与PD-1相互作用的分子的发现作出贡献。在1999年，B7同源物1(B7-H1，也称为程序性死亡配体1[PD-L1])，基于其与B7家族分子的同源性，利用分子克隆和人类表达序列标签数据库检索，独立于PD-1被鉴定出来，并显示B7-H1在体外作为人T细胞应答的抑制剂起作用。一年后，Freeman、Wood和Honjo的实验室表明，B7-H1(以下称为PD-L1)是PD-1的结合和功能性伴侣，这两项独立的研究线汇合。接下来，确定了PD-L1缺陷小鼠(PD-L1KO小鼠)易于被诱导自身免疫性疾病，尽管这一小鼠品系并不自发地发展出这样的疾病。之后，阐明了PD-L1/PD-1相互作用在体内抑制T细胞应答中起着主导作用，特别是在肿瘤微环境中。初步研究显示，肿瘤相关的PD-L1促进了活化的T细胞的凋亡(DongH.等，Tumor-associatedB7-H1promotesT-cellapoptosis:apotentialmechanismofimmuneevasion.Naturemedicine.2002；8(8):793-800)，并且还刺激人外周血T细胞中的IL-10产生(DongH等，B7-H1,athirdmemberoftheB7family,co-stimulatesT-cellproliferationandinterleukin-10secretion.Naturemedicine.1999；5(12):1365-9)以介导免疫抑制。目前已知PD-L1对免疫抑制的作用要复杂得多。除了T细胞凋亡和IL-10诱导外，PD-L1还可以通过多种机制引起T细胞功能障碍。在体外和体内，PD途径也显示出促进T细胞无能。最近，FDA批准了两种PD-1mAb来治疗人类癌症，一种来自施贵宝(OpDivo，纳武单抗(nivolumab),MDx1106，BMS-936558，ONO-4538)，另一种来自默克(Keytruda,派姆单抗(pembrolizumab),lambrolizumab，MK-3475)。此外，PD-1或PD-L1的多种mAb正在数以百计的牵涉数以千计的患者的临床试验中积极开发。迄今为止，抗PD治疗通过诱导晚期和转移性肿瘤的消退(regression)和提高生存率而产生显著的临床益处。更重要的是，抗PD治疗可以具有持久的效果、可耐受的毒性，并显示适用于广谱的癌症类型，特别是实体肿瘤。这些临床发现进一步证实了PD通路阻断的原理，并将抗PD治疗置于与个性化或肿瘤类型特异性治疗不同的独特类别中。由于其与其他癌症治疗相比独特且不重叠的机制，人们正将抗PD治疗的方式与几乎所有的癌症治疗方法相结合，以试图进一步扩大治疗效力。除了与多种癌症免疫治疗方法(如癌症疫苗、共刺激和共抑制抗体和过继性细胞治疗)相结合外，还开始了各种临床试验以将抗PD治疗与化疗、放疗和靶向治疗相结合。抗PD治疗在人类癌症特别是实体肿瘤的免疫治疗中处于中心地位。这种疗法不同于以前的免疫治疗剂——其主要目的是增强全身免疫应答或产生对癌症的新免疫力；相反，抗PD治疗调节肿瘤部位的免疫应答，靶向肿瘤引起的免疫缺陷，并修复正在进行的免疫反应。虽然抗PD治疗用于治疗多种人类癌症的临床成功已经证实了这种方法，但我们仍在研究这一途径和相关的免疫应答，这将有助于发现和设计新的临床可应用的癌症免疫治疗方法。
技术实现思路
本公开提供了抗PD-1抗体，其对PD-1蛋白呈现出色的结合和抑制活性。测试的PD-1抗体中的一种甚至显示出比两个经监管批准的抗PD-1抗体产品更强的结合活性。因此，根据本公开的一个实施方案，提供了一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人类程序性细胞死亡蛋白1(PD-L1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自由以下组成的组：(a)HCDR1:GFTFSSYT(SEQIDNO:1)，HCDR2:ISHGGGDT(SEQIDNO:2)，HCDR3:ARHSGYERGYYYVMDY(SEQIDNO:3)，LCDR1:ESVDYYGFSF(SEQIDNO:4)，LCDR2:AAS(SEQIDNO:5)，LCDR3:QQSKEVPW(SEQIDNO:6)；(b)HCDR1:GYTFTSYT(SEQIDNO:7)，HCDR2:INPTTGYT(SEQIDNO:8)，HCDR3:ARDDAYYSGY(SEQIDNO:9)，LCDR1:ENIYSNL(SEQIDNO:10)，LCDR2:AAK(SEQIDNO:11)，LCDR3:QHFWGTPWT(SEQIDNO:12)；和(c)HCDR1:GFAFSSYD(SEQIDNO:13)，HCDR2:ITIGGGTT(SEQIDNO:14)，HCDR3:ARHRYDYFAMDN(SEQIDNO:15)，LCDR1:ENVDNYGINF(SEQIDNO:16)，LCDR2:VSS(SEQIDNO:17)，LCDR3:QQSKDVPW(SEQIDNO:18)。在一些实施方案中，本公开的抗体或片段还包括重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或其组合。在一些实施方案中，轻链恒定区是κ链或λ链恒定区。在一些实施方案中，所述抗体或其片段可以是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的同种型。在一些实施方案中，所述同种型为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些实施方案中，所述抗体或其片段是嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。在一些实施方案中，所述抗体或其片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO∶35、SEQIDNO∶37、SEQIDNO：39的氨基酸序列，或与SEQIDNO：35、SEQIDNO:37或SEQIDNO:39具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQIDNO：41、SEQIDNO∶43、SEQIDNO：45的氨基酸序列，或与SEQIDNO：41、SEQIDNO:43或SEQIDNO:45具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本公开提供了一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人类程序性细胞死亡蛋白1(PD-L1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人程序性细胞死亡蛋白1(PD‑L1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自由以下组成的组：(a)HCDR1:GFTFSSYT(SEQ ID NO:1)，HCDR2:ISHGGGDT(SEQ ID NO:2)，HCDR3:ARHSGYERGYYYVMDY(SEQ ID NO:3)，LCDR1:ESVDYYGFSF(SEQ ID NO:4)，LCDR2:AAS(SEQ ID NO:5)，LCDR3:QQSKEVPW(SEQ ID NO:6)；(b)HCDR1:GYTFTSYT(SEQ ID NO:7)，HCDR2:INPTTGYT(SEQ ID NO:8)，HCDR3:ARDDAYYSGY(SEQ ID NO:9)，LCDR1:ENIYSNL(SEQ ID NO:10)，LCDR2:AAK(SEQ ID NO:11)，LCDR3:QHFWGTPWT(SEQ ID NO:12)；和(c)HCDR1:GFAFSSYD(SEQ ID NO:13)，HCDR2:ITIGGGTT(SEQ ID NO:14)，HCDR3:ARHRYDYFAMDN(SEQ ID NO:15)，LCDR1:ENVDNYGINF(SEQ ID NO:16)，LCDR2:VSS(SEQ ID NO:17)，LCDR3:QQSKDVPW(SEQ ID NO:18)。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.20 CN 20171004614821.一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人程序性细胞死亡蛋白1(PD-L1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自由以下组成的组：(a)HCDR1:GFTFSSYT(SEQIDNO:1)，HCDR2:ISHGGGDT(SEQIDNO:2)，HCDR3:ARHSGYERGYYYVMDY(SEQIDNO:3)，LCDR1:ESVDYYGFSF(SEQIDNO:4)，LCDR2:AAS(SEQIDNO:5)，LCDR3:QQSKEVPW(SEQIDNO:6)；(b)HCDR1:GYTFTSYT(SEQIDNO:7)，HCDR2:INPTTGYT(SEQIDNO:8)，HCDR3:ARDDAYYSGY(SEQIDNO:9)，LCDR1:ENIYSNL(SEQIDNO:10)，LCDR2:AAK(SEQIDNO:11)，LCDR3:QHFWGTPWT(SEQIDNO:12)；和(c)HCDR1:GFAFSSYD(SEQIDNO:13)，HCDR2:ITIGGGTT(SEQIDNO:14)，HCDR3:ARHRYDYFAMDN(SEQIDNO:15)，LCDR1:ENVDNYGINF(SEQIDNO:16)，LCDR2:VSS(SEQIDNO:17)，LCDR3:QQSKDVPW(SEQIDNO:18)。2.权利要求1所述的抗体或其片段，进一步包括重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或它们的组合。3.权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述轻链恒定区是κ链或λ链恒定区。4.权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的同种型。5.权利要求4所述的抗体或其片段，其中所述同种型为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。6.权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。7.权利要求6所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是人源化抗体。8.权利要求7所述的抗体或其片段，其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39的氨基酸序列，或与SEQIDNO:35、SEQIDNO:37或SEQIDNO:39具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。9.权利要求8所述的抗体或其片段，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:45的氨基酸序列，或与SEQIDNO:41、SEQIDNO:43或SEQIDNO:45具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。10.一种分离的抗体或片段，所述分离的抗体或片段对人程序性细胞死亡蛋白1(PD-L1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自由以下组成的组：(a)HCDR1:GFTFSSYT(SEQIDNO:1)，HCDR2:ISHGGGDT(SEQIDNO:2)，HCDR3:ARHSGYERGYYYVMDY(SEQIDNO:3)，LCDR1:ESVDYYGFSF(SEQIDNO:4)，LCDR2:AAS(SEQIDNO:5)，LCDR3:QQSKEVPW(SEQIDNO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈列平，罗利群，
申请(专利权)人：大有华夏生物医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11