特异性结合CD66c的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抗CD66c抗体及其用于癌症治疗的用途，更具体地，涉及可以通过使用特异性识别CD66c的抗体来诱导T细胞活化或体液免疫应答、识别并结合于CD66c的抗体；编码该抗体或抗原结合片段的核酸分子；包含该核酸分子的载体和宿主细胞；以及该抗体或抗原结合片段用于缓解、预防、治疗或诊断CD66c相关疾病例如实体癌的用途。

Specific antibody binding to CD66c and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合CD66c的抗体及其用途
本专利技术涉及抗CD66c抗体及其用于治疗癌症的用途，更具体地，可以使用特异性识别CD66c的抗体诱导T细胞活化或体液免疫应答。特异性识别CD66c的抗体或其抗原结合片段、编码该抗体或其抗原结合片段的核酸分子、包含该核酸分子的载体和宿主细胞用于CD66c相关疾病例如实体癌症的缓解、预防、治疗或诊断。
技术介绍
CD66c被称为CEACAM6(癌胚抗原相关细胞粘附分子6)或NCA(非特异性交叉反应糖蛋白抗原)-90，并且在肺癌、胰腺癌、乳腺癌、直肠癌和肝癌患者的血液中具有较高的浓度。上述CD66c是细胞粘附的重要蛋白质，并且在中性粒细胞的情况下参与由细胞因子活化的内皮细胞的粘附。此外，如果阻止细胞粘附，正常细胞会自行毁灭。这个过程叫做失巢凋亡(anoikis)。然而，肿瘤细胞对这种失巢凋亡具有抗性，因此促进癌症的发作和癌症的转移。有报道称上述CD66c阻止失巢凋亡，并且还有报道称在癌细胞中恶性表型通过调节CD66c的表达而发生变化。此外，当通过使用小干扰RNA使CD66c基因沉默来抑制蛋白质表达时，通过增强失巢凋亡来抑制体内转移。总之，可以通过抑制CD66c的功能来预防转移。
技术实现思路
技术问题根据一种实施方式，本专利技术提供了结合于CD66c的抗体及其抗原结合片段。本专利技术的另一种实施方式提供了编码该抗体或抗原结合片段的核酸分子、携带该核酸分子的载体和包含该核酸分子的宿主细胞。本专利技术的另一种实施方式提供了检测或诊断CD66c相关疾病的方法或试剂盒，该试剂盒包含抗体、核酸分子、载体和/或宿主细胞。本专利技术的又一种实施方式提供了包含抗体、核酸分子、载体和/或宿主细胞，用于预防、治疗或缓解CD66c相关疾病的组合物，或抗体、核酸分子、载体和/或宿主细胞在预防、治疗或缓解碳酸酐酶相关疾病中的用途。本专利技术的再一种实施方式提供了预防、治疗或缓解CD66c相关疾病的方法，包括将含有抗体，核酸分子，载体和/或宿主细胞的组合物施用于患有碳酸酐酶相关疾病的受试者。本专利技术的又另一种实施方式提供了用于预防或治疗癌症或癌症转移相关疾病的组合物或方法。技术方案本专利技术涉及识别和结合CD66c的抗体、编码该抗体或抗原结合片段的核酸分子、携带该核酸分子的载体、包含该核酸分子或载体的宿主细胞、以及该抗体或其抗原结合片段在缓解、预防、治疗或诊断CD66c阳性实体瘤中的用途。分化簇66c(CD66c)是被称为癌胚抗原相关细胞粘附分子6(CEACAM6)或非特异性交叉反应糖蛋白抗原(NCA)-90的蛋白质，并且是细胞粘附的重要蛋白质。CD66c可以优选地表示为但不限于SEQIDNo：1的氨基酸序列(基因库蛋白质编号AAH05008)。一种实施方式提供了特异性识别CD66c的抗CD66c抗体。根据本专利技术的抗CD66c抗体诱导体液免疫应答和细胞介导的免疫应答。根据本专利技术的抗CD66c抗体特异性识别CD66c(分化簇66c)的表位，并且可以有效地检测CD66c抗原。如本文所用，术语“抗体”是指通过刺激免疫系统中的抗原产生的物质，其种类没有特别限制。抗体可以以非天然方式产生，例如，重组或合成产生。抗体可以是动物抗体(例如小鼠抗体等)、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。此外，除非另有说明，否则本文中抗体可以理解为包括具有抗原结合能力的抗体的抗原结合片段。在本说明书中，术语“互补决定区(CDR)”是指抗体可变区中赋予抗体对抗原的结合特异性的抗体区域。上述抗体的抗原结合片段可以是包含至少一个互补决定区的抗体片段。本专利技术的实施方式提供了特异性识别或特异性结合CD66c的抗CD66c抗体或其抗原结合片段。根据本专利技术的抗CD66c抗体特异性识别和/或结合CD66c，并且抗体包括小鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体。本专利技术中的嵌合抗体是可变区的序列来源于一个物种并且恒定区的序列来源于其他物种的抗体，例如，可变区来源于小鼠并且恒定区来源于人类。本专利技术中的人源化抗体是在人体中具有低免疫原性并具有非人抗体活性的抗体。例如，人源化抗体可以通过保持非人CDR区并用人对应物替换该区域的其余部分来制备。例如，参考文献：Morrison等人，Proc.Natl.Acad.ScLUSA，81：6851-6855(1984)；Morrison和Oi，Adv.Immunol.，44：65-92(1988)；Verhoeyen等人，Science，239：1534-1536(1988)；Padlan，Molec.Immun.，28：489-498(1991)；Padlan，Molec.Immun.，31(3)：169-217(1994)。本专利技术中的抗体片段不受限制，只要该抗体片段特异性识别CD66c表位并包括轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)即可。抗体片段可以选自由Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、dsFv和CDR组成的组。特别地，scFv是通过用接头多肽将重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)连接而制备为单链的抗体片段。根据本专利技术的小鼠抗体或嵌合抗体的实例可以是抗体或其抗原结合片段，其包括选自由包含SEQIDNO：1至3的氨基酸序列的VHCDR的氨基酸序列和包含SEQIDNO：4至6的氨基酸序列的VLCDR的氨基酸序列组成的组中的至少一种。小鼠抗体或嵌合抗体的实例的CDR和可变区总结于下表1中。具体地，本专利技术的抗体的实例可包括作为VHCDR的SEQIDNO：1(CDR1)、SEQIDNO：2(CDR2)和SEQIDNO：3(CDR3)和/或作为VLCDR的SEQIDNO：4(CDR1)、SEQIDNO：5(CDR2)和SEQIDNO：6(CDR3)。小鼠抗体或嵌合抗体可包含含有SEQIDNO：7的氨基酸序列的VH区以及含有SEQIDNO：8的氨基酸序列的VL区。本专利技术涉及预防或治疗选自癌症和癌症转移的疾病的药物组合物、试剂盒或方法，该药物组合物、试剂盒或方法包括小鼠抗体或嵌合抗体作为活性成分。本专利技术还涉及预防或治疗选自癌症和癌症转移的疾病的药物组合物，该药物组合物包含小鼠抗体或嵌合抗体作为活性成分，例如由以保藏号KCLRF-BP-00230保藏的杂交瘤细胞产生的包含CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的抗CD66c抗体或其抗原结合片段。该杂交瘤细胞于2010年2月22日在韩国细胞系研究基金会(KCLRF)保藏为′8F5′，并且以保藏号为KCLRF-BP-00230接收，该杂交瘤细胞已在KR10-1214177中详细描述。癌症可以为CD66c阳性实体癌，例如CD66c阳性肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌或前列腺癌，优选为结肠癌、胃癌或肝癌。癌症和癌症转移的预防、抑制或治疗的用途可以例如减小实体癌或实体癌的细胞大小，或诱导或促进肿瘤消退。本专利技术可以通过使用小鼠抗体或嵌合抗体中的抗CD66c抗体8F5的氨基酸序列和人的构架序列来制备人源化抗体。从重组人源化抗体的候选物中，基于表达程度、聚集和细胞结合程度，选择其中表达正常发生，由于蛋白质本身不稳定性小而蛋白质聚集很少，并且对靶抗原阳性细胞的结合能力与嵌合抗体相似的重组人源化抗体。具体而言，细胞结合谱与嵌合抗体相似，通过将抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗CD66c(分化簇66c)抗体或其抗原结合片段，包括以下互补决定区(CDR)：CDR‑H1，包含SEQ ID NO：1或9的氨基酸序列，CDR‑H2，包含SEQ ID NO：2或10的氨基酸序列，CDR‑H3，包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，CDR‑L1，包含SEQ ID NO：4、11或12的氨基酸序列，CDR‑L2，包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，以及CDR‑L3，包含SEQ ID NO：6或13的氨基酸序列，条件是，不包括包含由SEQ ID NO：1、2、3、4、5和6的氨基酸序列组成的CDR的抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.14 KR 10-2016-01513591.一种抗CD66c(分化簇66c)抗体或其抗原结合片段，包括以下互补决定区(CDR)：CDR-H1，包含SEQIDNO：1或9的氨基酸序列，CDR-H2，包含SEQIDNO：2或10的氨基酸序列，CDR-H3，包含SEQIDNO：3的氨基酸序列，CDR-L1，包含SEQIDNO：4、11或12的氨基酸序列，CDR-L2，包含SEQIDNO：5的氨基酸序列，以及CDR-L3，包含SEQIDNO：6或13的氨基酸序列，条件是，不包括包含由SEQIDNO：1、2、3、4、5和6的氨基酸序列组成的CDR的抗体。2.根据权利要求1所述的抗CD66c抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体的重链可变区包含选自由包含SEQIDNO：23、24、25、26或27的氨基酸序列的构架序列(V-FR1)、包含SEQIDNO：33、34、35、36或37的氨基酸序列的构架序列(V-FR2)、包含SEQIDNO：43、44、45、46或47的氨基酸序列的构架序列(V-FR3)和包含SEQIDNO：53、54、55、56或57的氨基酸序列的构架序列(V-FR4)组成的组中的至少一种。3.根据权利要求1所述的抗CD66c抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体的轻链可变区包含选自由包含SEQIDNO：29、30或31的氨基酸序列的构架序列(L-FR1)、包含SEQIDNO：39、40或41的氨基酸序列的构架序列(L-FR2)、包含SEQIDNO：49、50或51的氨基酸序列的构架序列(L-FR3)、包含SEQIDNO：59、60或61的氨基酸序列的构架序列(L-FR4)组成的组中的至少一种。4.根据权利要求1所述的抗CD66c抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO：14、15、16、17或18的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：19、20或21的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的抗CD66c抗体或其抗原结合片段，其中，抗ANS试剂的抗体的荧光变化性在62℃下小于200％。6.根据权利要求1所述的抗CD66c抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段是抗CD40抗体的scFv、(scFv)2、Fab、Fab′或F(ab′)2。7.一种用于预防或治疗选自癌症和癌症转移的疾病的药物组合物，包含根据权利要求1至6中任一项所述的抗CD66c抗体或其抗原结合片段。8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中，所述癌症是CD66c阳性实体癌。9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述实体癌是CD66c阳性的肺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌或前列腺癌。10.根据权利要求7所...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹相淳，洪权杓，金素雪，池吉龙，林英勋，
申请(专利权)人：泰华有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR