抗G-CSF抗体及其用途制造技术

本申请披露了制备抗G‑CSF抗体的方法、抗G‑CSF抗体、筛选抗G‑CSF抗体的活性的方法、抗G‑CSF抗体的药物组合物、含有抗G‑CSF抗体的试剂盒，以及使用抗G‑CSF抗体治疗疾病的方法。

Anti-g-csf antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗G-CSF抗体及其用途本申请要求于2017年2月7日提交的美国临时专利申请序列号62/455,991的优先权，将其全部内容通过引用特此并入。
技术介绍
在发达国家癌症是死亡的主要原因之一，并且每年全球有超过1400万新发癌症病例。遗传和环境因素可导致癌症，并且癌症风险随着年龄的增长而显著增加。在发展中国家随着人们寿命的延长以及生活方式的改变，癌症发生率也在增加。免疫系统激活失效和慢性炎症可以支持癌症生长。感染或炎症通常与细胞因子的释放有关，细胞因子在感染的清除中起生物学作用。在慢性炎症期间，这些相同的细胞因子可在维持炎症和疾病症状中起重要作用。此外，越来越多的证据表明细胞因子可以通过改变神经元信号传导来影响疼痛。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在癌症和慢性炎性疾病(如关节炎)中起重要作用。
技术实现思路
根据本披露的一个方面，提供了分离的或纯化的、结合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：1或在其中具有保守取代的SEQIDNO：1所示的重链CDR1；如SEQIDNO：2或在其中具有保守取代的SEQIDNO：2所示的重链CDR2；如SEQIDNO：3或在其中具有保守取代的SEQIDNO：3所示的重链CDR3；如SEQIDNO：4或在其中具有保守取代的SEQIDNO：4所示的轻链CDR1；如SEQIDNO：5或在其中具有保守取代的SEQIDNO：5所示的轻链CDR2；以及如SEQIDNO：6或在其中具有保守取代的SEQIDNO：6所示的轻链CDR3。在一种情况下，分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：7所示的重链可变区和如SEQIDNO：8所示的轻链可变区。在另一种情况下，这种抗体被称为1B11。根据本披露的另一方面，提供了分离的或纯化的、结合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：9或在其中具有保守取代的SEQIDNO：9所示的重链CDR1；如SEQIDNO：10或在其中具有保守取代的SEQIDNO：10所示的重链CDR2；如SEQIDNO：11或在其中具有保守取代的SEQIDNO：11所示的重链CDR3；如SEQIDNO：12或在其中具有保守取代的SEQIDNO：12所示的轻链CDR1；如SEQIDNO：13或在其中具有保守取代的SEQIDNO：13所示的轻链CDR2：以及如SEQIDNO：14或在其中具有保守取代的SEQIDNO：14所示的轻链CDR3。在一种情况下，分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：15所示的重链可变区和如SEQIDNO：16所示的轻链可变区。在另一种情况下，这种抗体被称为3B3。根据本披露的另一方面，提供了分离的或纯化的、结合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：24、SEQIDNO：27、SEQIDNO：28、SEQIDNO：29或SEQIDNO：30所示的重链，在其中均具有保守取代；以及如SEQIDNO：23、SEQIDNO：25或SEQIDNO：26所示的轻链，在其中均具有保守取代。根据本披露的另一方面，提供了编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的核酸。在一种情况下，本文所述的抗G-CSF抗体具有由SEQIDNO：17编码的可变重链和由SEQIDNO：18编码的可变轻链。在另一种情况下，本文所述的抗G-CSF抗体具有由SEQIDNO：19编码的可变重链和由SEQIDNO：20编码的可变轻链。可以制备表达载体和/或宿主细胞，该表达载体和/或宿主细胞包含本文所述或编码本文所述的多肽序列的核酸序列。在一些实施方式中，本文所述的分离的抗G-CSF抗体或其抗原结合片段包含2nM或更小的对G-CSF的结合亲和力(KD)，所述结合亲和力是在37℃下通过表面等离子共振测量的。在一些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段可以是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD，或自其衍生。当抗体或其抗原结合片段是IgG时，IgG可以是IgG1、IgG2a、IaG2b、IgG3或IgG4。在一些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段在一些情况下可包含Fc区的部分或全部。在一些实施方式中，本文所述的抗体可以是例如单克隆抗体、移植抗体(graftedantibody)、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体等。在一些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段还可以是例如去免疫(de-immunized)抗体。在一些实施方式中，抗原结合片段可以是Fab片段、Fab′片段、F(ab′)2片段、Fv片段、scFv片段、单链结合多肽、Fd片段、可变重链、可变轻链、dAb片段、单域抗体等。在一些实施方式中，已经工程化了分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段，用于提高G-CSF从受试者体内循环的清除。在一些实施方式中，双特异性抗体结合G-CSF和Fc受体以允许提高结合的G-CSF从受试者体内循环的清除率。在一些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段可以与治疗剂缀合。治疗剂可以是例如毒素、药物、酶、细胞因子、放射性核素、光动力剂等。在一些实施方式中，毒素可以是例如蓖麻毒素A链(ricinAchain)、突变型假单胞菌外毒素(mutantPseudomonasexotoxins)、白喉类毒素(diphtheriatoxoid)、链黑霉素(streptonigrin)、博霉素(boamycin)、皂草素(saporin)、白树毒素(gelonin)、商陆抗病毒蛋白(pokeweedantiviralprotein)等。在一些实施方式中，药物可以是例如柔红霉素(daunorubicin)、甲氨蝶呤(methotrexatee)、卡奇霉素(calicheamicin)或本领域已知的其他治疗剂。在一些实施方式中，放射性核素包括但不限于放射性金属。在一些实施方式中，细胞因子可以是例如转化生长因子(TGF；例如，TGF-β)、白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)或肿瘤坏死因子(TNF)。在一些实施方式中，光动力剂可以是例如光卟啉(photoporphyrin)或其衍生物。根据本披露的另一方面，提供了药物组合物，该药物组合物包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方式中，药物组合物进一步包含血管生成抑制剂，该血管生成抑制剂可以是例如抗VEGF剂或化疗剂。在一些实施方式中，药物组合物可以配制用于口服、舌下、经由吸入、透皮、皮下、静脉内、动脉内、关节内、关节周围或肌肉内施用。根据本披露的另一方面，提供了治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的药物组合物。在一些实施方式中，癌症可以是例如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌或皮肤癌。根据本披露的另一方面，提供了治疗有需要的受试者的关节炎的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的药物组合物。在一些实施方式中，药物组合物可以通过静脉内、口服、舌下、经由吸入、透皮、皮下、动脉内、关节内、关节周围或肌肉内施用。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段的施用抑制或中和G-CSF活性。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合粒细胞集落刺激因子(G‑CSF)的分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：1或在其中具有保守取代的SEQ ID NO：1所示的重链CDR1；如SEQ ID NO：2或在其中具有保守取代的SEQ ID NO：2所示的重链CDR2；如SEQ ID NO：3或在其中具有保守取代的SEQ ID NO：3所示的重链CDR3；如SEQ ID NO：4或在其中具有保守取代的SEQ ID NO：4所示的轻链CDR1；如SEQ ID NO：5或在其中具有保守取代的SEQ ID NO：5所示的轻链CDR2；以及如SEQ ID NO：6或在其中具有保守取代的SEQ ID NO：6所示的轻链CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.07 US 62/455,9911.一种结合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：1或在其中具有保守取代的SEQIDNO：1所示的重链CDR1；如SEQIDNO：2或在其中具有保守取代的SEQIDNO：2所示的重链CDR2；如SEQIDNO：3或在其中具有保守取代的SEQIDNO：3所示的重链CDR3；如SEQIDNO：4或在其中具有保守取代的SEQIDNO：4所示的轻链CDR1；如SEQIDNO：5或在其中具有保守取代的SEQIDNO：5所示的轻链CDR2；以及如SEQIDNO：6或在其中具有保守取代的SEQIDNO：6所示的轻链CDR3。2.如权利要求1所述的分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：7所示的重链可变区和如SEQIDNO：8所示的轻链可变区。3.一种结合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：9或在其中具有保守取代的SEQIDNO：9所示的重链CDR1；如SEQIDNO：10或在其中具有保守取代的SEQIDNO：10所示的重链CDR2；如SEQIDNO：11或在其中具有保守取代的SEQIDNO：11所示的重链CDR3；如SEQIDNO：12或在其中具有保守取代的SEQIDNO：12所示的轻链CDR1；如SEQIDNO：13或在其中具有保守取代的SEQIDNO：13所示的轻链CDR2；以及如SEQIDNO：14或在其中具有保守取代的SEQIDNO：14的轻链所示CDR3。4.如权利要求3所述的分离的或纯化的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO：15所示的重链可变区和如SEQIDNO：16所示的轻链可变区。5.一种核酸，该核酸编码如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。6.一种宿主细胞或表达载体，该宿主细胞或表达载体包含如权利要求5所述的核酸。7.如权利要求1-6中任一项所述的分离的抗G-CSF抗体或其抗原结合片段，该抗G-CSF抗体或其抗原结合片段包含约2nM或更小的对G-CSF的结合亲和力(KD)，所述结合亲和力是在37℃下通过表面等离子共振测量的。8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体是IgG、IgM、IgE、IgA、IgD或自其衍生。9.如权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体是选自由以下组成的组的IgG：IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgG4。10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含Fc区。11.如权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、移植抗体、嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体，其中所述抗体是去免疫抗体。13.如权利要求1所述的抗原结合片段，其中该抗原结合片段选自由以下组成的组：Fab片段、Fab′片段、F(ab′)2片段、Fv片段、scFv片段、单链结合多肽、Fd片段、可变重链、可变轻链和dAb片段。14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，缀合至治疗剂。15.如权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中该治疗剂选自由以下组成的组：毒素、药物、酶、细胞因子、放射性核素和光动力剂。16.如权利要求15所述的抗体或其抗原结合片段，包含毒素，其中该毒素选自由以下组成的组：蓖麻毒素A链、突变型假单胞菌外毒素、白喉类毒素、链黑霉素、博霉素、皂草素、白树毒素和商陆抗病毒蛋白。17.如权利要求15所述的抗体或其抗原结合片段，包含药物，其中该药物选自由以下组成的组：柔红霉素...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨利姆·丹吉，约翰·普瑞泰尔，肯尼斯·哈德，
申请(专利权)人：ME医疗公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA