抗PD-L1抗体和IL-7融合蛋白制造技术

提供了具有通过肽接头与人IL‑7蛋白或其片段融合的PD‑L1抑制剂的融合分子。所公开的融合分子表现出协同的抗肿瘤效果。

Anti PD-L1 antibody and IL-7 fusion protein

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-L1抗体和IL-7融合蛋白
技术介绍
白细胞介素7(IL-7)是由骨髓和胸腺中的基质细胞分泌的造血生长因子。IL-7刺激多能造血干细胞分化为淋巴祖细胞。它还刺激淋巴谱系中所有细胞(B细胞、T细胞和NK细胞)的增殖。IL-7是一种对B细胞和T细胞的发育很重要的细胞因子。该细胞因子和肝细胞生长因子(HGF)形成异二聚体，其作为前祖B细胞生长刺激因子起作用。发现该细胞因子是早期T细胞发育过程中T细胞受体β(TCRβ)的V(D)J重排的辅因子。该细胞因子可以由肠上皮细胞和上皮杯状细胞局部产生，并且可以作为肠粘膜淋巴细胞的调节因子。已经在几个I期和II期临床试验中将重组IL-7安全地施用于患者。癌症患者中IL-7的人体研究表明，施用该细胞因子可以瞬时破坏CD8+和CD4+T细胞的稳态，同时CD4+CD25+Foxp3+T调节细胞的百分比相应降低。然而，没有观察到事实上的癌症消退。程序性死亡配体1(PD-L1)，也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，是40kDa的1型跨膜蛋白，其在妊娠、组织移植、自身免疫性疾病和其他疾病状态，如肝炎等特殊事件期间在抑制免疫系统中起主要作用。PD-L1与PD-1或B7.1的结合传递抑制信号，其减少淋巴结处CD8+T细胞的增殖，除此之外，PD-1还可以通过细胞凋亡控制外源性抗原特异性T细胞在淋巴结中的积累，所述凋亡通过基因bcl-2的下调来消除。已经显示PD-L1的上调可以使癌症逃避宿主免疫系统。分析来自肾细胞癌患者的肿瘤标本发现，PD-L1的高肿瘤表达与肿瘤侵袭性增加和死亡风险增加相关。许多PD-L1抑制剂作为免疫肿瘤学疗法正在开发中，并且在临床试验中显示出良好的结果。除了治疗癌症之外，PD-L1抑制还显示出治疗感染性疾病的前景。在细胞内感染的小鼠模型中，单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)诱导T细胞、NK细胞和巨噬细胞中的PD-L1蛋白表达。PD-L1阻断(例如，使用阻断抗体)导致感染小鼠的死亡率增加。阻断减少了巨噬细胞产生的TNFα和一氧化氮、减少了NK细胞产生的颗粒酶B，降低了单核细胞增生李斯特菌抗原特异性CD8T细胞(但不是CD4T细胞)的增殖。该证据表明PD-L1在细胞内感染中起积极的共刺激分子的作用。概要本公开证明，当PD-L1抑制剂通过肽接头与IL-7蛋白融合时，融合分子可以维持两种组分的结合活性。而且，所述的融合分子表现出与单独两种蛋白质的组合相当的活性。此外，使用活性降低的突变型IL-7蛋白可以实现改善的结果。因此，根据本公开的一个实施方案，提供了一种融合分子，其包含通过肽接头与人IL-7蛋白或其片段融合的PD-L1抑制剂。在一些实施方案中，所述的肽接头具有5～100个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽接头具有10～75个氨基酸。在一些实施方案中，所述的肽接头的至少20％的氨基酸残基为选自由丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸和丝氨酸构成的群组中的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽接头的至少40％的氨基酸残基为选自由丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸和丝氨酸构成的群组中的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽接头包含选自由SEQIDNO：1～5构成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述的PD-L1抑制剂是诱饵PD-1蛋白，例如结合PD-L1的无活性PD-1。在一些实施方案中，所述的PD-L1抑制剂为抗PD-L1抗体或其片段。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体具有IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的同种型。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体的片段为单链片段、Fab片段或一对Fab片段。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体为单特异性抗体或进一步具有第二特异性的双特异性抗体。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体能介导ADCC。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括重链可变区，所述的重链可变区包含分别具有SEQIDNO:6的第31～35位残基、第50～66位残基以及第99～108位残基的CDR1、CDR2和CDR3；以及轻链可变区，所述的轻链可变区包含分别具有SEQIDNO:7的第24～34位残基、第50-56位残基以及第89～97位残基的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，所述的抗PD-L1抗体或其片段包括重链可变区和轻链可变区，所述的重链可变区包含如SEQIDNO：6所示的氨基酸序列，所述的轻链可变区包含如SEQIDNO：7所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述的IL-7蛋白包含如SEQIDNO：9所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：9具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，其能够结合IL-7受体α。在一些实施方案中，根据SEQIDNO：9，所述的IL-7蛋白在142位具有选自G、A、V、C、L、I、M和F的氨基酸残基。在一些实施方案中，根据SEQIDNO：9，所述的IL-7蛋白在142位具有选自A、V、L、I、M和F的氨基酸残基。在一些实施方案中，与野生型人IL-7蛋白相比，所述的与SEQIDNO：9具有至少95％序列同一性的氨基酸序列对IL-7受体α的结合亲和力降低。在一些实施方案中，所述的IL-7蛋白包含如SEQIDNO：9所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述的融合分子包含所述的IL-7蛋白的片段。在一些实施方案中，所述的片段包含至少一个、两个、三个或所有四个α-螺旋基序。在一些实施方案中，肽接头与所述的PD-L1抑制剂的C末端残基融合，并与所述的IL-7蛋白的N末端残基融合。在一些实施方案中，所述的肽接头与所述的PD-L1抑制剂的N末端残基融合，并与IL-7蛋白的C末端残基融合。在一些实施方案中，所述的肽接头与所述的抗PD-L1抗体或其片段的轻链的N-末端残基融合。在一些实施方案中，所述的肽接头与所述的抗PD-L1抗体或其片段的重链的N末端残基融合。在一个实施方案中，还提供了分离的蛋白质，其包含如SEQIDNO：9所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：9具有至少95％序列同一性的肽，其中所述的肽能够结合IL-7受体α，但与野生型人IL-7蛋白相比，其对IL-7受体α的结合亲和力降低。在一些实施方案中，所述的肽在第142位处具有除Trp之外的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽在第142位处具有选自Ala、Gly、Cys、Leu、Ile、Met、Phe和Val的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述的肽在第142位处具有选自Ala、Leu、Ile、Met、Phe和Val的氨基酸残基。还提供了治疗有此需要的患者中的癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法需要向患者施用本公开的分子。在一些实施方案中，所述方法需要施用所公开的IL-7变体，任选地与PD-L1抑制剂一起施用。在一些实施方案中，所述的癌症选自由膀胱癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、食道癌、卵巢癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌和甲状腺癌构成的群组。附图简要说明图1，在图1A-D中，展示了一些融合分子结构。图2显示了降低IL-7蛋白活性的W142A突变的鉴定。图3证明W142A突变确实降低了抗PDL1-IL7融合分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合分子，其包含通过肽接头与人IL‑7蛋白或其能够结合IL‑7受体的片段融合的PD‑L1抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2018.01.25 CN PCT/CN2018/0741211.一种融合分子，其包含通过肽接头与人IL-7蛋白或其能够结合IL-7受体的片段融合的PD-L1抑制剂。2.如权利要求1所述的融合分子，其特征在于，所述的肽接头具有5～100个氨基酸残基。3.如权利要求2所述的融合分子，其特征在于，所述的肽接头具有10～75个氨基酸。4.如权利要求1所述的融合分子，其特征在于，所述的肽接头的至少20％的氨基酸残基为选自由丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸和丝氨酸构成的群组中的氨基酸残基。5.如权利要求1所述的融合分子，其特征在于，所述的肽接头的至少40％的氨基酸残基为选自由丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸和丝氨酸构成的群组中的氨基酸残基。6.如权利要求1所述的融合分子，其特征在于，所述的肽接头包含选自由SEQIDNO:1～5构成的群组中的氨基酸序列。7.如权利要求1～6中任一项所述的融合分子，其特征在于，所述的PD-L1抑制剂为诱饵PD-1蛋白或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。8.如权利要求7所述的融合分子，其特征在于，所述的诱饵PD-1蛋白为结合PD-L1的无活性PD-1。9.如权利要求7所述的融合分子，其特征在于，所述的抗PD-L1抗体的所述抗原结合片段为单链片段、Fab片段或一对Fab片段。10.如权利要求7所述的融合分子，其特征在于，所述的抗PD-L1抗体为单特异性抗体或进一步具有第二特异性的双特异性抗体。11.如权利要求10所述的融合分子，其特征在于，所述的抗PD-L1抗体能介导ADCC。12.如权利要求7所述的融合分子，其特征在于，所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括重链可变区，所述的重链可变区包含分别具有SEQIDNO:6的第31～35位残基、第50～66位残基以及第99～108位残基的CDR1、CDR2和CDR3；以及轻链可变区，所述的轻链可变区包含分别具有SEQIDNO:7的第24～34位残基、第50-56位残基以及第89～97位残基的CDR1、CDR2和CDR3。13.如权利要求7所述的融合分子，其特征在于，所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包括含如SEQIDNO：6所示的氨基酸序列的重链可变区，以及含如SEQIDNO：7所示的氨基酸序列的轻链可变区。14.如权利要求1～13中任一项所述的融合分子，其特征在于，所述的IL-7蛋白包含如SEQIDNO：9所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：9具有至少75％序列同一性的氨基酸序列，同时能够结合IL-7受体α。15.如权利要求13所述的融合分子，其特征在于，与野生型人IL-7蛋白相比，所述的与SEQIDNO：9具有至少75％序列同一性的氨基酸序列对IL-7受体α的结合亲和力降低。16.如权利要求15所述的融合分子，其特征在于，所述的IL-7蛋白在SEQIDNO：9的第142位具有选自G、A、V、...

【专利技术属性】
技术研发人员：方磊，崔菲菲，顾海娟，王正毅，郭炳诗，臧敬五，
申请(专利权)人：天境生物，
类型：发明
国别省市：开曼群岛,KY