一种寡肽及其衍生物和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种寡肽及其衍生物和应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术寡肽包含有‑W‑Arg‑Pro‑X‑Y‑Z结构域，其衍生物的结构通式为C17H35CO‑W‑Arg‑Pro‑X‑Y‑Z，其中，W为缺失或为疏水性氨基酸(比如W为缺失或为Ala)；X和Z为疏水性氨基酸(比如X为Leu、Phe；Z为Ala、Leu)；Y为带正电荷的氨基酸(比如Y为Lys、Arg)，实验结果显示，该类多肽能显著抑制抗流感病毒的增殖，提示其在抗流感病毒治疗中具有重要的开发和应用价值，因此可用于制备抗流感药物。

An Oligopeptide and Its Derivatives and Applications

【技术实现步骤摘要】
一种寡肽及其衍生物和应用
本专利技术属于生物医药
，更具体地说，涉及一种寡肽及其衍生物和应用。
技术介绍
流感作为严重危害人类健康的急性呼吸道传染病，每年在全球造成约5亿人患病，其中25-50万人死亡，每年在我国的发病率约为10％-30％。更令人担忧的是，近年来人感染高致流感作为严重危害人类健康的急性呼吸道传染病，每年在全球造成约5亿人患病，其中25-50万人死亡，每年在我国的发病率约为10％-30％。更令人担忧的是，近年来人感染高致病性、高致死率的流感病毒H5N1和H1N1亚型的数量不断增多，且死亡率相当高。流感病毒肆虐的主要原因之一就是其抗原的变异能力强，这使得疫苗的免疫保护作用有限，况且疫苗只能对已知的流感病毒亚型有预防作用，而对因抗原性漂移或转换所产生的新型流感病毒无效。目前常用的抗流感药物主要有离子通道阻断剂和神经氨酸酶抑制剂两大类。离子通道阻断剂以金刚烷胺和金刚乙胺为代表，其主要是通过抑制甲型流感病毒基质蛋白-2，阻止病毒穿入宿主细胞和释放核酸，从而达到抑制甲型流感病毒增殖的目的。然而，金刚烷胺可引起明显的胃肠道不良反应、中枢神经毒副作用和交叉耐药。因此，WHO的专家已经建议停止使用离子通道阻断剂作为抗流感药物。神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)抑制剂，主要包括扎那米韦(Zanamivir)和奥司他韦(Oseltamivir)。该类药物的作用机制是通过与病毒的NA特异性结合而阻断其活性，导致病毒不能从宿主细胞表面释放并促进病毒自我凝集，从而发挥抗流感病毒作用。但是研究表明NA抑制剂在治疗应用过程中容易产生耐药和交叉耐药，因此开发一种新型抗流感病毒药物就显得尤为紧迫和重要。流感病毒囊膜上存在的血凝素(Hemagglutinin，HA)及神经氨酸酶(NA)分别对流感病毒感染过程以及病毒从宿主细胞中出芽起到重要作用。前者通过与宿主细胞膜上的唾液酸受体结合，当病毒进入内涵体之后，通过其构象的变化使病毒和细胞融合。在感染末期，NA在病毒粒子自宿主细胞出芽或游离时，起到剪切自身或宿主细胞膜上的唾液酸残基的作用，从而确保新的病毒的释放。因此，HA蛋白可成为抗流感病毒药物的潜在靶点。通过特异性结合HA蛋白从而抑制其与宿主细胞膜受体结合，进而达到防止流感病毒感染的作用。目前，许多研究报道含有唾液酸聚合物可有效抑制流感病毒进入宿主细胞。多肽可有效抑制HA蛋白与受体蛋白的相互作用。因此，筛选到特异性结合HA蛋白并有效抑制其作用的多肽显得尤为重要。
技术实现思路
1.要解决的问题针对现有的抗流感病毒肽类存在分子量较大、难于合成的问题，本专利技术提供一种寡肽及其衍生物和应用，这类多肽氨基酸数目均小于7个，分子量小，易于合成且具有抑制流感病毒活性，能够与血凝素位点特异性结合，提示其在抗流感病毒治疗中具有重要的开发和应用价值。2.技术方案为了解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案如下：一种寡肽，其序列包含有W-Arg-Pro-X-Y-Z结构域，其中，W为缺失或为疏水性氨基酸；X和Z为疏水性氨基酸；Y为带正电荷的氨基酸。一种寡肽衍生物，以硬脂酸修饰上述多肽序列得到，其结构式为C17H35CO-W-Arg-Pro-X-Y-Z，其中，W为缺失或为疏水性氨基酸；X和Z为疏水性氨基酸；Y为带正电荷的氨基酸。更进一步地，所述的W为缺失或为Ala；X为Leu、Phe中的一种；Y为Lys、Arg中的一种，Z为Ala、Leu中的一种。更进一步地，所述的寡肽衍生物分别为：寡肽Ⅰ、C17H35CO-Arg-Pro-Leu-Lys-Ala；或寡肽Ⅱ、C17H35CO-Arg-Pro-Leu-Arg-Leu；或寡肽Ⅲ、C17H35CO-Arg-Pro-Phe-Arg-Ala；或寡肽Ⅳ、C17H35CO-Ala-Arg-Pro-Leu-Arg-Ala。上述的寡肽或寡肽衍生物在制备药物中的应用。上述的寡肽或寡肽衍生物在制备预防或治疗流感疾病的药物中的应用。更进一步地，所述的流感疾病包括由H1N1、H3N2、H5N1、H7N9等多种流感病毒中的一种或几种同时所导致的流感疾病所导致的流感疾病。一种用于预防或治疗流感疾病的药物，包括上述的寡肽衍生物中的一种或几种混合，以及药学上可接受的辅料。更进一步地，药物的剂型包括注射剂、冻干粉针、微球、粉末、粉雾剂、胶囊、片剂、药丸、鼻喷剂、气雾剂、肠溶衣、毫微球、微乳或复乳。一种用于预防或治疗流感疾病的药物，包括上述的寡肽，以及药学上可接受的辅料。3.有益效果相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术的寡肽衍生物具有抗流感病毒活性，能够与血凝素位点特异性结合；(2)本专利技术筛选得到的具有抗流感病毒活性的一类多肽，该类多肽的氨基酸数目均小于7个，实验结果显示，该类多肽能显著抑制抗流感病毒的增殖，提示其在抗流感病毒治疗中具有重要的开发和应用价值，因此可用于制备抗流感药物；(3)本专利技术与现有文献报道的抗流感病毒肽类相比较，现有的抗流感病毒肽类分子量较大，难于合成；而本专利技术合成的寡肽由天然氨基酸组成，分子量小，易于合成且具有抑制流感病毒活性，是一种高效、理想的抗病毒药物。附图说明图1为本专利技术中寡肽Ⅱ体内抗流感药效学试验结果图；图2为本专利技术中寡肽Ⅱ与血凝素的相互结合模式示意图；图3为本专利技术中寡肽Ⅰ与血凝素的相互结合模式示意图；图4为本专利技术中寡肽Ⅲ与血凝素的相互结合模式示意图；图5为本专利技术中寡肽Ⅳ与血凝素的相互结合模式示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。实施例1病毒毒力测定(TCID50)本专利技术中使用的流感H1N1(FM1)、H3N2(N3)、H5N1和H7N9病毒抗原均为具有血凝活性的病毒灭活抗原，均是能致病的，H1N1、H3N2是人流感，H5N1和H7N9是禽流感，以H7N9为例，进行病毒毒力测定，证明其活性，具体实验步骤及结果如下：将处于对数生长期的MDCK细胞(流感病毒易感的犬肾传代细胞株)点板铺层单层后，将流感病毒H1N1连续作10倍浓度稀释，将10-2～10-10的稀释度的病毒接种于MDCK细胞中，于37℃吸附1h后，用PBS冲洗2次后换用维持液继续培养，设正常细胞对照，均为4个复孔。每天在倒置显微镜下观察细胞病变，记录病变程度和孔数，将细胞病变率达50％及以上的培养孔计为病变孔，根据Reed-Muench法计算病毒的TCID50(mediantissuecultureinfectivedosage)。表1病毒毒力测定(TCID50)结果距离比例＝(高于50％病变率的百分数-50％)/(高于50％病变率的百分数-低于50％病变率的百分数)＝(60-50)/(60-20)＝10/40＝0.25；lgTCID50＝距离比×稀释度对数之间的差+高于50％病变率的稀释度的对数＝0.25×(-1)+(-3)＝-3.25TCID50＝10-3.25/0.1mL含义：将该病毒稀释103.25接种50uL可使50％的细胞发生病变。实施例2本专利技术以蛋白质数据库(ProteinDataBank)血凝素蛋白(1HGG)晶体结构作为研究的依据，筛选出一系列具有抗病毒活性的寡肽，其序列包含有W-Arg-Pro-X-Y-Z结构域，在短肽W-Arg-Pro-X-Y-Z的基础上用硬脂酸进行修饰得到一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种寡肽，其特征在于：其序列包含有W‑Arg‑Pro‑X‑Y‑Z结构域，其中，W为缺失或为疏水性氨基酸；X和Z为疏水性氨基酸；Y为带正电荷的氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种寡肽，其特征在于：其序列包含有W-Arg-Pro-X-Y-Z结构域，其中，W为缺失或为疏水性氨基酸；X和Z为疏水性氨基酸；Y为带正电荷的氨基酸。2.一种寡肽衍生物，其特征在于：以硬脂酸修饰权利要求1中所述的多肽序列得到，其结构式为C17H35CO-W-Arg-Pro-X-Y-Z，其中，W为缺失或为疏水性氨基酸；X和Z为疏水性氨基酸；Y为带正电荷的氨基酸。3.根据权利要求2所述的寡肽衍生物，其特征在于：所述的W为缺失或为Ala；X为Leu、Phe中的一种；Y为Lys、Arg中的一种，Z为Ala、Leu中的一种。4.根据权利要求2或3中所述的寡肽衍生物，其特征在于：所述的寡肽衍生物分别为：寡肽Ⅰ、C17H35CO-Arg-Pro-Leu-Lys-Ala；或寡肽Ⅱ、C17H35CO-Arg-Pro-Leu-Arg-Leu；或寡肽Ⅲ、C17H35CO-Arg-Pro-Phe-Arg-Ala；或寡肽Ⅳ、C17H35CO-A...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐寒梅，牛淼淼，
申请(专利权)人：南京安吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32