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一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器制造技术

技术编号:22236513 阅读:34 留言:0更新日期:2019-10-09 16:31
本发明专利技术公开一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器,所述方法包括下述步骤:S1、制备Fe3O4纳米簇;S2、制备Fe3O4@SiO2微球;S3、制备Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳结构材料;S4、制备纳米金颗粒;S5、制备SiO2纳米颗粒;S6、制备Au‑SiO2‑DNA2;S7、构建光电化学传感器。将本发明专利技术用于CEA的检测具有检出限低、选择性好、稳定性好、检测时间短等特点。

A Photoelectrochemical Sensor for Carcinoembryonic Antigen Based on Superparamagnetic Nanocomposite

【技术实现步骤摘要】
一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器
本专利技术涉及分析化学
,具体涉及一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器。
技术介绍
癌胚抗原(CEA)是一种存在于结肠癌、正常胚胎肠道、胰腺和肝内的一种蛋白多糖复合物,可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌,是一个广谱性肿瘤标志物,它能向人们反映出多种肿瘤的存在。有研究发现,许多非肿瘤的组织器官也表达出CEA,且CEA的出现对组织器官的机体具有保护作用。同时,CEA分子还是细胞粘附分子家族的成员,它们在正常组织中的分布也相当广泛,故CEA不仅是恶性肿瘤的标志,也是一些慢性炎症的标志。目前已有的癌胚抗原检测方法主要有荧光免疫分析、酶联免疫分析、化学发光免疫分析等。这些方法虽然灵敏度与特异性都较为优越,却都有些不足。化学发光免疫分析和荧光免疫分析操作步骤繁琐,对仪器设备的要求高,而在实际检测中,酶极易失活,这限制了酶联免疫分析的应用。因此以上的分析方法已经难以满足人们的检测要求。
技术实现思路
专利技术目的:本专利技术目的在于针对现有技术的不足,提供一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器,将其用于CEA的检测具有检出限低、选择性好、稳定性好、检测时间短等特点。技术方案:本专利技术所述一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器,所述传感器的制备方法如下:S1、制备Fe3O4纳米簇;S2、制备Fe3O4@SiO2微球;S3、制备Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳结构材料:取得到的Fe3O4@SiO2微球分散于水中,依次加入柠檬酸钠溶液、硝酸镉溶液和浓氨水,每种反应物加入后超声分散,最后加入硫脲溶液,搅拌加热至35-85℃反应1.5-5h,醇洗,磁吸后定容在乙醇中;S4、制备纳米金颗粒;S5、制备SiO2纳米颗粒;S6、制备Au-SiO2-DNA2:取得到的SiO2纳米颗粒分散于乙醇中,加入APTES,60-100℃下加热1.5-4h,得到NH2-SiO2;将得到的纳米金颗粒和NH2-SiO2加入超纯水中,室温下搅拌6-19h后得到Au-SiO2,注入SH-DNA(DNA2)溶液,搅拌,得到Au-SiO2-DNA2;S7、构建光电化学传感器:将得到的Fe3O4@SiO2@CdS溶液与壳聚糖乙酸溶液混合均匀,30-80℃下反应0.5-2h,用氢氧化钠溶液和超纯水依次清洗数次,于37-57℃下分散在戊二醛中反应0.5-2h,随后磁吸收集产物并用超纯水洗涤,加入NH2-DNA1,在2-8℃下过夜反应,并用乙醇胺在2-9℃下封闭1-3h后,于27-57℃下加入CEA适配体和Au-SiO2-DNA2实现杂交反应,即得;其中,每种寡核苷酸加入后孵育05-2h。优选地,S1中,Fe3O4纳米簇的制备方法如下:依次将0.188-0.488g聚丙烯酸,0.035-0.165g三氯化铁加入10-37mL一缩二乙二醇中,搅拌加热至200-240℃并维持1h,快速注入1.0-2.9mL0.15-0.55mol/LNaOH的一缩二乙二醇溶液,于215-240℃继续搅拌0.5-1h,反应结束后将反应液用乙醇定容至27-57mL,离心收集,再加入4-17mL超纯水和4-15mL乙醇离心洗涤,磁吸数次后将产物分散在1.5-5mL水中。优选地,S2中,Fe3O4@SiO2微球的制备方法如下:将得到的Fe3O4纳米簇超声分散在10-40mL乙醇中,超声0.5-3min后加入0.5-2mL质量浓度为26%的浓氨水,继续超声0.5-2min后加入30-90μL硅酸四乙酯,超声反应15-50min,醇洗三次,水洗两次,保存在2-8mL乙醇中。优选地,S3中,Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳结构材料的具体制备方法如下:取得到的Fe3O4@SiO2微球分散于15-45mL水中,依次加入0.5-2.5mL0.05-0.3mol/L柠檬酸钠溶液、1.5-3.5mL0.02-0.25mol/L硝酸镉溶液和0.15-0.55mL质量浓度为26%的浓氨水,每种反应物加入后超声分散3-9min,最后加入0.35-0.95mL0.1-0.5mol/L硫脲溶液,搅拌加热至35-85℃反应1.5-5h,醇洗2-6次,磁吸三次后定容在3-8mL乙醇中。优选地,纳米金颗粒的制备方法如下:将0.5-3mL2-9mmol/L的氯金酸和0.5-2mL2.5-8mmol/L柠檬酸钠溶液注入到10-28mL超纯水中并剧烈搅拌5-20min,迅速加入300-900μL0.05-0.2mol/L硼氢化钠溶液,搅拌2-8h后,在2-10℃环境中避光保存。优选地,S5中,SiO2纳米颗粒的制备方法如下:将25.5-75.5mL乙醇和2.5-6.5mLTEOS混合搅拌5-20min,得到混合物A;将14-28mL乙醇和7-25mL超纯水混合搅拌5-20min后加入3-17mL质量浓度为26%的浓氨水,继续搅拌5-20min,得到混合物B;将混合物A快速倒入混合物B中,室温下搅拌3-12h后得到SiO2纳米颗粒,反应结束后离心收集SiO2纳米颗粒,醇洗1-5次后水洗1-4次。优选地,S6中,Au-SiO2-DNA2的具体制备方法如下:取得到的SiO2纳米颗粒分散于20-60mL乙醇中,加入20-100μLAPTES,60-100℃下加热1.5-4h,得到NH2-SiO2;将得到的纳米金颗粒和5-20mgNH2-SiO2加入5-20mL超纯水中,室温下搅拌6-19h后得到Au-SiO2,注入10μL10-20μmol/LSH-DNA(DNA2)溶液,搅拌7-18h,得到Au-SiO2-DNA2。优选地,S7中,构建光电化学传感器的具体方法如下:将得到的Fe3O4@SiO2@CdS溶液与1.3-5mL质量浓度0.05-0.2%的壳聚糖乙酸溶液混合均匀,30-80℃下反应0.5-2h,用0.5-2mol/L氢氧化钠溶液和超纯水依次清洗数次,于37-57℃下分散在2-8mL质量浓度为2.5-10%的戊二醛中反应0.5-2h,随后磁吸收集产物并用超纯水洗涤,加入0.5-2mLNH2-DNA1,在2-8℃下过夜反应,并用7-20mmol/L乙醇胺在2-9℃下封闭1-3h后,于27-57℃下加入0.5-2mL80-200nmol/LCEA适配体和0.5-2mLAu-SiO2-DNA2实现杂交反应,即得;其中,每种寡核苷酸加入后孵育0.5-3h。其中,在每个步骤之间,用洗涤液洗涤电极以除去未杂交的寡核苷酸;洗涤液为0.01mol/LTris-HCl和0.01mol/LNaCl溶液的混合液,pH为7.4。与现有技术相比,本专利技术的有益效果为:本专利技术中提供了一种以Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳磁光纳米结构材料构建光电化学生物传感器用以定量检测CEA,利用核酸适配体与CEA之间的特异性反应,极大提高了检测方法的选择性,构建的光电化学传感器用于CEA的检测,其具有检出限低、选择性好、稳定性好、检测时间短等特点。CdS是一种非常重要的半导体材料,其禁带宽度为2.41eV,由于在可见光范围内有着卓越的吸光能力,CdS在光催化,太阳能电池,光电化学传感器等多种领域被广泛应用,而超顺磁性Fe3O4纳米材料与之结合,不仅发挥了CdS优本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器,其特征在于,所述传感器的制备方法如下:S1、制备Fe3O4纳米簇;S2、制备Fe3O4@SiO2微球;S3、制备Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳结构材料:取得到的Fe3O4@SiO2微球分散于水中,依次加入柠檬酸钠溶液、硝酸镉溶液和浓氨水,每种反应物加入后超声分散,最后加入硫脲溶液,搅拌加热至35‑85℃反应1.5‑5h,醇洗,磁吸后定容在乙醇中;S4、制备纳米金颗粒;S5、制备SiO2纳米颗粒;S6、制备Au‑SiO2‑DNA2:取得到的SiO2纳米颗粒分散于乙醇中,加入APTES,60‑100℃下加热1.5‑4h,得到NH2‑SiO2;将得到的纳米金颗粒和NH2‑SiO2加入超纯水中,室温下搅拌6‑19h后得到Au‑SiO2,注入SH‑DNA(DNA2)溶液,搅拌,得到Au‑SiO2‑DNA2;S7、构建光电化学传感器:将得到的Fe3O4@SiO2@CdS溶液与壳聚糖乙酸溶液混合均匀,30‑80℃下反应0.5‑2h,用氢氧化钠溶液和超纯水依次清洗数次,于37‑57℃下分散在戊二醛中反应0.5‑2h,随后磁吸收集产物并用超纯水洗涤,加入NH2‑DNA1,在2‑8℃下过夜反应,并用乙醇胺在2‑9℃下封闭1‑3h后,于27‑57℃下加入CEA适配体和Au‑SiO2‑DNA2实现杂交反应,即得;其中,每种寡核苷酸加入后孵育05‑2h。...

【技术特征摘要】
1.一种基于超顺磁纳米复合物构建癌胚抗原的光电化学传感器,其特征在于,所述传感器的制备方法如下:S1、制备Fe3O4纳米簇;S2、制备Fe3O4@SiO2微球;S3、制备Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳结构材料:取得到的Fe3O4@SiO2微球分散于水中,依次加入柠檬酸钠溶液、硝酸镉溶液和浓氨水,每种反应物加入后超声分散,最后加入硫脲溶液,搅拌加热至35-85℃反应1.5-5h,醇洗,磁吸后定容在乙醇中;S4、制备纳米金颗粒;S5、制备SiO2纳米颗粒;S6、制备Au-SiO2-DNA2:取得到的SiO2纳米颗粒分散于乙醇中,加入APTES,60-100℃下加热1.5-4h,得到NH2-SiO2;将得到的纳米金颗粒和NH2-SiO2加入超纯水中,室温下搅拌6-19h后得到Au-SiO2,注入SH-DNA(DNA2)溶液,搅拌,得到Au-SiO2-DNA2;S7、构建光电化学传感器:将得到的Fe3O4@SiO2@CdS溶液与壳聚糖乙酸溶液混合均匀,30-80℃下反应0.5-2h,用氢氧化钠溶液和超纯水依次清洗数次,于37-57℃下分散在戊二醛中反应0.5-2h,随后磁吸收集产物并用超纯水洗涤,加入NH2-DNA1,在2-8℃下过夜反应,并用乙醇胺在2-9℃下封闭1-3h后,于27-57℃下加入CEA适配体和Au-SiO2-DNA2实现杂交反应,即得;其中,每种寡核苷酸加入后孵育05-2h。2.根据权利要求1所述的光电化学检测方法,其特征在于,S1中,Fe3O4纳米簇的制备方法如下:依次将0.188-0.488g聚丙烯酸,0.035-0.165g三氯化铁加入10-37mL一缩二乙二醇中,搅拌加热至200-240℃并维持1h,快速注入1.0-2.9mL0.15-0.55mol/LNaOH的一缩二乙二醇溶液,于215-240℃继续搅拌0.5-1h,反应结束后将反应液用乙醇定容至27-57mL,离心收集,再加入4-17mL超纯水和4-15mL乙醇离心洗涤,磁吸数次后将产物分散在1.5-5mL水中。3.根据权利要求1或2所述的光电化学检测方法,其特征在于,S2中,Fe3O4@SiO2微球的制备方法如下:将得到的Fe3O4纳米簇超声分散在10-40mL乙醇中,超声0.5-3min后加入0.5-2mL质量浓度为26%的浓氨水,继续超声0.5-2min后加入30-90μL硅酸四乙酯,超声反应15-50min,醇洗三次,水洗两次,保存在2-8mL乙醇中。4.根据权利要求1或2所述的光电化学检测方法,其特征在于,S3中,Fe3O4@SiO2@CdS双重核壳结构材料的具体制备方法如下:取得到的Fe3O4@SiO2微球分散于15-45mL水中,依次加入0.5-2.5mL0.05-0.3mol...

【专利技术属性】
技术研发人员:李静李红波郭磊徐凌秋方小虎种冉尹慧方海林王伟
申请(专利权)人:盐城工学院
类型:发明
国别省市:江苏,32

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